西沙諾麗通便和降糖作用的藥效學研究

張廣平 昌佑澤 李從良 侯紅平 楊依霏 葉祖光

摘要 目的：觀察西沙諾麗的通便和降糖的藥效。方法：ICR小鼠，灌胃給予不同劑量的西沙諾麗凍干粉，觀察對正常小鼠小腸運動和對鹽酸洛哌丁胺導致便秘模型小鼠首粒排便時間、排便粒數及糞便重量的影響。觀察西沙諾麗凍干粉對鏈脲佐菌素導致小鼠糖尿病模型和對正常大鼠血糖和糖耐量的影響。結果：西沙諾麗能夠顯著增加正常小鼠小腸推進率，可明顯縮短鹽酸洛哌丁胺導致便秘模型動物首次排便時間，能夠顯著增加模型動物排便次數和動物糞便重量。西沙諾麗能夠顯著降低鏈脲佐菌素導致糖尿病模型血糖水平，但是對正常大鼠血糖和糖耐量的沒有明顯影響。結論：西沙諾麗凍干粉具有通便和降糖作用。

關鍵詞 西沙諾麗；通便；降糖；藥效作用

Abstract Objective：To observe the defaecation and hypoglycemic effect of Xisha Noni.Methods：The intestine movement in normal mice，and the time for the first defecation，defecation number and soil weight of constipation mouse model induced by loperamide hydrochloride were observed following the treatment with Xisha Noni lyophiled powder at different dose that were orally taken by the normal mice and the constipation mice in order to investigate its defaecation effect.The diabetic mouse model induced by streptozotocin was adopted in the experiment to observe the hypoglycemic action of Noni.Also，its effects on the blood sugar and glucose tolerance in normal rats were studied.Results：Xisha Noni can remarkably increase the small intestine propulsive proportion in the normal mice，shorten the time for the first defecation in constipation mice models induced by loperamide hydrochloride，and increase the defecation number and their soil weight.In addition，Xisha Noni can remarkably decrease blood glucose level in the diabetic mice model induced by streptozotocin，but it had no significant effects on blood glucose and glucose tolerance in normal rats.Conclusion：Xisha Noni lyophiled powder appears to possess the effects of both defaecation and hypoglycemic.

Key Words Xisha Noni； Defaecation； Hypoglycemic； Pharmacodynamic action

中圖分類號：R285.5文獻標識碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2018.04.048

諾麗（Noni），為茜草科巴戟天屬植物，學名海巴戟（Morinda citrifolia L.），為熱帶常綠多年生灌木，其果實、葉子、枝干、根部均可入藥。諾麗果作為傳統藥食兩用的習俗已有悠久的歷史，是南太平洋島嶼居民常用的保健食品和藥用植物。西沙諾麗源于我國西沙群島，于1991年引種海南省種植，近幾年已被大面積推廣種植，目前諾麗果漿在我國作為新資源食品應用，已有普通食品和保健食品批準上市，如諾麗飲品（諾麗發酵品和諾麗果汁）、諾麗果粉、諾麗加藍莓果汁等。人體食用西沙諾麗發現該品具有很好的通便和降糖作用[1-2]，為挖掘海南西沙諾麗潛在的利用與開發價值，本實驗對海南西沙諾麗的通便和降血糖藥效學作用進行研究，為諾麗的開發利用提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 ICR小鼠，SPF級，18～22 g，購自北京維通利華實驗動物技術有限公司許可證號：SCXK（京）2013-0001。SD大鼠，SPF級，180～200 g，購自北京維通利華實驗動物技術有限公司許可證號：SCXK（京）2006-0009。

1.1.2 藥物 西沙諾麗（以下簡稱諾麗）：批號20150906，100 kg鮮果分選清洗，控干外表水分，密封儲存，榨汁得60 kg果汁，真空冷凍干燥得到3 kg凍干粉，即20 mL果汁/g凍干粉，凍干粉粉碎制成實驗供試品，置4 ℃冰箱保存備用；排毒養顏膠囊，云南盤龍云海藥液有限公司，批號：150217；活性炭（上海興長活性炭有限公司，批號：F20110118）。

1.1.3 試劑與儀器

阿拉伯樹膠（上海華藍化學科技有限公司，批號：20141104）；鹽酸洛哌丁胺（西安楊森制藥有限公司，批號：H10910085）；鏈脲佐菌素（Sigma公司，批號：V900890-1G），-20 ℃避光保存；鹽酸二甲雙胍片（中美上海施貴寶制藥有限公司，批號：國藥準字H20023370）；一水合檸檬酸（國藥集團化學試劑有限公司，批號：20120119）；二水合檸檬酸三鈉（國藥集團化學試劑有限公司，批號：220120522）；生理鹽水（山東華魯制藥有限公司，批號：B14040605）；pH試紙（上海三愛思試劑有限公司，批號：Q/GHSC 1571-2012）。

墨汁的配制：準確稱取阿拉伯樹膠100 g，加水800 mL，煮沸至溶液透明，稱取活性碳（粉狀）50 g加至上述溶液中煮沸3次，待溶液涼后加水定容到1 000 mL，于冰箱中4 ℃保存，用前搖勻。

檸檬酸緩沖液的配置：檸檬酸（FW：210.14）2.1 g加入雙蒸水至100 mL中配成A液；檸檬酸鈉（FW：294.10）2.94 g加入雙蒸水至100 mL中配成B液；用時將A、B液按1∶1的比例配制，精密pH試紙測定pH值，調節到pH=4.2～4.5，即是所需的STZ檸檬酸緩沖液。

鏈脲佐菌素溶液配置：注射時用檸檬酸緩沖液以1%的濃度溶解STZ，現配現用，配置后的溶液放置在碎冰，30 min內注射完畢。

電子天平：賽多利斯（Sartoruis），型號：BSA3202S-CW、BSA 323S-CW，產地，德國賽多利斯公司；血糖儀：羅氏逸動型（ACCU-CHEK Mobile）產地：德國羅氏公司。

1.2 方法

1.2.1 西沙諾麗通便作用試驗研究

1.2.1.1 對正常小鼠小腸推動作用 ICR小鼠60只，18～22 g，動物適應性喂養3 d，按照體重隨機分空白對照組，排毒養顏膠囊（0.8 g/kg）組、西沙諾麗（以下簡稱諾麗）低劑量組（0.84 g凍干粉/kg）、中劑量組（2.52 g凍干粉/kg）、高劑量組（7.56 g凍干粉/kg）劑量組，12只/組動物，雌雄各半。各給藥組動物灌胃給藥，給藥體積20 mL/kg，連續給藥7 d。對照組給予同體積純凈水。末次給藥后，各給藥組灌胃給予含有受試藥品的墨汁（以墨汁為溶媒配置受試藥物），空白對照組灌胃給予同體積墨汁，給受試物25 min后立即脫頸椎處死小鼠，打開腹腔分離腸系膜，剪取上端自幽門、下端至回盲部的腸管，置于托盤上，輕輕將小腸拉成直線，測量腸管長度為“小腸總長度”，從幽門至墨汁前沿為“墨汁推進長度”。計算墨汁推進率。實驗數據結果用均值±標準差（±SD）表示，組間比較采用單因素方差分析t檢驗[3]。

碳墨推進率（%）=墨汁推進長度（cm）小腸總長度（cm）×100%

1.2.1.2 對鹽酸洛哌丁胺導致的小鼠便秘模型的影響 72只ICR小鼠，18～22 g，適應性喂養3 d，動物分組給藥同實驗1.2.1.1。給藥第6天，各組小鼠禁食不禁水12 h。第7天除空白對照組外，各組灌胃給予鹽酸洛哌丁胺（4 mg/kg），給藥0.5 h后各組小鼠灌胃給予含有受試藥品的墨汁（以墨汁為溶媒配置受試藥物）?？瞻讓φ战M和模型對照組小鼠灌胃純凈水配置墨汁，灌胃后小鼠放置于串籠中，記錄首次排黑便時間，計算6 h內小鼠排黑便的次數，稱量排黑便的重量[4-6]。

1.2.2 西沙諾麗降糖作用實驗研究

1.2.2.1 諾麗對鏈脲佐菌素導致糖尿病模型的影響 80只SPF級ICR雄性小鼠，適應性喂養3 d，小鼠禁食不禁水12 h，隨機取10只小鼠為空白對照組，其余70只腹腔注射給予鏈脲佐菌素（STZ）140 mg/kg，注射體積10 mL/kg體重。72 h后禁食2 h后剪尾尖取血，羅氏血糖儀測量血糖，選擇血糖11.7 mmol/L≤血糖值≤25 mmol/L為高血糖模型成功動物。選擇造模成功的小鼠按血糖水平隨機分組：諾麗低劑量組（0.84 g凍干粉/kg）、中劑量組（2.52 g凍干粉/kg）、高劑量組（7.56 g凍干粉/kg）、陽性對照組（鹽酸二甲雙胍0.56 g/kg）、模型對照組，10只/組（各組小鼠給藥前各組動物血糖組間差距≤1.1 mmol/L），各給藥組動物灌胃給予相應受試藥，模型對照組和空白對照組給同體積的純凈水，給藥體積20 mL/kg體重，1次/d，連續30 d。每周稱量一次體重，禁食2 h，末次給藥1 h后尾尖采血，測定血糖。實驗數據結果用（±SD）表示，組間比較采用單因素方差分析檢驗[7-8]。

1.2.2.2 諾麗對正常SD大鼠血糖的影響 SD大鼠，180～200 g，40只，適應性喂養5 d，按體重隨機分空白對照組和諾麗高（4.5 g凍干粉/kg）、中（1.5 g凍干粉/kg）、低（0.5 g凍干粉/kg）3個劑量組，每組10只，雌雄各半。給藥組灌胃給藥，連續給藥7 d，給藥體積10 mL/kg?？瞻讓φ战M給予同體積的純凈水，末次給藥前禁食4 h，給藥1 h后尾尖取血血糖儀測定血糖。

1.2.2.3 諾麗對正常SD大鼠糖耐量的影響 動物分組同實驗1.2.2.2。大鼠禁食4 h后尾尖取血測量血糖（此時標記為零時），測完后按10 mL/kg各劑量組灌胃給予諾麗凍干粉，空白組給予同體積純凈水。各組動物給藥后即口服給予葡萄糖2.5 g/kg（25%葡萄糖溶液），然后分別于口服葡萄糖后0.5 h、1 h、2 h從尾尖取血，血糖儀測定血糖。計算模型對照組與諾麗低、中、高3個劑量組給葡萄糖各時間點血糖和血糖曲線下面積的變化[9]。

曲線下面積=1/2×（0 h血糖值+0.5 h血糖值）×0.5+1/2×（2 h血糖值+0.5 h血糖值）×1.5=0.25×（0 h血糖值+40.5 h血糖值+32 h血糖值）。

1.3 統計學方法 實驗數據均以均數±標準差（±s）表示，組間比較采用t檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 西沙諾麗通便作用試驗研究

2.1.1 對正常小鼠小腸推動作用 與空白對照組比較，諾麗低、中、高劑量組能夠明顯促進正常小鼠碳墨推進率，與對照組比較具有統計學意義（低劑量組P<0.05，中、高劑量組P<0.01），此外，其推進率增強作用呈劑量依賴型。提示西沙諾麗能夠促進正常動物小腸蠕動。見表1。

2.1.2 對鹽酸洛哌丁胺導致的小鼠便秘模型的影響 與空白對照組比較，便秘模型組小鼠首粒黑便的排出時間顯著延長，6 h內的排便次數和重量顯著減少（P<0.05或P<0.01），提示造模成功。與便秘模型組比較，陽性對照藥和諾麗低、中、高劑量組小鼠首粒黑便的排出時間顯著縮短，6 h內的排便重量和次數明顯增多（P<0.05或P<0.01）。提示西沙諾麗對鹽酸洛哌丁胺導致的小鼠便秘具有一定的治療作用。見表2。

2.2 西沙諾麗降糖作用實驗研究

2.2.1 對鏈脲佐菌素導致糖尿病模型的影響 實驗結果：鏈脲佐菌素造模后血糖顯著升高，與空白對照組比較P<0.01，提示造模成功。給藥30 d后，與模型對照組組比較，陽性對照藥二甲雙胍組血糖值明顯降低（P<0.01）。同樣，諾麗中、高劑量組血糖顯著降低（P<0.05或者P<0.01），但低劑量組作用不明顯。見表3。同對照組比較，模型組動物在給藥弟2、3、4周動物體重顯著降低（P<0.01）。與模型對照組比較，諾麗中劑量組給藥第3周體重顯著升高（P<0.05），給藥1、2、4周有體重有升高的趨勢（同對照組比較沒有統計學意義）。高劑量組給藥第2、3、4周體重顯著升高（P<0.05）。見表4。

2.2.2 對正常大鼠糖耐量的影響 實驗結果：給予葡萄糖后大鼠出現血糖升高，與正常組比較諾麗高、中、低3個劑量組在給藥后0.5、1、2 h血糖和血糖曲線下面積比較差異無統計學意義（P>0.05）。見表5。

2.2.3 對正常大鼠血糖的影響 實驗結果：同正常組比較，諾麗3個劑量組大鼠血糖值差異無統計學意義（P>0.05）。見表6。

3 討論

諾麗具有很高的臨床藥用價值。目前在我國海南、云南等熱帶地區的引種種植已獲成功，諾麗果作為傳統藥食兩用的習俗已有悠久的歷史。臨床用于治療關節炎、糖尿病、高血壓、肌肉疼痛、月經不調、頭痛、心臟病、艾滋病、腫瘤、消化道潰瘍、各種扭傷、抑郁、衰老、消化不良、動脈硬化等方面問題[10-12]。諾麗中含有多種必需氨基酸、維生素、微量元素及其他有效營養或藥用成分，主要包括抗氧化劑和生物類黃酮，如萜烯類化合物，植物甾醇類，脂肪酸，甙類，環烯醚萜苷類，黃酮甙類，β-谷甾醇、熊果酸、植物固醇、蛋白質、糖苷和蒽醌[13]等。現代研究證實其具有抑菌、抗病毒、抗癌、增強免疫力、抗疲勞、保肝等功效[14-15]。本實驗觀察了諾麗降糖和通便的藥效作用，為臨床應用提供科學依據。

洛哌丁胺是常用的止瀉劑，主要通過抑制腸道水分泌[16]和結腸蠕動[17]，使腸內容物通過延遲，致使實驗動物出現排便減少或難排便、糞便豆樣圓珠狀表現。采用鹽酸洛哌丁胺導致小鼠便秘模型和小鼠小腸推動實驗2種方法，觀察諾麗的通便作用，結果顯示，西沙諾麗低、中、高3個劑量組均能夠顯著增加正常小鼠小腸推進率，且具有一定的量效關系。3個劑量可明顯縮短鹽酸洛哌丁胺導致便秘模型動物首次排便時間，能夠顯著增加模型動物排便次數和動物糞便重量。2種藥效學方法的試驗結果均提示，西沙諾麗凍干粉具有較好的通便作用。但有研究報道諾麗發酵果汁沒有明顯通便作用，本實驗樣品是諾麗果汁的凍干粉，而上述文獻報道的實驗所使用的是經3個月發酵的樣品，可能經過長期發酵其中成分發生了改變[18]，從而影響了其藥效作用[19]。

鏈脲佐菌素（STZ）對一定種屬動物的胰島β細胞有選擇性破壞作用，常被用來誘發I型糖尿病模型。通過觀察西沙諾麗凍干粉對鏈脲佐菌素導致小鼠糖尿病模型和對正常大鼠糖耐量和血糖的影響，實驗研究諾麗的降糖作用。實驗結果顯示，諾麗能夠顯著降低鏈脲佐菌素導致糖尿病模型血糖水平，抑制病理模型動物體重降低，但西沙諾麗對正常大鼠血糖和糖耐量沒有明顯影響。結果提示，該品對高血糖的病理狀態的動物模型具有一定的降血糖作用，但是對正常動物的血糖卻沒有降低的不良反應，這種降血糖的藥效學特點將有益于該類產品的安全使用?？傊?，本文實驗證明了西沙諾麗果汁的通便和降血糖的藥效學作用，但其作用機理以及藥效物質基礎尚待進一步研究。

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