WFDC2編碼的HE4在肺癌診斷和療效監(jiān)測中的應用價值

羅佳齡， 彭 霞， 林 堃， 李 莉

（上海交通大學附屬第一人民醫(yī)院檢驗科，上海 200080）

WFDC2編碼的人附睪蛋白4（human epididymis protein 4，HE4）是乳清酸性糖蛋白的一種。近來發(fā)現(xiàn)，HE4與卵巢癌密切相關，目前已獲得美國食品與藥品監(jiān)督管理局的支持，成為一種卵巢癌新的腫瘤標志物[1]。除卵巢癌外，HE4在多種腫瘤中均存在表達異常升高的現(xiàn)象[2]。肺癌是最常見的惡性腫瘤之一，目前肺癌常用的腫瘤標志物如細胞角蛋白19片段（cytokeratin 19 fragment，CYFRA21-1）、神經(jīng)元特異性烯醇化酶（neuron-specific enolase，NSE） 、癌胚抗原（carcinoembryonic antigen，CEA）、鱗狀細胞癌（squamous cell carcinoma，SCC）相關抗原等往往在腫瘤負荷較重時才顯著升高，敏感性和特異性均不令人滿意，不足以幫助臨床早期發(fā)現(xiàn)肺癌。有研究者發(fā)現(xiàn)在部分肺癌患者的血清和組織中HE4可呈高水平表達[3-4]。本研究通過檢測肺癌患者血清HE4水平來評價HE4在肺癌診斷中的臨床應用價值。

1 材料和方法

1.1 研究對象

選取2015年2月—2016年1月于上海交通大學附屬第一人民醫(yī)院呼吸科、腫瘤科、胸外科住院，首次確診為肺癌的患者226例為肺癌組，其中男154例、女72例，年齡62（56，68）歲。肺癌患者中非小細胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）患者203例，其中Ⅰ和Ⅱ期患者135例，Ⅲ和Ⅳ期無轉移者24例，Ⅲ和Ⅳ期有轉移者44例；小細胞肺癌（small cell lung cancer，SCLC）患者23例，其中局限期（limited-stage disease，LD）8例，廣泛期（extensive-stage disease，ED）15例。所有病例均經(jīng)臨床和病理等確診。正常對照組為同期同地常規(guī)查體、化驗及影像學等檢查結果無異常的健康體檢者100名，其中男50名、女50名，年齡62（41，70）歲。良性疾病對照組為128例在呼吸科住院的單純性肺部良性疾病（包括肺炎、慢性阻塞性肺病、肺良性腫瘤等，排除含有惡性胸腹水或合并肝、腎、生殖系統(tǒng)疾病或有惡性傾向的病例）患者，其中男69例、女59例，年齡60（49，70）歲。3組研究對象的年齡、性別差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 樣本收集 抽取所有患者術前清晨空腹肘正中靜脈血3 mL于普通血清管內，立即送實驗室，于4 ℃條件下4 000×g離心10 min， 取上清液置1.5 mL離心管內，-40 ℃保存待用。另選取在上海交通大學附屬第一人民醫(yī)院首次確診為肺癌且之后繼續(xù)化療的患者，跟蹤1年，1年后再次抽血檢測血清HE4水平。

1.2.2 檢測方法 HE4測定采用酶聯(lián)免疫法，試劑盒購自瑞典CanAg Diagnostics公司，儀器為上海科華生物工程有限公司ST-360全自動酶標儀，具體操作嚴格按照說明書執(zhí)行。SCC相關抗原測定試劑盒購自美國雅培公司，儀器為美國雅培公司生產(chǎn)的i2000全自動微粒子化學發(fā)光免疫分析儀。CYFRA21-l、NSE、CEA檢測采用電化學發(fā)光法，試劑由德國羅氏公司提供，儀器采用德國羅氏公司生產(chǎn)的E602電化學發(fā)光儀，質控品采用英國朗道公司生產(chǎn)的腫瘤高低值質控品，質控判斷標準為Westgard多規(guī)則分析。

1.2.3 臨床分期和化療療效評價標準 按照國際抗癌聯(lián)盟（the Union for International Cancer Control，UICC）2009年制定的第7版國際TNM分期標準對腫瘤進行分期。化療療效則按照實體瘤的療效評價標準（response evaluation criteria in solid tumors，RECIST）進行評價。

1.3 統(tǒng)計學方法

數(shù)據(jù)比較及受試者工作特性（receiver operating characteristic，ROC）曲線的曲線下面積（area under curve ，AUC）用SPSS 19.0軟件進行統(tǒng)計分析。計量資料分析結果用中位數(shù)（四分位數(shù)）[M（P25，P75）]表示，組間比較采用秩和檢驗，化療前后比較采用Wilcoxon符號秩和檢驗，聯(lián)合檢測比較采用χ2檢驗。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 各組血清HE4水平的比較

肺癌組血清HE4水平明顯高于正常對照組和良性疾病對照組（P＜0.05）；不同病理類型肺癌患者血清HE4水平差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。見表1。

2.2 HE4與CEA、CYFRA21-1、NSE、SCC相關抗原對肺癌診斷效能的比較

采用肺癌患者和正常人的HE4、CEA、NSE、CYFRA21-1、SCC相關抗原測定值作ROC曲線，并一次同時輸入HE4、CEA、NSE、CYFRA21-1、SCC相關抗原所有數(shù)據(jù)進行單步回歸且轉化成聯(lián)合參數(shù)LOGREGR_Pred1與各項腫瘤標志物作ROC曲線比較。結果發(fā)現(xiàn)在診斷肺癌時，HE4的AUC大于其他4項血清腫瘤標志物。見表2和圖1。

表1 各組血清HE4水平的比較[pmol/L，M（P25，P75）]

2.3 不同臨床分期肺癌患者血清HE4水平的比較

203例NSCLC患者中，Ⅰ和Ⅱ期患者的血清HE4水平低于Ⅲ和Ⅳ期患者；Ⅲ和Ⅳ期無轉移患者血清HE4水平低于Ⅲ和Ⅳ期有轉移患者。23例SCLC患者中LD患者與ED患者血清HE4水平差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表3。

表2 各腫瘤標志物及5種腫瘤標志物聯(lián)合參數(shù)對肺癌診斷效能的比較

圖1 HE4、CEA、NSE、CYFRA21-1、SCC相關抗原單獨和聯(lián)合檢測對肺癌診斷的ROC曲線

2.4 HE4對肺癌療效監(jiān)測的作用

對54例符合要求的肺癌化療患者，化療后1年再次抽血檢測血清HE4水平，發(fā)現(xiàn)19例疾病進展患者治療后血清HE4水平升高（P＜0.05），15例部分緩解患者和19例病灶穩(wěn)定患者化療前后血清HE4水平差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。見表4。

表3 各臨床分期肺癌患者血清HE4水平的比較[pmol/L，M（P25，P75）]

表4 54例化療患者化療前后血清HE4水平的比較 [pmol/L，M（P25，P75）]

3 討論

WFDC2編碼的HE4是由KIRCHHOFF等[5]于1991年在人附睪遠端上皮細胞中發(fā)現(xiàn)的。已有研究證明HE4在卵巢漿液性癌及卵巢子宮內膜樣癌細胞中呈高表達，能夠反映卵巢癌細胞的增殖、侵襲和轉移能力，其血清水平對于卵巢癌的早期輔助診斷和治療監(jiān)測具有較好的臨床價值[6]。

2006年BINGLE等[7]發(fā)現(xiàn)部分肺癌細胞可表達HE4，從此開啟了國內外學者們對HE4與肺癌之間關系的研究。IWAHORI等[8]對49例肺癌及18例卵巢癌患者血清HE4水平進行了測定，結果顯示2組患者血清HE4水平均較健康組明顯升高；此外，對其中24例化療后患者的生存率與HE4水平的關系進行分析，發(fā)現(xiàn)二者也有一定關系。TOKUISHI等[3]發(fā)現(xiàn)HE4-V3剪切變異體在肺腺癌中的表達水平會影響患者的預后。LAMY等[4]認為血清HE4水平越高，NSCLC患者的預后越差。肖然等[9]報道HE4檢測可以明顯提高肺腺癌的檢出率。

本研究結果顯示，肺癌組患者血清HE4水平高于良性疾病對照組和正常對照組（P＜0.05），說明HE4在鑒別良惡性肺腫瘤方面有一定意義。比較肺腺癌、肺鱗癌、SCLC患者血清HE4水平并無明顯差異（P＞0.05），說明血清HE4水平對不同病理類型的肺癌可能沒有指向性，這與于飛等[10]的研究結果基本一致，但如果能夠擴大肺鱗癌和SCLC的例數(shù)，結果會更加可靠。本研究繪制的ROC曲線清楚地顯示，HE4的AUC為0.860，比傳統(tǒng)的肺癌血清腫瘤標志物單項指標的AUC都高，而聯(lián)合檢測后的AUC可提高到0.906，說明HE4對肺癌的早期診斷有更好的特異性和敏感性，這可能與HE4在呼吸道的先天性防御作用有關。203例NSCLC患者中，Ⅰ和Ⅱ期患者血清HE4水平低于Ⅲ和Ⅳ期患者（P＜0.05）；Ⅲ和Ⅳ期無轉移患者血清HE4水平低于Ⅲ和Ⅳ期有轉移患者（P＜0.05）。23例SCLC患者中LD患者和ED患者血清HE4水平有明顯的差異，說明血清HE4水平可能與肺癌的進展程度密切相關，推測HE4的來源與肺腫瘤細胞的增殖、浸潤和轉移過程有關。從54例肺癌患者化療前后的血清水平對比來看，HE4的水平可以反映出化療無效病情進展的情況，部分緩解和治療后病灶穩(wěn)定的患者，其HE4血清水平基本上沒有太大波動，可以作為輔助監(jiān)測肺癌化療效果的指標之一，但是仍需要擴大樣本量進行跟蹤分析。

綜上所述，WFDC2編碼的HE4在肺癌的診斷、疾病進展及療效監(jiān)測方面具有較好的應用價值。隨著HE4在肺癌人群中的深入研究，HE4在肺癌中的應用將日趨廣闊。

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