高頻電針刺激“內關”穴和非穴后對心肌缺血大鼠“內關”“天泉”穴皮膚血流灌注量的影響

嚴明娜 嵇波 王丹 趙國楨 白紅新 孫曉敏 戴健 路雅雯 劉翼天 蘇杭 葛云鵬

摘要 目的：研究高頻電針刺激“內關”穴和非穴后對大鼠“內關”“天泉”穴皮膚血流灌注量的影響。方法：選取30只雄性Wistar大鼠按照隨機數字表的方法分成正常組、假手術組、模型組、高頻電針“內關”組、高頻電針非穴組5組。高頻電針“內關”組采取每日電針大鼠左側“內關”穴，高頻電針非穴組采取每日電針非穴。于治療結束30 min后，應用激光散斑襯比成像技術檢測各組大鼠雙側“內關”“天泉”穴區域的皮膚血流灌注量。結果：與正常組比較，模型組各穴位血流灌注量均降低（P<0.05），且雙側“內關”穴區皮膚血流灌注量顯著升高（P<0.05）。結論：高頻電針“內關”穴組心肌缺血情況有所改善，且心肌處于不同狀態時，“內關”穴區皮膚血流灌注量變化顯著。

關鍵詞 高頻電針；心肌缺血；內關；郄門；天泉；皮膚血流灌注量；經穴臟腑相關；大鼠

Abstract Objective：To study the effects of high frequency electro acupuncture at acupoints and non-acupoint on the skin blood perfusion volume of “Neiguan （PC 6）” and “Tianquan （PC 2）” points by using myocardial ischemia model in rats.Methods：Thirty male Wistar rats were randomly divided into 5 groups：normal group，sham operation group，model group，high frequency electro acupuncture at “Neiguan （PC 6）” group，high frequency electro acupuncture non-acupoint.Each group included 6 rats.High frequency electro acupuncture at “Neiguan （PC 6）” group took the daily electro acupuncture on the left side of the “Neiguan （PC 6）” points； high frequency electro acupuncture non-acupoint took daily acupuncture at non-points.Then，the skin blood perfusion volume of “Neiguan （PC 6）” and “Tianquan （PC 2）” points was tested by Laser Speckle Lining Imaging Technology after the treatment for 30 minutes.Results：Compared with the normal group，the blood perfusion of acupoints in model group was decreased （P<0.05），and skin blood flow of bilateral “Neiguan （PC 6）” acupoints was significantly increased （P<0.01，P<0.05）.Conclusion：The myocardial ischemia was improved in the high-frequency electro acupuncture at “Neiguan （PC 6）” group，and the blood perfusion volume of “Neiguan （PC 6）” acupoint was significantly changed when the myocardium was in different states.

Key Words High-frequency electro acupuncture； Myocardial ischemia； Neiguan （PC 6）； Ximen （PC 4）； Tianquan （PC 2）； Skin blood perfusion volume； Meridian organs related； Rat

中圖分類號：R245文獻標識碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2018.04.034

隨著飲食結構的改變以及生活節奏的加快等，心血管疾病已經嚴重影響了人類的健康。現代研究表明，我國心血管疾病發病人群年齡有年輕化的趨勢，青壯年人群的發病與患病比例明顯升高，2004年城市居民冠心病（Coronary Heart Disease，CHD）死亡占所有心臟病死亡的48%，2006年中國城市CHD年齡死亡趨勢有所上升，CHD死亡率的長期變化各國有所不同，《柳葉刀》2012年宣布的全球疾病負擔研討的結果表明，1990—2010年，235種全球人群死亡原因中，排名第一位是缺血性心臟病，卒中位列第二位。2013年《柳葉刀》發表的中國疾病負擔研究表明，卒中、缺血性心臟病與慢性阻塞性肺疾病分別是中國人死因前三位，并且前2個在全部心腦血管疾病中所占比例在90%左右，因此心血管疾病日益成為我國衛生事業中的一大挑戰。CHD的主要表現就是心肌缺血的的癥狀，因此現代臨床和科研實驗中關于心肌缺血的研究日益增多。

心肌缺血、CHD等對應中醫中的“胸痹”“心痛”等，現代臨床中應用針灸治療“胸痹”“心痛”等癥較為廣泛，國外也有文獻報道，如丹麥Hellerup針灸中心職員臨床觀察了長期系統針刺治療CHD和心絞痛患者，結果顯示，針刺刺激在CHD的治療中效果顯著。內關穴位，心包經絡穴，八脈交會穴，通陰維脈，主治心胸痛，心悸；胃痛，失眠等。《攔江賦》中有“胸中之病內關擔”的說法，因此常用內關穴治療心臟疾患。

經絡學說中經穴-臟腑相關一直屬于核心理論，現代關于穴位與內臟關系的研究更是日益增多。經穴臟腑相關理論的主要內容中提出臟腑的生理或病理改變可以在體表相關經脈的穴位上有一定的變化和反應，而穴位感受刺激也可以治療相關臟腑的疾病。現代研究多集中在后者，有研究穴位感受刺激后臟腑機能的改變，如有研究表明，電針“內關”對缺血性心肌損傷大鼠鈉離子通道相關蛋白的影響，認為電針“內關”可能通過下調蛋白酪氨酸磷酸酶（Protein Tyrosine Phosphatase，PTPs），上調電壓-門控鈉離子通道（Na+Voltage-gated Sodium Channel，Nav1.5），蛋白酪氨酸激酶（Protein Tyrosine Kinase，PTKs）蛋白的表達，實現對鈉離子通道電流以及鈣超載的調節，進而改善心肌缺血狀態[1]；還有研究表明，電針“內關”穴可以發揮對缺血心肌的一定程度的保護作用，推測其機制可能是增強缺血心肌細胞活力，從而達到保護的作用[2]。但對于臟腑處于不同狀態時體表穴位的反應的研究則相對較少。

體表穴位的反應的一個重要方面就是穴區皮膚血流量的變化，皮膚血流量的改變可反映局部的變化，也可以通過研究臟腑的不同狀態來監測血流量，因此，可以通過探測穴區血流量變化推斷出臟腑的內在狀態，對臨床疾病的診斷、治療以及愈后等都有一定的指導意義。有研究以激光多普勒血流測定儀測定健康成年人血流灌注量，結果顯示，不同的性別對與皮溫和血流灌注量的影響沒有差異，不同的年齡對組織血管的血流儲備的影響有明顯差異，從部位上來看，腰部和脛前區的血流儲備要高于手部和面部血管的儲備[3]。而在對比經穴和非穴的差異研究，表明這兩者之間差異明顯，兩側非經非穴部位皮膚血流灌注量遠遠低于經穴處皮膚血流灌注量[4]。還有研究結果顯示，人體安靜狀態下各穴位血流灌注量比較穩定，但隨著穴位分部位置不同，其灌注量也不相同，結果顯示指尖的血流灌注量最高，甚至顯示與情緒變化有一定的關系，具有潛在的心理研究價值[5]，還有研究發現，電針刺激合谷穴可以使大腸經的微循環血流灌注量略增，氧分壓顯著降低[6]。由此可見，經穴皮膚血流的變化具有一定程度的特異性反應。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 雄性Wistar大鼠，動物來源：北京維通利華實驗動物技術有限公司，合格證號：SCXK（京）2012-0001。飼養環境條件：日光燈照射，12 h敏感交替，室內溫度20～25 ℃，相對濕度（45±5）%，飼料為普通清潔級大鼠飼料，不限制飲水，實驗前動物進行3 d適應性飼養。

1.1.2 儀器與試劑

1）儀器：BL-420E+生物機能實驗系統（成都泰盟科技有限公司）；動物呼吸機（上海益聯科教設備有限公司）；醫用冷光源（鄭州康順醫療器械有限公司）；針灸針（華佗牌一次性使用無菌針灸針，規格0.20 mm×13 mm）；電針儀（韓式二導穴位刺激儀，北京華睿通恒科技有限公司）；激光散斑血流成像儀（瑞典帕瑞公司）；TX51顯微鏡（日本Olympus公司）。

2）試劑：10%水合氯醛（北京拜爾迪生物技術有限公司）；20%烏拉坦（北京華菁美達科技有限公司）；注射用青霉素鈉（北京拜爾迪生物技術有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 分組與模型制備

將30只Wistar大鼠按照隨機數字表法分成5組，分別為對照組、造模組、假手術組、高頻電針“內關”穴組、高頻電針非穴組。

造模根據所查閱參考文獻[7]，造模方法為結扎大鼠冠狀動脈左前降支。操作過程大致如下：20%烏拉坦以4.5 mL/kg標準進行腹腔注射麻醉，采用BL-420E+生物機能實驗系統連接大鼠四肢，采集大鼠肢體Ⅱ導聯心電圖，隨后經口腔行無創氣管插管，進行大鼠胸部正中偏左側備皮，連接動物呼吸機，手術區消毒后進行胸腔心臟暴露手術操作，縱向斷開第4、5胸肋關節連接處，采用開瞼器進行傷口擴張，隨后以眼科彎鑷撕開心包膜，使手術視野更清晰，隨后在動脈圓錐和左心耳交界下約2 mm位置，進行冠狀動脈左前降支的結扎，最后進行縫合以及胸腔內氣體和液體的排出工作，術后于大鼠頸部皮下注射青霉素，防止術后感染。手術完成后再次采集大鼠肢體Ⅱ導聯心電圖。

造模評估：手術結扎部位冠脈向外膨出，顏色發紺即提示結扎成功；結扎后心電圖J點立即抬高，幅度達0.2 mV[8]，提示初步證明造模成功；后期結合心肌HE染色進行評估。

隨后去除心電圖呈現異常、于造模術中死亡或者不符合造模評估標準的大鼠。術后注意大鼠保暖，及時進行排痰和保證術后正常排尿的術后護理操作，并根據個體情況進行適量的食水飼養。

1.2.2 電針干預

取穴：本實驗干預選擇大鼠“內關”穴，以《實驗針灸學》大鼠穴位標準進行穴位定位，書中記載“內關”穴位定位為前肢內側，距腕橫紋約3 mm的尺橈骨縫間；非經非穴點定為“環跳”穴外5 mm（后肢髖關節后上緣外5 mm）左右[9]。

實驗干預措施。1）對照組：飼養環境如上述所述，其他不做處理。治療時，在電針組治療時間采取對應的抓取和固定等操作，減少相應的影響。2）假手術組：飼養環境如上述所述，術中對大鼠心臟冠狀動脈左前降支血管不結扎、只穿線，其余操作同造模組相同。3）造模組：飼養環境如上述所述，術中結扎大鼠冠狀動脈左前降支，造成心肌缺血損傷改變，其余操作與其他組相同。4）高頻電針“內關”組：飼養環境如上述所述，造模成功后，采取毫針直刺左側“內關”穴，深度約2 mm，同時在該穴外側5 mm非穴位處，皮下平刺，深度為1 mm，隨后與電針儀相連，“內關”穴針柄連接電針儀負極。電針參數為頻率100 Hz，強度1 mA。每日采取電針處理1次。5）高頻電針非穴組：常規飼養條件，造模成功后，用規格0.20 mm×13.00 mm毫針直刺兩側環跳穴外5 mm（后肢髖關節后上緣外5 mm）處，電針參數同高頻電針“內關”組。每日電針干預1次。

1.2.3 檢測指標與方法 “內關”“郄門”“天泉”經穴區域血流灌注量檢測。檢測環境室內溫度20～30 ℃，相對濕度為30%～80%。有效采樣頻率1幀圖像/s，采樣頻率5幀圖像/s，平均化記錄5；觀測距離為20～25 cm，觀測范圍為仰臥位3 cm×14 cm。

相關穴位觀察選擇“內關”“郄門”“天泉”穴3個相關經脈穴位。檢測24 h前將大鼠待測部位脫毛備皮。測試前進行大鼠腹腔注射麻醉，取仰臥位，充分暴露雙側“內關”“郄門”“天泉”穴，臺架上固定，測試開始前觀測并調整室內環境，以保證室內溫度維持在25 ℃左右，且沒有明顯的空氣對流及日光照射。

激光散斑血流成像儀掃描頭固定在大鼠穴區正上方10～25 cm，對準測定部位，檢測“內關”“郄門”“天泉”3穴位區域皮膚的血流變化。檢測過程中應注意大鼠保持相對安靜的狀態，無明顯肢體活動，若發生因大鼠狀態不穩定出現肢體活動度大等現象，則應該在后期數據采集時，應避免對“運動偽跡”部分的采集，時段應選擇大鼠處于相對穩定狀態時。

電針治療后30 min，采集高頻電針“內關”組與高頻電針非穴組2組檢測區域血流灌注圖像，并將對應標記做好。

采集完5組檢測區域血流圖像后，后期采用設備對應軟PIMsoft血流儀成像處理軟件處理5組數據。在每組血流圖像中，標注出“內關”“郄門”“天泉”為感興趣區域（ROI），穴區測量面積采用1.1～1.3 mm 之間，血流值讀取方法采用3人盲法，雙側穴位取平均值，從而計算出被檢測大鼠的“內關”“郄門”“天泉”3穴位區域的血流灌注量的具體數值。選穴圖像見圖1。

心肌組織HE染色。穴位血流圖采集結束后，經行腹主動脈取血，開胸取出大鼠心臟，放于生理鹽水中，進行心臟內血液的排出工作，觀察心臟內大致無殘留余血后再用干凈的生理鹽水沖洗1遍，隨后保存固定于4%多聚甲醛溶液中。固定后的心臟標本進行常規脫水操作，隨后用HE染色。最后在顯微鏡下觀察心肌組織的形態學變化。

1.3 統計學方法 數據處理軟件采用SPSS 20.0統計軟件，計量資料用平均值±標準差（±s）表示。檢測組間差異的統計方法采用單因素方差分析，組間兩兩比較用LSD檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 4組大鼠心肌細胞HE染色結果 正常組心肌細胞完整心肌纖維排列正常；假手術組有心肌組織少量斷裂，但是仍與周圍心肌組織有所連續，無明顯斷裂及心肌細胞損傷現象；模型組心肌細胞鏡下顯示心肌細胞胞質呈不規則顆粒狀，細胞核碎裂、消失，心肌纖維周圍有少量中心粒細胞浸潤，并有凝固性壞死等現象；高頻電針“內關”組鏡下顯示缺血壞死區內有細胞增生的現象，并呈梭形排列；高頻電針“非穴”組鏡下心肌細胞與模型無明顯差異。見圖2。

2.2 4組大鼠雙側“內關”“郄門”“天泉”穴區域皮膚血流量比較

4組間“內關”穴區域皮膚血流量比較，正常組與模型組比較，差異有統計學意義（P<0.05），且與高頻電針“非穴”組比較，差異有統計學意義（P<0.05）；模型組與高頻電針“內關”組比較，差異有統計學意義（P<0.05），而與高頻電針“非穴”組比較，差異無統計學意義（P>0.05）；高頻電針“內關”組與高頻電針“非穴”組比較，差異有統計學意義（P<0.05）。見表1。

4組間“郄門”穴區域皮膚血流量比較，正常組與模型組比較，差異有統計學意義（P<0.05），與高頻電針“非穴”組比較，差異有統計學意義（P<0.05）；模型組與高頻電針“內關”組比較，差異無統計學意義（P>0.05），而與高頻電針“非穴”組比較，差異無統計學意義（P>0.05）；高頻電針“內關”組與高頻電針“非穴”組比較，差異無統計學意義（P>0.05）。見表1。

4組間“天泉”穴區域皮膚血流量比較，正常組與模型組比較，差異有統計學意義（P<0.05），且與高頻電針“非穴”組比較，差異有統計學意義P<0.05）；模型組與高頻電針“內關”組比較，差異無統計學意義（P>0.05），而與高頻電針“非穴”組比較，差異無統計學意義（P>005）；頻電針“內關”組與高頻電針“非穴”組比較，差異無統計學意義（P>0.05）。見表1。

3 討論

近年來經穴區域血流灌注量的特異性表現研究日益增多，經穴區域血流灌注量的變化已經得到了臨床與實驗研究證實。有研究表明，提插補瀉對于健康人足三里穴區血流灌注量有明顯的提高作用，其中提插補法最為明顯，其次為提插瀉法，平補平瀉的影響較為平穩。

隨著心血管疾病發病率升高，對于心肌缺血的研究也日益增多，有研究表明“內關”“天泉”穴的皮膚電阻值在心肌缺血后有明顯降低的現象[10]；還有研究表明“郄門”穴區皮膚血流量無顯著變化，左側相關經穴“內關”穴區皮膚血流量有明顯升高，右側非相關經穴“足三里”穴區皮膚血流量明顯降低[11]。有研究表明，交感神經調控皮膚血流量變化，并且主要體現在交感縮血管神經支配方面[12]。激光散斑對比成像技術在臨床與實驗中廣泛用于檢測皮膚血流灌注量的變化，有研究表明刺激經上穴位與非穴之間皮膚血流灌注量有顯著性差異，“經脈所過，主治所及”。

本實驗結果顯示，心肌缺血造模成功后，雙側“內關”“郄門”“天泉”穴區域皮膚血流量均顯著降低。高頻電針“內關”穴與模型組比較，“內關”穴區域血流灌注量具有顯著性增高，并且高頻電針“內關”穴與高頻電針非穴組行比較，“內關”穴區血流灌注量也具有顯著性升高，而“郄門”“天泉”穴則無明顯差異。提示高頻電針“內關”穴對于心肌缺血狀態有明顯的改善作用，并且在心肌處于不同狀態時，“內關”穴更具有反映心肌狀態的意義。高頻電針“內關”的改善作用可能與電針“內關”后中樞腎上腺素能系統的參與有關，電針“內關”可能通過興奮α受體、抑制β受體興奮作用，改善缺血心肌供血供氧的中樞機制，從而有助于心肌缺血的恢復。而3個穴位對于心肌處于高頻電針干預態時的不同反應機制，可能和心臟與內關穴之間的神經聯系有關，心臟和內關穴之間既有中樞性的長反射，也有與中樞神經系統無關的短反射，兩者的聯系途徑是正中神經，有研究表明交感神經的2種分支支配皮膚血管的舒縮反應，一種是交感神經去甲腎上腺素能血管收縮系統，可以通過釋放NE、神經肽Y等遞質來使皮膚血流量減少；另一種則是非去甲腎上腺素血管舒張系統，皮膚血流量的增加需要系統釋放的NO、P物質等遞質的共同作用[13]。前期研究表明，心肌缺血后，大鼠“內關”“郄門”“天泉”等經穴NE含量均顯著升高，提示交感神經去甲腎上腺素能血管收縮系統的激活，因此血管收縮，導致“內關”“郄門”“天泉”等穴均有一定程度的血流灌注量下降[14]；而有研究揭示迷走神經不是郄門心臟聯系的主要傳出途徑，但有一定的作用，可能是一個次要途徑[15]。針刺對機體自主神經的功能活動有雙向調節作用，其作用方式取決于機體的狀態，心肌缺血高頻電針干預后，機體交感、迷走神經興奮，因此在“郄門”“天泉”穴血流灌注量雖有所回升，但無顯著性差異，而“內關”穴可能由于與心臟的短反射等因素而顯著性回升。從中醫角度考慮，“郄門”為手厥陰心包經郗穴，為氣血深聚的部位，而穴區血流灌注量為淺表皮層，未達肌肉深層，因此血流灌注量回升有限，無法體現統計學意義。

綜上所述，“內關”穴高頻電針自己顯示出改善心肌缺血情況的顯著效果。并且心肌細胞處于不同狀態時，“內關”穴位區域的皮膚血流灌注量變化顯著，而其他相關經穴“郄門”“天泉”穴則沒有明顯變化。提示心肌處于不同狀態時，內關穴有一定的特異性反應價值。

參考文獻

[1]卞鏑，田輝，隋月皎，等.電針“內關”對缺血性心肌損傷大鼠鈉離子通道相關蛋白的影響[J].中國針灸，2016，36（1）：64-68.

[2]李夢.電針內關、心俞改善急性心肌缺血大鼠血流變參數的協同作用[J].甘肅中醫學院學報，2008，25（2）：11-13.

[3]宋丹丹，李玉珍，郭渝成，等.健康國人皮膚溫度、血流灌注量及局部加熱效應[J].微循環學雜志，2013，23（3）：28-30.

[4]鄭淑霞，許金森，潘曉華，等.經脈線與非經脈線微循環血流灌注量的比較及針刺對其的影響[J].針刺研究，2012，37（1）：53-58.

[5]邵毅全，唐潔媛，張興龍，等.激光多普勒血流儀對人體經穴皮膚血流灌注量的觀察[J].激光雜志，2007，28（4）：81-82.

[6]袁強，張貴林，吳靜曄，等.3D計算機導航下經椎弓根骨水泥增強螺釘的應用[J].中華創傷骨科雜志，2014，16（3）：199-203.

[7]任之強，丁金勇，晉大祥，等.一期后路病灶清除植骨融合內固定治療胸腰椎結核[J].脊柱外科雜志，2014（6）：353-356.

[8]劉莉娟，谷淑玲.鹽酸戊乙奎醚對大鼠心肌缺血/再灌注損傷血流動力學的影響[J].徐州醫學院學報，2007，27（6）：370-372.

[9]張露芬.實驗針灸學[M].北京：化學工業出版社，2010：219-221.

[10]楊文君，張瑋瑋，付春梅，等.《中醫教育》2003-2013年載文被引及下載情況分析[J].北京中醫藥大學學報，2014，37（10）：718-720.

[11]胡瑯琳.皮膚血流的影響因素及檢測技術[J].微循環學雜志，2013，23（1）：64-66，70.

[12]國外重要心血管雜志論文摘要[J].高血壓雜志，2001，9（2）：184.

[13]Charkoudian N.Mechanisms and modifiers of reflex induced cutaneous vasodilation and vasoconstriction inhumans.J Appl Physiol（1985），2010，109（4）：1221-1228.

[14]劉巍，周玉杰，劉宇揚，等.有冠狀動脈旁路移植術史的急性心肌梗死患者經皮冠狀動脈介入治療的臨床預后[J].中國循環雜志，2013，28（3）：179-182.

[15]齊金蕾，王黎君，周脈耕，等.1990-2013年中國男性前列腺癌疾病負擔分析[J].中華流行病學雜志，2016，37（6）：778-782.