臺灣泥鰍奇異變形桿菌的分離與鑒定

孫翰昌 孫沖 劉迪

摘 要：該文從患爛鰓病臺灣泥鰍分離了致病菌，進行生化鑒定及藥敏試驗。結果顯示，臺灣泥鰍爛鰓病的致病菌初步鑒定為奇異變形桿菌（Proteus mirabilis），而藥敏試驗結果表明，奧復星、環丙氟哌酸抑菌效果最好，其他依次為阿莫西林、氧氟沙星、頭孢西丁、強力霉素、紅霉素、氯霉素、VI、滿、IV、卡那霉素、慶大霉素、四環素、復達新、復方新諾明、V、酮（先鋒必）、多粘菌素、痢特靈，其余藥物則沒有抑菌效果。

關鍵詞：臺灣泥鰍；爛鰓病；奇異變形桿菌；抗生素

中圖分類號 S941.42 文獻標識碼 A 文章編號 1007-7731（2018）07-0025-3

臺灣泥鰍（Paramisgumus dabryanus ssp.）屬鰍科花鰍亞科副泥鰍屬，是大鱗副鰍的改良品種，具有個體大、生長速度快，肉質細嫩鮮美、營養豐富、餌料系數低等特點[1]。近年來，隨著市場需求量的增加，集約化人工養殖泥鰍業迅猛發展。但高密度養殖及飼養管理不當容易導致疾病的發生，給泥鰍行業帶來了巨大的經濟損失。細菌性疾病是鰍科魚類最常見的一種疾病，主要包括爛鰓病、腸炎病、赤皮病、出血病等[2]。其中細菌性爛鰓病是對淡水養殖魚類，尤其是對集約化養殖魚類危害最大。目前，已有鯉魚（Cyprinus carpio）[3]、草魚（Ctenopharyngodon idellus）[4]爛鰓病原因及防治的相關研究，但國內未見有關臺灣泥鰍爛鰓病的病因及防治研究的報道。為此，本研究對臺灣泥鰍爛鰓病致病菌株進行了分離鑒定，并初步研究了27種抗菌藥物對分離菌株的敏感性，以期為該病的診斷和防治提供依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 泥鰍 試驗用魚為重慶市永川區某水產養殖場內采集的100尾規格整齊、體質健壯、肌肉豐富、無病無傷、體色鮮亮、生活力強的臺灣泥鰍。25℃暫養7d正常后用于試驗。

1.1.2 實驗藥品及培養基 腸桿菌科細菌生化鑒定管及其他細菌生化鑒定所需試劑購自上海易佰聚經貿有限公司；常規藥品均為實驗室所有，LB培養基、顯色配培養基均在實驗室配置。

1.2 方法

1.2.1 致病菌提取、分離與鑒定 取典型爛鰓病瀕死臺灣泥鰍，體表用無菌水沖洗，75%酒精消毒，無菌取深層潰爛皮膚，在無菌勻漿玻璃器中研磨，并用無菌水按1∶1比例混合成懸液，涂布于固體培養基，于37℃恒溫箱培養3d，然后進行劃線分離。無菌挑取少量菌種，于LB培養基純化。純化后經革蘭氏染色和相關生理生化鑒定[5]。

1.2.2 感染試驗 分別用2mL、4mL、6mL的無菌水將奇異變形桿菌稀釋成不同濃度梯度菌懸液，用1mL的注射器分別吸取0.2mL、0.4mL、0.8mL，進行肌肉注射，同法注射生理鹽水作為對照組；25℃左右水族箱喂養，觀察記錄臺灣泥鰍發病情況，解剖瀕死臺灣泥鰍并分離致病菌。

1.2.3 藥物敏感試驗 分離菌株接種平皿培養基，用無菌鑷子取藥敏片均勻貼在培養基表面，37℃培養24h，測定抑菌圈[6]。

2 結果與分析

2.1 菌株鑒定結果 分離菌株染色觀察結果表明提取菌株為革蘭氏陰性短桿菌，生化鑒定結果見表1、表2。本次試驗結果為AG207，根據《腸桿菌科菌編碼鑒定的數碼組合表》[5]比對，初步鑒定AG207為奇異變形桿菌（Proteus mirabilis）。

2.2 感染試驗結果 肌肉注射菌懸液觀察，第1d，注射0.2mL試驗體死亡；3d后全部試驗體死亡（見表3），且與自然發病臺灣泥鰍癥狀相似，故再次確定奇異變形桿菌為致病菌。

2.3 藥敏試驗結果 根據藥物敏感實驗判定標準[7]判斷：27種藥敏片敏感試驗中，奇異變形桿菌對奧復星、環丙氟哌酸、阿莫西林、達、氧氟沙星、頭孢西丁、強力霉素、紅霉素、氯霉素、VI、滿、IV、卡那霉素、慶大霉素、四環素、復達新、復方新諾明、V極敏感；對酮（先鋒必）、多粘菌素高度敏感；對痢特靈中度敏感；對苯唑西林、青霉素、萬古霉素、氨芐西林、羧甲司坦、潔霉素c不敏感（見表4）。結果顯示：奧復星、環丙氟哌酸、阿莫西林等18種極敏藥物可作為治療和預防臺灣泥鰍爛鰓病的參考藥物。

3 討論

本研究鑒定的奇異變形桿菌可感染泥鰍發生爛鰓病，是導致臺灣泥鰍爛鰓的重要病原。感染試驗發現，奇異變形桿菌濃度與死亡速度成正比，推斷試驗體死亡可能與該菌的致死性毒素相關。

奇異變形桿菌引起動物染病死亡病例在水貂（Neovison vison）[8]、雞（Gallus gallus domesticus）[9]、中華鱉（Trionyx Sinensis）[10]等有過報道。不同奇異變形桿菌菌株對藥物敏感程度不同，朱明華等[11]試驗得到奇異變形桿菌對青霉素、紅霉素、四環素不敏感；陳武[12]試驗得到奇異變形桿菌對慶大霉素、氯霉素、紅霉素不敏感。本研究結果表明青霉素對奇異變形桿菌沒有抑菌效果，與朱明華等研究一致。奇異變形桿菌敏感藥物有差異可能與物種生活環境有關，也可能與不同物種養殖戶用藥導致的耐藥機制有關。

泥鰍細菌性疾病發病原因復雜，感染速度快，容易給生產帶來巨大的經濟損失。養殖戶常用化學藥劑進行防治，由于泥鰍屬于高密度養殖，容易造成水質惡化，泥鰍免疫力降低，因此，對泥鰍疾病的防治最好采用生物防治，以利于生態養殖。張濤等[2]認為在泥鰍飼料中適量添加中草藥可以提高泥鰍的免疫力。

參考文獻

[1]李艷華，胡佳，先大強，等.提高臺灣泥鰍產后親鰍成活率研究[J].黑龍江畜牧獸醫，2017（8）：202-203.

[12]張濤，于家華，陸遠東.泥鰍細菌性疾病生物防治技術[J].安徽農學通報，2015，21（14）：143，177.

[3]葉原土，李林貴，陳澤華.鯉爛鰓病的發生原因與殺菌藥物研究[J].西南農林學報，1998，11（13）：111-119.

[4]丁慶秋，汪學平.草魚爛鰓病的發病原因及防治方法[J].養殖與飼料，2012，9（47）：89-90.

[5]張慶華，瞿小英，鄭岳夫，等.大黃魚體表潰爛癥病原菌的鑒定[J].上海水產大學學報，2003，12（3）：233-237.

[6]倪語星，王金良，徐英春，等.抗微生物藥物敏感性試驗規范[M].上海：上海科學技術出版社，2002：62-69.

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[8]胡傳偉，賈赟，簡中友，等.水貂奇異變形桿菌的分離與鑒定[J].經濟動物學報，2006，10（2）：77-79.

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[10]林亞歌，葉鍵，石婷婷，等.中華鱉源奇異變形桿菌的分離鑒定與致病性研究[J].水產科學，2014，33（12）：800-803.

[11]朱明華，朱瑞良，馬榮德，等.雞奇異變形桿菌的分離鑒定和16SrRNA基因序列測定與系統進化分析[J].中國獸醫學報，2011，31（6）：804-808.

[12]陳武.鹿科動物奇異變形桿菌的診治[J].中國獸醫雜志，2002，38（5）：28.

（責編：張宏民）