兒童血清25(OH)D水平與慢性中耳炎合并積液的相關性分析

杜慧慧，鄭國君

(溫州市中西醫結合醫院耳鼻喉科，浙江 溫州 325000)

中耳炎合并積液(otitis media with effusion，OME)是臨床上兒科常見的中耳非化膿性疾病，80%～90%的學齡前兒童可受到影響[1]。當OME持續3個月以上時疾病發展為慢性中耳炎合并積液(chronic otitis media with effusion，COME)，2歲兒童的發病率約為4%～6%，主要臨床特征為中耳積液、聽力下降、語言發育緩慢等，長期無有效治療可引發中耳膽脂瘤、智力發育遲緩，嚴重時導致聽力喪失，嚴重影響兒童健康[2-3]。維生素D對促進兒童生長發育及提高免疫力具有重要作用，兒童特別是嬰幼兒易出現維生素D不足或缺乏現象，而25-羥維生素D[25(OH)D]是衡量機體維生素D營養狀態的檢測指標。有研究報道補充維生素D能有效預防上呼吸道感染發生，而COME主要癥狀之一為上呼吸道感染引起耳悶脹感，中耳黏膜系統同時是上呼吸道系統的延續[4-5]。因此，本研究旨在探討COME患兒血清25(OH)D水平變化情況及其與疾病發生風險的相關性分析。

1資料與方法

1.1臨床資料

選取2017年1月至2018年1月溫州市中西醫結合醫院耳鼻喉科收治的COME患兒48例作為研究組，選取同期兒科體檢中心健康體檢兒童48例作為對照組。納入標準：①經臨床癥狀及耳內鏡檢確診為COME；②年齡≤10歲；③患兒家屬對本研究有詳細了解，自愿參與，并簽署知情同意書；④經本院倫理委員會審核批準。排除標準：①入組前2周有急性上呼吸道感染、急性中耳炎及急性鼻竇炎發作；②合并哮喘；③有中耳置管、鼓膜切除等中耳手術史；④近2個月內有維生素D服用史；⑤近3個月內有免疫增強劑或免疫抑制劑使用史；⑥合并精神疾病或認知功能障礙。研究組男30例，女18例；年齡3～8歲，平均(5.23±1.02)歲；單側34例，雙側14例；病程6～58天，平均(22.31±5.27)天。對照組男27例，女21例；年齡3～10歲，平均(5.64±1.22)歲，兩組兒童性別、年齡比較，差異均無統計學意義(均P>0.05)。

1.2 COME的診斷標準

①耳內鏡檢測顯示骨膜隆起或下陷，骨膜顏色模糊不清，內有液面可視；②骨膜活動遲緩或受限；③有傳導性耳聾；④耳壓測試中耳壓≤-150daPa；⑤聲導抗呈“B”型或“C”型曲線；⑥病程超過3個月。

1.3樣本采集

所有受試兒童清晨空腹抽取肘靜脈血3～5mL，室溫靜置20min，2 500r/min離心15min，取上層血清于離心管中，置于：-80℃超低溫冰箱保存待檢。

1.4檢測方法

酶聯免疫吸附法(ELISA)檢測血清25(OH)D、白介素(IL)-1β、IL-8及腫瘤壞死因子(TNF)-α水平。25(OH)D試劑盒由英國IDS公司提供，IL-1β、IL-8、TNF-α試劑盒由達科為生物科技有限公司提供。步驟如下：①配制標準品，稀釋血清樣本，設置標準管和空白對照管，配制25(OH)D、IL-1β、IL-8、TNF-α標準液。②血清25(OH)D、IL-1β、IL-8、TNF-α水平檢測，加樣：加待測血清與標準液，混勻；孵育：37℃恒溫箱2h(IL-1β、IL-8、TNF-α孵育45min)；水洗：洗滌液反復沖洗3次，紙上拍干；加一抗工作液100μL，空白孔除外，混勻；孵育：37℃恒溫箱1h(IL-1β、IL-8、TNF-α孵育25min)；水洗：洗滌液反復沖洗3次，紙上拍干；加二抗：每孔加入酶標二抗(辣根過氧化物酶標記鏈霉親和素)100μL；孵育：37℃恒溫箱30min(IL-1β、IL-8、TNF-α孵育15min)；水洗：洗滌液反復沖洗3次，紙上拍干；加底物：每孔加底物工作液100μL，混勻，37℃恒溫箱避光孵育20min；終止：加終止液100μL終止反應；OD值測定：450nm波長測定。所有操作均由同一人嚴格按照說明書執行。分別以OD值、標準品為縱坐標和橫坐標繪制標準曲線，計算相應的血清25(OH)D、IL-1β、IL-8、TNF-α水平。

1.5統計學方法

2結果

2.1兩組血清25(OH)D水平的比較

研究組患兒血清25(OH)D水平低于對照組，兩組比較差異有統計學意義(P<0.05)，見表1。

組別例數(n)25(OH)D(ng/mL)對照組4836.85±8.24研究組4815.67±5.13t15.118P0.000

2.2兩組血清炎癥因子表達水平的比較

研究組患兒血清IL-1β、IL-8、TNF-α水平均高于對照組(均P<0.05)，見表2。

組別例數(n)IL-1β(pg/mL)IL-8(pg/mL)TNF-α(ng/mL)對照組481.43±0.274.38±0.430.72±0.21研究組482.85±0.456.73±0.712.37±0.32t18.74719.61529.867P0.0000.0000.000

2.3 COME患兒血清25(OH)D與炎癥因子表達的相關性

通過Pearson相關性分析顯示，COME患兒血清25(OH)D與IL-1β呈負相關(r=-0.653，P=0.000)，見圖1；COME患兒血清25(OH)D與IL-8呈負相關(r=-0.643，P=0.000)，見圖2；COME患兒血清25(OH)D與TNF-α呈負相關(r=-0.686，P=0.000)，見圖3。

2.4影響COME發病的多因素Logistic回歸分析

年齡、25(OH)D均是影響COME發病的保護因素(均P<0.05)，IL-1β、IL-8、TNF-α均是影響COME發病的危險因素(均P<0.05)，見表3。

圖1 COME患兒血清25(OH)D與IL-1β的相關性 圖2 COME患兒血清25(OH)D與IL-8的相關性 圖3 COME患兒血清25(OH)D與TNF-α的相關性

Fig.1 Correlation between serum 25(OH)D level and IL-1β in children with COMEFig.2 Correlation between serum 25(OH)D level and IL-8 in children with COMEFig.3 Correlation between serum 25(OH)D level and TNF-α in children with COME

表3 影響COME發病的多因素Logistic回歸分析

3討論

COME是導致兒童致聾的主要疾病之一，早期采取有效治療措施，對聽力影響較小，但治療不及時可造成永久性聽力障礙及語言障礙等，給患兒心理及生活帶來較大影響[6]。COME病因較為復雜，雖然對其發病機制的研究取得較大的進展，但具體機制現代醫學尚不能給出明確闡釋。多數學者認為咽鼓管發生阻塞及咽鼓管功能障礙易誘發COME發病，主要是由于兒童咽鼓管較短、粗且平，處于半開放狀態，易發生感染，感染后釋放大量細胞因子，提高毛細血管通透性，增加滲出液，而損失的中耳黏膜纖毛使滲出液滯留，導致中耳積液，長期未得到有效治療發展成為COME。目前COME主要治療手段有鼓膜穿刺抽液、鼓室導管放置及全身抗生素治療等，但前兩者都具有創傷性，風險性大，患兒耐受性較差，且易復發，而兒童正處于生長發育階段，自身免疫系統發育尚不完善，全身抗生素治療對患兒長期影響較大[7-8]。因此，尋找有效的COME早期預防檢測指標極為重要。

3.1血清25(OH)D水平與患兒維生素D間的關系

維生素D是人體必需的脂溶性維生素之一，除早期發現調節鈣磷代謝，促進骨骼生長以外，還對機體神經系統、心血管系統、內分泌系統及免疫系統等具有調節作用[9]。維生素D少部分可從食物中攝取，機體大部分是皮膚經紫外線照射后在肝臟及腎臟內合成，但合成過程中需要25(OH)D在1-α-羥化酶的作用下進行轉化，且血清25(OH)D含量穩定，半衰期長，能較準確的反應機體維生素D水平。維生素D缺乏與多種疾病的發生發展有關。劉寧等[10]研究顯示維生素D缺乏可引起2型糖尿病早期胰島素分泌降低，并與胰島β細胞功能低下相關，補充維生素D可能作為預防糖尿病發生的輔助方法。徐丹丹等[11]研究發現哮喘患者普遍存在維生素D缺乏現象，且血清25(OH)D水平與肺功能參數及疾病控制程度相關。熊翠蓮等[12]研究發現血清25(OH)D在下呼吸道感染患兒中普遍存在不足或缺乏現象，臨床治療時補充維生素D制劑可有效降低兒童下呼吸道發生感染。Walker等[13]研究表明血清25(OH)D在COME患兒中水平降低，同時對急性中耳炎補充維生素D制劑后可有效降低復發性急性中耳炎復發率。本研究結果顯示，研究組患兒血清25(OH)D水平低于對照組，與Asghari等[14]研究結果基本一致，提示COME患兒普遍存在血清25(OH)D的缺乏現象。

3.2 COME患兒血清25(OH)D與炎癥因子的關系

本研究通過對COME患兒炎癥因子指標檢測發現，研究組患兒血清IL-1β、IL-8、TNF-α水平均高于對照組，這與周長華等[15]研究結果基本一致，提示COME患兒存在嚴重的炎癥反應。本研究通過Pearson相關性分析顯示，COME患兒血清25(OH)D與IL-1β、IL-8、TNF-α均呈負相關，提示25(OH)D可能通過對炎癥反應進行調控參與COME疾病發生發展。IL-1β、IL-8、TNF-α是由巨噬細胞及單核細胞分泌的促炎因子，可引起嚴重的炎癥反應，維生素D是一種免疫炎癥反應調節器，維生素D缺乏時能通過激活AMPK蛋白激酶信號通路誘導巨噬細胞分泌IL-1β、IL-8、TNF-α等炎癥因子釋放，加重機體炎癥反應。維生素D缺乏時還能誘導黏膜上皮細胞釋放IL-6、IL-8，進一步加重炎癥反應，在COME疾病中維生素D可能也是通過此類調節方法參與其發病過程，其具體機制還需進一步研究[16-18]。

3.3影響COME發病的多因素分析

本研究通過Logistic多因素回歸分析顯示，年齡、25(OH)D均是影響COME發病的保護因素，而IL-1β、IL-8、TNF-α均是影響COME發病的危險因素，提示血清25(OH)D可作為COME發生的預測指標，可能通過補充維生素D制劑的方式降低COME發生率。

綜上所述，本研究通過對COME患兒血清25(OH)D水平檢測顯示，COME患兒血清25(OH)D水平存在普遍降低現象，并與炎癥反應密切相關，血清25(OH)D升高是COME的保護因素，臨床中可通過對血清25(OH)D水平檢測作為COME發生的預測指標，同時對兒童補充維生素D制劑可能有效降低COME的發生率。

[專業責任編輯：邵 淵]