兩種孵化溫度對中華鱉性別分化的影響

（1.河南師范大學水產學院,河南新鄉 453007；2.洛陽市漁業船舶檢驗與水產技術推廣站，河南洛陽 471000）

中華鱉（Pelodiscus sinensis），俗稱團魚、甲魚等，主要分布在越南、日本、朝鮮、俄羅斯等國，我國主要分布在長江、黃河流域[1]。中華鱉營養價值較高，具有一定藥用價值，其深受消費者喜愛。在養殖過程中，雄性中華鱉較雌性中華鱉生長速度快，因此培育全雄鱉是提高養殖效益的途徑之一[2-3]。

爬行動物的性別決定機制有染色體性別決定型和環境性別決定型。研究表明，溫度對龜鱉目中許多物種的性別有決定性影響，其中烏龜（Chinemys reevesii）[4]，中華條頸龜（Mauremys sinensis）[5]，黃喉擬水龜（Mauremys mutica）[6]等性別決定方式均屬溫度依賴型性別決定。關于中華鱉的性別分化機制，早期研究認為其溫度對中華鱉性別分化有較大的影響[7-8]。Mu等[9]對不同孵化溫度條件下的個體染色體進行了分析，發現不同個體的表型性別與性染色體類型均一致，表明溫度未影響中華鱉的性別分化。因此特設計試驗，以求探明孵化溫度與中華鱉性別比例間的關系，為人為控制中華鱉性別分化提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

實驗所用中華鱉卵來源于信陽固始縣晨源水產養殖公司同一日收集的受精鱉卵。孵出后的稚鱉前期投喂魚糜，后期以投喂鱉類專用飼料為主。

1.2 試驗方法

1.2.1 孵化

將中華鱉卵均勻埋在裝滿蛭石的塑料盆中，分別置于溫度為27℃、32℃的恒溫孵化箱中進行孵化。定期向蛭石表面噴水，維持環境濕度在80%左右。并定時翻動鱉卵保持透氣，以免鱉卵表面堵塞導致變質。

1.2.2 稚鱉飼養

出生后稚鱉體重約3～5 g，于盆中暫養2～3 d后選擇生理狀態相近、體形勻稱的健康個體，浸浴低濃度高錳酸鉀水溶液消毒并放入稚鱉池繼續培養，放養密度以50只/m2為宜。

不同溫度下孵出的稚鱉在相似環境下隔離培養，設投飼臺以供稚鱉取食。日常管理過程中保證不同孵化溫度的稚鱉生存環境相似，并及時清除剩余餌料、定期消毒，防止水質污染。

1.2.3 性別鑒定

雌鱉體較厚，背甲圓形，裙邊較寬，尾部不外露。腹甲后緣略向內凹入,尾部鈍錐體形,末端驟然變細呈點狀或者內卷，泄殖孔小且靠近尾部末端，后肢間距大；雄鱉體薄，背甲橢圓形，裙邊較窄，尾端露出裙邊。腹甲后緣弧形，尾部尖呈錐體形，泄殖孔距尾部末端有小段距離，后肢間距小[10]。

當稚鱉第二性征不易辨別時，可通過性腺組織切片辨別其性別。方法如下：取稚鱉性腺-中腎復合體（AKG），Bouin′s試劑固定18－24 h后用70%的酒精洗滌去顏色。梯度酒精洗滌脫水，每濃度處理10-30 min。將脫水后的性腺組織依次浸沒二甲苯無水酒精混合液（二甲苯：無水酒精=1∶1）10-30 min、二甲苯溶液10-30 min，使之透明。將透明處理的性腺組織依次用二甲苯：石蠟（體積比1∶1） 處理 10-20 min、56-70℃熔點的石蠟處理20-40 min，重復兩次后，將脫水透蠟的組織樣品進行包埋。使用石蠟切片機切片，于37℃水浴展片后置于50℃左右的烤片機上烤片固定。染色采用蘇木精-伊紅復染法，然后用中性樹膠封片。

2 結果與分析

2.1 孵化結果

不同溫度下中華鱉的孵化率不同（表1）。在一定溫度范圍內，隨著溫度升高，中華鱉的孵化率升高。32℃下孵化率達95.3%，27℃下孵化率較低，約為91.25%。

表1 兩種孵化溫度下受精卵孵化情況Tab.1 The situation of the fertilized eggs which hatched at two different temperature

2.2 性別鑒定結果

雄性稚鱉的精巢切片可觀察到精巢壁分外層腹膜和內層白膜，其中不規則的精細管是由白膜向內部延伸形成的。精細管間被濾泡細胞分隔，雌性稚鱉的卵巢切片可觀察到卵巢膜和基質將卵巢分成數個小室，原始的卵泡在此發育。卵原細胞無濾泡[10]。

圖1 中華鱉稚鱉精巢與卵巢比較Fig.1 Comparison of the nests and ovaries of the juvenile P.sinensis

孵化溫度對中華鱉性別分化有影響（表2）。在一定溫度范圍內，雄性孵化比例隨孵化溫度變化而改變。27℃下孵化的中華鱉雌性個體多于雄性個體，雄性個體只占36.17%；而32℃孵化的中華鱉雄性比例明顯提升，達到49.06%。

表2 兩種孵化溫度下稚鱉的性別比例Tab.2 The sex ratio of juvenile P.sinensis at two incubation temperatures.

3 討論

3.1 不同環境因素對中華鱉性別比例、孵化率及后續生長發育的影響

Georges等[11]研究表明，不同于由基因決定性別的哺乳動物和鳥類，爬行動物的性別由遺傳物質和環境因子共同決定，孵化過程中溫度是影響最大的環境因子。同時Ji等[12]認為，孵化溫度對中華鱉的性別沒有影響。本次實驗結果表明：32℃下雄性比例較高，達49.06%，27℃下雄性比例較低，為36.17%，這與朱道玉等[7]，聶劉旺等[8]的研究結果一致。本次實驗還發現，爬行動物的孵化成功率受到孵化溫度的影響。在一定溫度范圍內，孵化溫度越高，孵化成功率越高。另外王玲等[13]研究表明環境濕度對中華鱉卵的孵化率也有一定影響。中華鱉卵失水速率與孵化期環境濕度相關，受精卵內容物過于干燥將會影響胚胎成活率。環境濕度控制在80%～82%左右時，孵化率可達95%以上，且可有效縮短中華鱉孵化時間。

此外，本實驗過程中發現，同一溫度下不同直徑的中華鱉卵孵化出的稚鱉在后續生長發育過程中，稚鱉的生理狀態、質量與孵化前鱉卵的形態存在關聯。直徑、重量大的鱉卵比較小的鱉卵孵化期略長（平均長1～2 d），其孵化出的稚鱉生長速度快、存活率高。推測原因，可能是較小的鱉卵中所含營養物質有限，雖能供給正常孵化，但胚胎發育后期營養不足會影響稚鱉生長。這種特性為生產實踐中篩選中華鱉卵提供了依據，為保證稚鱉體內積存營養物質足夠供其后續健康發育及順利越冬，應選擇大小適中、外觀均勻的受精卵（卵重3 g以上，直徑1.8 cm左右）進行孵化。

研究孵化溫度對中華鱉性別分化的影響，不僅為爬行動物性別決定機制的研究提供資料，在生產實踐上也具有重要意義。養殖者可通過控制孵化溫度獲得自己所需性別的中華鱉，從而有目的地進行人工育苗。