染色法快速檢測面粉中蟲卵技術研究

◎ 莊義捷

（清遠市糧食儲備庫，廣東 清遠 511500）

面粉是麥類糧食的主要產品及重要中間產品，其加工、檢測、儲藏是關系民生發展的重要事務。面粉的檢測與儲藏并沒有相應較為完善成熟的方法，以達到高效經濟。在面粉的進出口貿易中，面粉中昆蟲蟲卵的檢測是一項判斷面粉質量好壞的指標，建立一種快速檢測面粉中昆蟲蟲卵含量的方法是面粉產業中亟待解決的重要問題[1-2]，本課題對染色法快速檢測面粉中蟲卵進行了深入研究。

1 材料與方法

1.1 供試蟲卵

選取面粉中常見害蟲赤擬谷盜作為蟲卵來源，文獻和實踐證明赤擬谷盜蟲卵不能通過80#篩子。選用單一面粉作為飼料，面粉先經過80#篩子，篩去大于80#篩孔的面粉或面團。挑選體表較為干凈的赤擬谷盜進行飼養。經過24 h就可以進行蟲卵采集。收集后暫存于培養皿中，待用。

1.2 儀器與試劑

1.2.1 主要儀器

本研究所用的主要儀器名稱、型號和生產廠家見表1。

表1 主要儀器表

1.2.2 主要試劑

本研究所利用的主要試劑名稱、型號和生產廠家見表2。

表2 主要試劑表

1.2.3 試劑的配制

硫酸（1∶19）：取5 mL濃硫酸溶于95 mL蒸餾水中。置于玻璃瓶中保存。

0.1%溴甲酚綠：稱取溴甲酚綠0.1 g，溶于含有1.45 mL 0.1 mol/L氫氧化鈉溶液的蒸餾水溶劑中。置于棕色細口瓶中保存。

0.05%酸性品紅：稱取0.05 g酸性品紅，溶于99.95 mL蒸餾水中。置于棕色細口瓶中保存。

1.3 方法

1.3.1 蟲卵的采集和含蟲卵的測試樣品的準備

人工飼養赤擬谷盜來獲取同一時間段產下的蟲卵，經篩選后收集到專用容器中，待用。

FDA規定面粉蟲體碎片禁售水平為50 g面粉中75個昆蟲碎片，因此將7、14、28、56、112粒蟲卵分別加入5 g面粉中，作為待檢驗樣品。分析天平稱取5 g的面粉放在自封袋中，共稱取15個樣品，然后分別查取一定數量的害蟲蟲卵放在稱取好的5 g的面粉試樣中，混合均勻，每個蟲卵濃度準備3個樣品，共需要準備15個樣品。

1.3.2 試驗方法

準確稱取5 g小麥粉，并在開始分別加入7、14、28、56、112粒赤擬谷盜的蟲卵。完全混合后的面粉樣品用80目篩網篩選并收集面粉殘留物與蟲卵。面粉顆粒包裹的蟲卵轉移到250 mL燒杯中，并用2～3 mL乙醇潤濕，加入5 mL稀硫酸（1∶19）后蓋上一培養皿，并保持10 min的蒸氣浴。產物通過布氏漏斗低壓抽濾。對于每一組，在無吸力的情況下加入10 mL染色劑。2～3 min后，通過輕微的吸力將染色劑透過濾紙。后將濾紙轉移到培養皿中，用雙目顯微鏡觀察，統計卵數。計算蟲卵檢測率。

2 結果與分析

經過染色試驗后，溴甲酚綠將蟲卵染成黃橙色，面粉染成褐綠色，如圖1所示。酸性品紅將蟲卵與面粉染成粉紅色，蟲卵外觀近似透明，面粉相對顏色更深，如圖2所示。

圖1 溴甲酚綠染色效果圖

圖2 酸性品紅染色效果圖

溴甲酚綠染色結果見表3，從表3可以看出，經過染色試驗后，檢測發現的蟲卵數與實際蟲卵數有一定差距，均值約為75%。

表3 溴甲酚綠染色結果表

表4 酸性品紅染色結果表

3 討論

兩種染色劑效果接近，但都存在一定誤差。造成誤差的原因可能包括：①蟲卵在篩選過程中，卡在網眼或縫隙中，造成試驗結果偏低。②蟲卵經過稀硫酸的浸泡，并經過10 min的蒸氣浴，有部分蟲卵破裂，造成結果偏低。③蟲卵經過低壓抽濾過程，部分蟲卵破裂，造成試驗結果偏低。

染色法可將蟲卵染色，便于進行對比統計，但因為需要經過篩網過濾，對于蟲卵直徑有較高要求；對于已知害蟲種類的，可以精確篩網尺寸，但對于不明確害蟲種類的情況下，篩網尺寸不好確定，進而導致檢測進行困難或檢測結果有較大偏差[3]。染色法可以用于面粉中常見害蟲蟲卵的檢測，但難以普及至全部害蟲蟲卵的檢測。

4 結論

染色法可以將蟲卵與面粉染成不同的顏色：溴甲酚綠將蟲卵染成黃橙色，面粉染成褐綠色；酸性品紅將蟲卵染成粉紅色，面粉染成深紅色。兩種染色劑檢測結果相近，都具有一定偏差；染色法對于已知害蟲種類的檢測可以有較為理想的結果，但對于不明確害蟲種類的蟲卵檢測可能因為篩網、蟲卵直徑偏差導致檢測結果有較大偏差。染色法可以用于面粉中常見害蟲蟲卵的檢測，但難以普及至全部害蟲蟲卵的檢測。

[1]吳亞萍.面粉中常見的蟲害及潛在蟲害的檢測[J].現代面粉工業，2010（1）：53-55.

[2]張茂海.淺析全自動酶聯免疫分析系統的發展趨勢[J].國際檢驗醫學雜志，2011，32（14）：1655-1656.

[3]朱光輝，葉恭銀，胡 萃.用磷鎢酸還原法測定棕尾別麻蠅幼蟲尿酸[C]//城市昆蟲學進展—全國第六屆城市昆蟲學術討論會論文集，2001.