NGX 6與IL-17 F在大腸癌及大腸腺瘤中的表達及其與VEGF的相關性分析

張蕾，薛永飛，張敬偉，任中海

南陽市中心醫院腫瘤內科，河南 南陽473000

大腸癌為臨床常見的一種消化道惡性腫瘤，乙狀結腸和直腸是其主要發病部位。近年來，隨著社會的發展、人們生活方式及環境的變化，大腸癌的發病率和病死率均呈逐年升高趨勢，而且逐漸趨向年輕化[1]。多數研究認為，大腸癌的發生與基因突變、環境因素、大腸腺瘤、遺傳和飲食等多因素共同影響有關。當前分子生物學調查結果顯示，大腸癌發生的進展因素為體內抑癌基因失活和原癌基因激活間的平衡被破壞。血管內皮細胞生 長 因 子（vascular endothelial growth factor，VEGF）為加速腫瘤新生血管產生的主要因子，主要對腫瘤細胞的增殖、遷移產生影響。NGX6為中南大學腫瘤分子研究所發現的新抑癌基因，其有表皮細胞生長因子樣結構域，能夠使表皮生長因子受體磷酸化含量降低，同時其還可以調控腫瘤血管形成。白細胞介素-17F（interleukin-17F，IL-17F）為活化單核細胞及CD4+T細胞的促炎性細胞因子[2-3]。本研究通過探討NGX6與IL-17F在大腸癌及大腸腺瘤中的表達及其與VEGF的相關性，旨在為臨床患者的診治提供一些新的思路。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2013年6月至2016年6月于南陽市中心醫院接受手術的67例大腸癌患者的大腸癌組織存檔標本。納入標準：①手術前均未接受任何化療、放療；②患者病歷信息完整。排除標準：有家族遺傳性綜合征相關疾病者，如家族性幼年性息肉病、家族性大腸腺瘤息肉病等。選取同期于本院接受治療的經鏡下活檢或術后病理學檢查確診為大腸腺瘤的82例患者的大腸腺瘤組織存檔標本；選取同期于本院行健康體檢的經腸鏡下活檢并經病理證實的35例健康體檢者的左半結腸正常組織存檔標本（正常結腸組織）。67例大腸癌患者中，男38例，女29例；年齡40～70歲，平均（59.83±5.14）歲；發病部位：結腸28例，直腸39例；TNM分期依據美國國立綜合癌癥網絡（NCCN）結直腸癌指南：Ⅰ～Ⅱ期37例，Ⅲ～Ⅳ期30例；組織分化程度：中低分化32例，高分化35例；有淋巴結轉移27例，無淋巴結轉移40例；浸潤程度：浸潤至漿膜層36例，未浸潤至漿膜層31例。82例大腸腺瘤患者中，男49例，女33例；年齡38～68歲，平均（58.14±5.29）歲；鋸齒狀腺瘤17例，絨毛狀腺瘤23例，管狀-絨毛狀腺瘤19例，管狀腺瘤23例。35例健康體檢者中，男21例，女14例；年齡39～70歲，平均（57.92±5.07）歲。3組對象的年齡、性別等一般資料比較，差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 主要儀器與試劑

RM2145型切片機購自德國LEICA公司，SPX-250B型電生化培養箱購自上海躍進醫療廠，DHG9053A型電熱恒溫鼓風干燥箱購自上海蘇進儀器廠，VEGF鼠抗人多克隆抗體、抗體稀釋液均購自北京中杉金橋公司，NGX6、IL-17F鼠抗人多克隆抗體均購自上海柏根生物公司，磷酸鹽緩沖液（phosphate buffer saline，PBS）購自福建華燦生物公司。

1.3 觀察指標及評價標準

所有組織標本均經10%甲醛固定及石蠟包埋，采用免疫組化法檢測大腸癌組織、大腸腺瘤組織與正常結腸組織中NGX6、IL-17F及VEGF的表達情況。染色強度評分：細胞未染色為0分；細胞呈淡黃色染色為1分；細胞呈棕色染色為2分；細胞呈棕褐色染色為3分。陽性細胞所占比例評分：0分，陽性細胞所占比例≤5%；1分，陽性細胞所占比例為6%～25%；2分，陽性細胞所占比例為26%～50%；3分，陽性細胞所占比例為51%～75%；4分，陽性細胞所占比例＞75%。免疫組化結果為將陽性細胞所占比例和染色強度的得分相乘，＞3分為陽性，≤3分為陰性[4]。

1.4 統計學分析

采用SPSS 19.0軟件對數據進行分析。計數資料以率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗；相關性分析采用Spearman檢驗。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 VEGF、IL-17 F、NGX 6陽性表達率的比較

大腸癌組織中，VEGF的陽性表達率高于大腸腺瘤組織和正常結腸組織，IL-17F、NGX6的陽性表達率均低于大腸腺瘤組織和正常結腸組織，差異均有統計學意義（P＜0.05）；大腸腺瘤組織中，VEGF的陽性表達率高于正常結腸組織，IL-17、NGX6的陽性表達率均低于正常結腸組織，差異均有統計學意義（P＜0.05）。（表1）

表1 VEGF、IL-17 F、NGX 6在不同組織中陽性表達情況的比較

2.2 NGX 6、IL-17 F表達與大腸癌患者臨床特征的關系

NGX6的陽性表達與大腸癌患者的浸潤深度、TNM分期和淋巴結轉移情況有關（P＜0.05）；IL-17F的陽性表達與大腸癌患者的浸潤深度、組織分化程度和淋巴結轉移情況有關（P＜0.05）。（表2）

2.3 大腸癌中IL-17 F、NGX 6與VEGF的相關性分析

大腸癌中，IL-17F與VEGF表達呈負相關（r=-0.72，P＜0.05）；NGX6與VEGF表達呈負相關（r=-0.63，P＜0.05）。（表3）

3 討論

腫瘤的生長主要依賴于血管提供的營養物質，新生血管的形成是腫瘤生長的關鍵因素。既往研究表明，體內多種因子共同對新生血管的形成起著調控作用，其中促血管生成因子起主要作用[5-6]。VEGF能特異性地作用于血管內皮細胞，其對血管的影響最強。在一些基礎因素發生變化時，如抑癌基因突變、癌基因激活、缺氧和pH值改變等，均可以使VEGF的表達上調，VEGF可以加強微血管通透性，加快血管內皮細胞增殖，同時刺激多種細胞因子分解出基質金屬蛋白酶，加快組織浸潤與腫瘤轉移[7-9]。

表2 NGX 6和IL-17 F表達與大腸癌患者臨床特征的關系

表3 大腸癌中IL-17 F、NGX 6與VEGF的表達情況

NGX6為新發現的一種抑癌基因，由于該基因含有表皮生長因子樣結構域，因此含有表皮生長因子樣結構域的蛋白可以通過該結構域調節腫瘤血管的形成，從而影響腫瘤的發生與進展。相關研究表明，NGX6在結腸癌HT-29細胞中不僅可以使cyclin E和cyclin D1的表達下調，還可以使p27的表達上調，延緩腫瘤細胞由G1期到S期的過渡，對腫瘤細胞的增殖產生抑制作用[10-12]。張曉梅等[13]采用RT-PCR等檢測大腸癌組織中NGX6的表達情況，結果顯示NGX6在大腸癌組織中的表達水平低于癌旁正常結腸組織，且NGX6表達與患者的淋巴結轉移及遠處轉移有關。采用凝膠遷移實驗研究NGX6對結腸癌HT-29細胞的NF-κB影響，結果顯示NGX6可以抑制NF-κB活性，進而抑制患者體內新生血管的形成。本研究結果顯示，與大腸腺瘤組織和正常結腸組織相比，大腸癌組織中的NGX6陽性表達率降低（P＜0.05），VEGF陽性表達率增高（P＜0.05），NGX6與VEGF的表達呈負相關，表明NGX6基因通過下調VEGF表達水平對新生血管產生抑制作用，進而抑制腫瘤的發生與進展。IL-17F是IL-17家族中新近發現的一個成員，Starnes等[14]在毛細血管生成實驗中發現，IL-17F能明顯抑制血管內皮細胞增殖，誘導靶細胞分泌單核細胞趨化蛋白1、白細胞介素-2及轉化生長因子-β等多種細胞因子，最終達到抑制血管生成的目的。此外，IL-17F還能夠誘導產生多種促炎性細胞因子和趨化因子，增強粒細胞和中性細胞的聚集。盛偉華等[15]對表達人IL-17F的重組腺病毒載體（Ad-hIL-17F）的研究發現，該載體能夠明顯抑制ECV304細胞的生長，抑制293A細胞和ECV304細胞中血管生成素-1、VEGF的表達，同時研究還發現Ad-hIL-17F能夠通過下調血管生成素-1和VEGF水平而抑制新生血管的形成。本研究結果顯示，與大腸腺瘤組織和正常結腸組織相比，大腸癌組織中IL-17F的陽性表達率降低，IL-17F和VEGF表達呈負相關，表明大腸癌的發生與進展中有IL-17F的參與，可能通過下調VEGF表達抑制新生血管形成而抑制大腸癌的發生、發展。

綜上所述，IL-17F、NGX6可以通過下調VEGF表達，抑制新生血管形成，從而抑制腫瘤的發生。

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