熒光PCR技術在從業人員傷寒痢疾快速篩查中的應用分析

呂志剛

（南京市高淳區疾病預防控制中心檢驗科 江蘇 南京 211300）

從業人員進行傷寒痢疾檢測是食品安全的重要保障，以往采用的傳統檢測模式比較費時，且檢測結果準確性欠佳[1]。鑒于此，采用熒光PCR技術進行傷寒痢疾快速篩查，其篩查速度較快，靈活性及特異性較高，能夠起到快速篩查的目的。

1.臨床資料與方法

1.1 臨床資料

選擇2016年8月至2017年8月從業人員進行肛拭子采集，共采集糞便檢測樣本9000份。其中，男性糞便檢測樣本5233份，女性糞便檢測樣本3767份。從業人員最小年齡22周歲，最大年齡52周歲，中位年齡（38.1±10.6）周歲。9000份樣本分別實施傳統傷寒痢疾檢測和熒光PCR技術檢測，其中傳統傷寒痢疾檢測結果作為參照組，熒光PCR技術檢測結果作為實驗組。

1.2 方法

實驗組與參照組均應用采樣桿實施樣本采集，將采樣桿置于從業人員肛門內，插入深度在20至30mm之間，采用順時針形式沿從業人員直腸壁旋轉1至3圈后緩慢抽出。將采集樣本頭部折斷后置于恒溫培養箱之中，其溫度保持在37℃，培養12小時[2]。取80ul樣本置于離心管之中予以離心操作，離心轉速為12000rpm，離心時間為5min。離心后標本去除上層液體，加入DNA提取液混合均勻，劑量為50ul。將標本置于加熱箱之中加熱，溫度為100℃，加熱時間為5分鐘。參照組采用傳統傷寒痢疾檢測方式對沙門氏菌及志賀氏菌進行雙色檢測，依據《食品衛生微生物學沙門氏菌檢驗標準》和《食品衛生微生物學志賀氏菌檢驗標準》[3]。實驗組采用熒光儀實施檢測，參照《從業人員預防性健康檢查沙門菌志賀菌檢驗方法》。上述2組均在檢測中降低人員操作對標本結果準確性造成的干擾，消除主觀因素導致的檢測誤差，檢測結束后統計2組檢測結果。

1.3 統計學分析

本研究9000份從業人員傷寒痢疾篩查樣本數據對比采用SPSS19.0軟件，實驗組與參照組沙門氏菌及志賀氏菌篩查陽性結果情況行χ2檢驗，采用（n%）表示。上述數據對比差異性較高（P＜0.05），本研究結果有統計學意義。

2.結果

對比實驗組與參照組從業人員傷寒痢疾篩查陽性結果（見表），兩者差異明顯（P＜0.05），實驗組沙門氏菌（1.44‰）及志賀氏菌（1.67‰）檢出率明顯高于參照組（0.44‰、0.56‰）。

表 2組從業人員傷寒痢疾篩查陽性結果比較[n（‰）]

3.討論

我國當前對食品衛生的要求較高，從業人員患有痢疾傷寒、肝炎、肺結核及皮膚病的疾病，在其治愈前不得從事相關工作，以保障消費者的身體健康，提升我國公共健康水平。因此，對從業人員進行健康篩查尤其重要，傷寒痢疾通過消化道傳播的速度較快，傳染性較強，加之該疾病臨床癥狀不明顯，極易被人忽視。鑒于此，需要對從業人員傷寒痢疾實施篩查，以提高對從業人員的管理，避免受到傷寒痢疾細菌感染的食品流入市場。以往多采用傳統方式實施傷寒痢疾篩查，主要依據食品微生物學沙門氏菌及志賀氏菌檢驗標準實施，該種方式篩查速度較慢，一次傷寒痢疾篩查工作往往需要5至7天方可完成，難以保障篩查結果的實效性[4]。另外，傳統檢查方式靈敏度及特異性水平較低，無法準確檢測從業人員沙門氏菌及志賀氏菌感染情況。傳統檢查方式在一定程度上限制了食品衛生從業人員管理效果，在這一背景下，更為快速、準確的檢測技術亟待創新。

熒光PCR技術具有檢測速度快、檢測準確率高、人員成本低的優勢，該項技術屬于定量試驗方式，采用熒光染料的特異性探針對PCR產物予以追蹤，通過軟件可對其產物加以分析。熒光PCR技術能夠優化和簡化現有傷寒痢疾檢測的流程，從而提升檢測速度，改變了以往檢測中增菌及配液的流程，直接在其采樣器中配備增菌液，檢測人員可直接進行使用，有效避免了該環節人工操作對檢測結果造成的影響，也能夠避免樣本受到外界的污染，降低主觀因素及客觀因素對熒光PCR技術檢測結果準確性造成的影響[5]。另外，熒光PCR技術應用于從業人員痢疾傷寒檢測之中，檢驗人員工作量得以降低，極大縮短了檢測時間，從而提高從業人員傷寒痢疾篩查效率。

綜上所述，采用熒光PCR技術實施從業人員傷寒痢疾快速篩查，其篩查結果準確性較高，篩查結果特異性及靈敏性高，檢測速度較快。本研究結果證實，采用熒光PCR技術進行傷寒痢疾篩查的實驗組，其沙門氏菌及志賀氏菌準確率均高于參照組，證實熒光PCR技術具有推廣應用價值。