人乳頭瘤病毒感染的民族分布特點與宮頸病變的分析研究

徐文波　向秀華*馮 磊　李 丹　田 輝

乳頭瘤病毒屬于空泡病毒科乳頭瘤病毒屬，包括多種動物乳頭瘤病毒和人乳頭瘤病毒(human papilloma virus，HPV)，HPV不但具有宿主特異性，而且具有組織特異性，只能感染人的皮膚和黏膜上皮細胞。感染生殖道的HPV根據其致病力的強弱可分為HPV低危型和HPV高危型兩種。常見的低危型如HPV-6型及HPV-11型等，僅能導致生殖道尖銳濕疣，而高危型則可引起外生殖器癌、宮頸癌及高度子宮頸上皮內瘤，高危型主要有如HPV-16型、18型、31型、33型、35型、39型、45型、51型、52型、56型、58型、59型及68型等，現已證實HPV高危型具有潛在的致癌性，其與宮頸癌的發生發展密切相關[1]。據統計，70%～80%的女性一生中至少會感染1次HPV病毒；約有5%～10%因自身因素或其他因素不能將病毒清除，導致HPV持續感染，最終可能發展為宮頸癌[2-3]。

我國是宮頸癌的高發國家，尤其是年輕宮頸癌患者近年來有明顯上升趨勢，HPV高危亞型的感染還存在地域和民族間的差異。為此，本研究以云南玉溪地區彝族、哈尼族和傣族婦女為主要研究人群，對3個少數民族的婦女HPV基因型頻率分布特點及檢出率、各年齡段分布及HPV感染檢出率、HPV二重及多重感染基因類型以及宮頸上皮內瘤變(cervical intraepithelial neoplasia，CIN)與HPV多重感染的關系等進行調查研究。

1　資料與方法

1.1　一般資料

玉溪市人民醫院收集2014年8月至2017年8月云南玉溪地區常住的少數民族1155例婦女宮頸脫落細胞標本(1155份)，其中彝族958例，哈尼族145例，傣族52例，均為門診患者及健康體檢者，年齡18～75歲，平均年齡(38.6±14.7)歲。按年齡分為≤20歲、21～30歲、31～40歲、41～50歲和＞51歲的5個年齡段。所有受檢者直系三代均為少數民族，所有受檢者均為自愿檢測，簽署知情同意書。

1.2　儀器與材料

采用ABI7000型實時熒光定量聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction，PCR)儀(上海普迪生物技術有限公司)。PCR基因組提取試劑盒(廣東凱普生物科技股份有限公司)；微陣列芯片法，晶芯? HPV分型檢測試劑盒(北京博奧生物集團有限公司)；熒光PCR法，HPV核酸檢測試劑盒(西安天隆科技有限公司)。

1.3　檢測方法

1.3.1標本采集

使用HPV專用采樣刷在宮頸管內鱗狀上皮交界處采樣，采樣時稍用力轉動兩周，取得宮頸脫落細胞。迅速將迅速將采集到的1155份宮頸脫落細胞采樣刷浸入裝有細胞保存液的保存管內，分別進行液基薄層細胞學檢查和HPV檢測。

1.3.2HPV基因分型檢測

(1)HPV-DNA提取。使用PCR基因組提取試劑盒，嚴格按照其操作步驟提取。不立即進行擴增，提取的DNA可暫存于4 ℃冰箱，長期保存需要置于-20 ℃存放。

(2)HPV-DNA擴增。按照PCR擴增試劑盒操作程序，使用ABI7000型實時熒光定量PCR儀進行擴增。PCR產物保存備用，短時間可于4℃存放，長時間保存則需置于-20 ℃存放。

(3)HPV基因分型。①微陣列芯片法，采用晶芯?HPV分型檢測試劑盒；②熒光PCR法，采用HPV核酸檢測試劑盒。

(4)使用第三方質量控制。檢測時加入質控探針：表面化學物質探針(QC)、雜交陽性對照探針(PC)、空白對炸探針(BC)、陰性對照探針(NC)及人基因組DNA探針(IC)，同時參加原衛生部室間質評，結果合格。

1.4　結果判讀

室內陰陽性質控合格，檢測結果由“晶芯?HPV分型檢測系統”進行自動判讀。本試劑盒中各HPV型的cut off值主要采用受試者操作特征(receiver operating characteristic，ROC)曲線法計算得到。當各型探針的檢測信號值大于或等于該探針的cut off值時，判斷該探針為陽性，待檢樣品中含有該HPV型；當探針的檢測信號值小于該探針的cut off值時，判斷該探針為陰性，待檢樣品中不含有該HPV型。試劑盒中各型cut off值已經整合到HPV分型檢測系統判別軟件中，由軟件自動對樣品檢測結果進行判別。

1.5　統計學方法

采用SPSS17.0版軟件進行所有數據的統計學處理，采用多個樣本率x2檢驗，以α=0.05為檢驗水準，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1　三個少數民族的婦女HPV基因型頻率分布特點及檢出率

在3個少數民族的1155例婦女中彝族958例，哈尼族145例，傣族52例。彝族958例HPV感染的主要型別依次為HPV-33型、51型、52型、56型、58型、59型、66型和68型；哈尼族145例HPV感染的主要型別依次為HPV-51型、52型、56型、68型和33型；傣族52例HPV感染的主要型別依次為HPV-58型、52型、16型和39型，彝族、哈尼族、傣族以52型、56型、58型、68型基因型最為多見，3個少數民族HPV-33型、51型檢出率差異無顯著性意義)其余各型檢出率差異具有顯著性意義P＜0.01，見表1。

2.2　三個少數民族的婦女各年齡段分布及HPV感染檢出率

在3個少數民族的1155例婦女中共檢出高危型HPV感染832例，感染率為72.0%(832/1155)，在3種少數民族的5個年齡段中，≤20歲陽性人數45例、陽性檢出率5.4%；21～30歲陽性人數270例、陽性檢出率32.4%；31～40歲陽性人數221例、陽性檢出率26.6%；41～50歲陽性人數189例、陽性檢出率22.7%；＞51歲感染91例、陽性檢出率11.0%。其中21～30歲和31～40歲為HPV感染的主要群體，見表2。

表1　三個少數民族的1155例婦女HPV主要型別頻率分布和檢出率[例(%)]

表2　三個少數民族1155例婦女各年齡段HPV感染分布及檢出率

2.3　三個少數民族的婦女HPV二重及多重感染基因型

(1)3個少數民族的1155例婦女HPV二重感染219例：①彝族二重感染124例，基因型為22例51+58型、24例52+68型、27例52+58型、22例52+63型、14例52+66型、8例51+63型、7例51+68型；②哈尼族二重感染70例，基因型為19例51+52型、17例51+56型、14例51+68型、8例52+56型、4例52+68型、3例56+58型、5例51+81型；③傣族二重感染25例，基因型為8例16+52型、6例16+58型、5例16+39型、4例52+58型、2例39+52型。

(2)3個少數民族的1155例婦女HPV三重感染52例：①彝族三重感染15例，基因型為5例51+52+58型、3例52+56+68型、3例52+56+63型、2例52+63+68型、2例58+63+66型；②哈尼族三重感染14例，基因型為7例51+52+81型，4例51+56+68型，3例52+56+68型；③傣族三重感染23例，基因型為14例16+52+58型，5例16+52+39型，4例16+39+58型。

2.4　三個少數民族的婦女CIN與HPV多重感染的關系

(1)在3個少數民族的1155例婦女中共檢出高危型HPV感染832例，感染率72.0%(832/1155)。感染者可疑部位活檢發現，宮頸炎癥為501例；CIN為331例，其中CINⅠ級85例，CINⅡ級176例，CINⅢ級70例。

(2)HPV陽性的CINⅠ級患者中，一重感染率為54.1%(46/85)，二重感染率為40.0%(34/85)，三重及以上為5.9%(5/85)；HPV陽性的CINⅡ級患者中，一重感染率為35.8%(63/176)，二重感染率為54.5%(96/176)，三重及以上9.7%(17/176)；HPV陽性的CINⅢ級患者中，一重感染率為25.7%(18/70)，二重感染率為4 5.7%(3 2/7 0)，三重及以上28.6%(20/70)。

(3)3個少數民族的婦女CIN級別與HPV感染重數陽性率相關，差異有統計學意義(x2=27.0，P＜0.05)。經相關分析CIN等級與HPV感染重數有顯著相關性差異，并具有統計學意義(x2=12.0，r=-0.736，P＜0.05)。表明彝族、哈尼族及傣族高危型HPV感染與宮頸病變嚴重程度相關，HPV感染的多重性與癌前病變級別升高有關聯性。3個少數民族832例婦女高危型HPV感染CIN的Thinprep細胞學檢測(Thinprep cytologic test，TCT)結果與HPV感染情況見表3。

表3　832例高危型HPV感染婦女CIN的TCT結果與HPV感染情況(例)

3　討論

本研究中，少數民族感染人群年齡依次21～30歲、31～40歲、41～50歲、＞51歲、≤20歲，而≤20歲組HPV陽性檢出率比報道漢族婦女高，提示本地區HPV感染性有年齡差異。目前認為，HPV高危亞型的感染是宮頸癌發生的必要條件，年齡對宮頸癌的篩查有著重要的意義[6]。文獻報道HPV各亞型的分布存在地區性差異[2-5]。本地區彝族、哈尼族、傣族以52型、56型、58型、68型基因型最為多見，傣族婦女檢出HPV16型，彝族、哈尼族未檢出，彝族、哈尼族部分基因型相似，這可能與少數民族的居住環境、生活方式、地區經濟發展、風俗習慣和婚戀習俗及性生活特征等因素有關[2-5]。3個少數民族HPV-33型、51型檢出率經卡方檢驗差異無顯著性意義，其余各型檢出率差異具有顯著性意義。彝族、哈尼族部分基因型相似，考慮彝族、哈尼族居住山區、環境、風俗習慣以及婚戀習俗相似所致。因此，了解本地區的HPV基因型的分布情況，為將來HPV疫苗的普及應用、宮頸癌的治療方向等提供客觀依據。

在CIN與HPV多重感染的關系中，3個少數民族的婦女HPV感染以一重感染為主，經相關分析CIN等級與HPV感染重數有顯著相關性。表明HPV感染的多重性與宮頸癌及癌前病變級別升高有關聯性。在3個少數民族的婦女中，高危型HPV的陽性率隨宮頸病變嚴重程度的增加而逐漸增高。通過HPV感染患者的高效篩查和密切監測能有效防止宮頸癌的發生。少數民族HPV陽性檢出率明顯高于報道的漢族女性，HPV感染率與人群的年齡、性生活過早以及地區差異相關[6]。HPV感染通常在年輕的女性中容易高發，并且隨著年齡的增長而呈明顯的下降趨勢，其與多個性伴侶、吸煙、經濟與文化水平較為落后，衛生資源較為匱乏、自然環境以及醫療條件較差等相關[1]。

HPV檢測是一種客觀性、可重復性強的檢測手段，可避免不同檢測者之間的主觀差異，減少細胞學檢查的假陰性結果。由于HPV感染后1～2年內會被機體清除，宮頸癌的發生率很低，應該將液基細胞學和HPV-DNA檢測聯合應用，作為宮頸癌篩查的首選方法。