常用血液制品病毒滅活的研究進展

王曉麗 徐濤 劉亞絨

【摘 要】科學、有效的病毒滅活工藝是確保血液制品安全的重要措施，能夠有效降低因輸注血液制品而產生的患病風險。基于此，文章以血液制品病毒滅活為研究對象，首先分析了當前常用的集中血液制品病毒滅活技術，然后討論了血液制品病毒滅活技術的發展趨勢，希望對我國血液制品安全水平的提升有所幫助。

【關鍵詞】血液制品；病毒滅活；技術

血液制品一般是指以健康人或經特異免疫的人的血漿為原材料，經過提純、分離，最后制備成血漿蛋白、人血白蛋白、人凝血因子、人免疫球蛋白或其他血液細胞有形成分的統稱。血液制品通常用于治療及被動免疫預防。需要注意的是，由于血液制品的原材料主要來源于人，理論上通過血液傳播的病毒也可通過血液制品進行傳播，因此，需要對血液制品進行全面的病毒滅活和去除工作，提高血液制品的安全性。

一、常用血液制品病毒滅活工藝研究現狀

（一）S/D處理法

S/D處理法是利用有機溶劑/表面活性劑分解脂包膜病毒的類脂膜，使其失去黏附、感染和復制能力的滅活技術，并且大多數血液制品在經過S/D處理后還能保持蛋白質的生物活性。常用有機溶劑為磷酸三丁酯（TNBP），表面活性劑有膽酸鈉、吐溫80、TritonX-45、TritonX-100等。S/D法中所使用的有機溶劑和表面活性劑需要在滅活之后去除，以免對相關蛋白的回收率和純度造成影響。根據歐洲藥典，S/D處理的最后產物所允許的殘留量分別是TNBP小于2和TritonX-100少于5，事實上，在發達國家，大多數S/D血漿中的添加劑檢測閾值分別低于0.5和1，其毒性水平比歐洲藥典的低得多。需要注意的是，該方法只適用于對脂包膜病毒的滅活處理，對于無外殼病毒則需要輔助使用其他滅活方法，而且滅活劑的去除過程不僅復雜而且較為昂貴。

（二）低pH孵化法

低pH值孵化法是指在pH=4，溫度為30～37℃的環境下，持續保溫20h，使病毒中的某些成分發生變質作用，從而降低病毒復制能力的技術。通常情況下，pH值越低，其滅活能力越強。在具體應用時，一般通過加入鹽酸來制造酸性環境。免疫球蛋白在低pH值條件下蛋白質功能活性較穩定。國外學者在研究人細小病毒4（PARV4）的失活中，用1mol/L鹽酸將血液制品調整到目標pH值，通過比較pH=3.5時，不同孵化時間（10min～6h）內人細小病毒4（PARV4）、細小病毒B19（B19V）和鼠微小病毒（MVM）的滅活滴度情況。結果顯示B19V在pH=3.5酸化情況下，幾乎立即喪失感染性，且病毒滴度下降；PARV4病毒滴度下降；MVM病毒滴度幾乎不改變。這3種病毒對低pH值處理的抵抗力為MVM>PARV4>B19V。由此可見，該方法有著良好的脂包膜病毒滅活效果，而對于非脂包膜病毒的滅活作用卻十分有限；此外，該技術的滅活周期較長，需要孵化21天。

（三）巴氏消毒法

巴氏消毒法是指在60℃的環境下，對血液制品進行連續加熱處理（≥10h），從而破壞病毒蛋白質和核算結構，使其失去復制能力的滅活技術。同時，該技術能夠有效削弱病毒的傳染能力。但是，該方法常用于對血漿、免疫球蛋白、凝血因子、抗凝血劑以及蛋白酶抑制劑等產品的病毒滅活工作。該方法已公認能大大降低病毒的危險性，至今尚未見有病毒傳播的報道。需要注意的是，巴氏消毒法雖然是常用的病毒滅活方法，但是其所采用的高溫條件會使血漿蛋白等具有熱不穩定的產品過度變性，存在蛋白質結構發生改變而喪失蛋白聚合及功能活性的風險，因此需要加入穩定劑以減小病毒滅活的速率。

（四）干熱法

干熱法是指對凍干的血液制品進行熱處理，當前主要用于對凝血因子的處理。該技術的原理同巴氏消毒法類似，但是該技術的處理溫度為60～100℃，持續時間為30min～4d，并且需要加入穩定劑防止血漿蛋白的過度變性。在具體應用時，一般溫度越高，病毒滅活時間就越短。典型的處理條件包括60℃時，處理時間為96h；80℃時，處理時間為72h；100℃時，處理時間為30min。影響干熱滅活凝血因子中病毒效果的因素很多，如制品中保護劑的類型及其加量、凍干效果等，因此在實際生產過程巾要嚴格操作。此外，干熱法在應用時，其產率較其他技術而言會有10%～30%的降幅，產品的可利用性也相應降低，進而導致生產成本增加。

（五）納米膜過濾

納米膜過濾技術主要利用病毒顆粒與蛋白分子大小差異，通過納米級的濾膜將病毒除去。尹惠瓊等通過PegasusSV4納米膜對不同企業提供的5%靜注人免疫球蛋白樣品和重組人源化單克隆抗體樣品進行病毒過濾驗證，其中，靜注人免疫球蛋白樣品有效處理量為60～110L/m2，蛋白處理量3.12～5.72kg/m2；重組人源化單克隆抗體樣品的有效處理量為40L/m2。對于未能檢測到病毒滴度的樣品，取其最低稀釋倍數孔上清接種敏感細胞，盲傳3代，結果均未觀察到細胞病變。納米膜過濾較其他技術而言，對血液組成成分的影響更小一些，并且在去除小病毒（<20nm）方面有著顯著的應用優勢，但是，其過濾質量很容易受到納米膜生產質量和產品品質影響，存在過濾不徹底的可能。

二、發展趨勢

對于血液制品中的病毒滅活，其關鍵在于在滅活脂包膜和非脂包膜病毒的同時，還要有效保證蛋白質的質量。縱觀上文所述的病毒滅活技術，這些技術雖然均可以較為有效達到病毒去活的目的，但是也有著各種各樣的不足，因此，相關學者還要進一步加強對病毒滅活技術的研究。而除了上文所述一些常用血液制品病毒滅火技術以外，另外還有一些滅活工藝雖有較大的不足，但也已實現臨床應用，如化學方法中的辛酸處理法、亞甲藍光化學處理法，物理方法中的射線輻照法、紫外線輻照法。其中，紫外線照射將成為未來病毒滅活方法的優選之一，具有以下兩大應用優勢：第一，無論是脂包膜還是非脂包膜病毒，均可實現高效滅活；第二，紫外線照射滅火過程不會引入任何雜質，有效避免了二次污染，具有較高的安全性。需要注意的是，該方法在滅活過程中也會對蛋白質造成一定的影響，因此，探索紫外照射劑量、尋找更好的蛋白質保護劑是該技術的關鍵所在。如果能將此劑量應用于工業化生產中，將大大地提高病毒滅活的效率，節省時間。

三、結束語

總而言之，血液制品安全的重要性是毋庸置疑的，為有效提高血液制品病毒滅活的質量和有效性，并且保證其效果，各國學者為此做出了巨大努力，并且也找出了眾多的有效方法。需要注意的是，隨著生物的進化與發展，未來將會出現更多的病毒種類，進而威脅到血液制品的安全性，因此需要不斷加強對血液制品病毒滅活及去除技術的研究，促進血液制品安全性的提升。

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