蒲桃枝葉化學成分預試及其總酚、總黃酮含量測定

1.嘉應學院醫學院，廣東 梅州 514031；2.嘉應學院醫學院附屬醫院藥劑科，廣東 梅州 514031

蒲桃(SyzygiumJambos)為桃金娘科(Myrtaceae)蒲桃屬常綠喬木，主產于我國廣東、廣西、海南、云南、臺灣等省區[1]，是嶺南地區民間習用藥材，已收載于《廣東省中藥材標準》[2]。蒲桃藥用歷史悠久，其不同藥用部位均可供藥用，其中蒲桃葉可以清熱解毒，主治口舌生瘡、瘡瘍、痘瘡；蒲桃莖功效為溫中散寒、降逆止嘔、溫肺止咳，用于胃寒呃逆、肺虛寒咳[3]。現代藥學研究表明，蒲桃及同屬其他植物具有顯著的降血糖、抗氧化、抗炎止痛、保肝及抑制白血病細胞等活性作用[4-7]。目前，以蒲桃為主的上市復方藥有“石岐外感茶”、和“前列寧膠囊”等，具有清熱解毒等功效，其中，復方“石岐外感茶”被評為廣東省嶺南文化遺產，在廣東非典時期廣受消費者歡迎。然而，目前國內外對蒲桃屬植物的研究多集中于海南蒲桃、洋蒲桃、丁香等少數品種，對蒲桃枝葉的現代化學成分、質量標準、藥理活性等方面的研究還處于起步階段[4]。實驗測定蒲桃枝葉的化學成分類型及其總酚和總黃酮的含量，為其進一步開發利用提供理論依據。

1 儀器與材料

1.1 藥材 蒲桃枝葉于2017年6月采自廣東省梅州市陰那山自然保護區，經嘉應學院醫學院天然藥物化學教研室林大都鑒定為桃金娘科(Myrtaceae)蒲桃屬常綠喬木蒲桃(Syzygiumjambos)的枝葉，標本存放于嘉應學院醫學院天然藥物標本館(編號：201706112)。

1.2 試劑 福林酚試劑(1N)(批號：20160117，上海金穗生物科技有限公司)，沒食子酸對照品(批號：20170410，上海金穗生物科技有限公司)，蘆丁標準品(批號：20160111，上海金穗生物科技有限公司)。95%乙醇、甲醇、石油醚(60～90 ℃)、三氯甲烷、正丁醇、濃鹽酸、氨水、濃硫酸、鎂、冰乙酸、醋酐、硼酸、碘化鉍鉀、碘、磷鎢酸、碘化鉀、鐵氰化鉀、三氯化鋁、三氯化鐵、硅鎢酸、間二硝基苯、磷鉬酸、氫氧化鉀、溴酚藍、香草醛、鹽酸羥胺、酒石酸鉀鈉、乙酸鎂 氫氧化鉀、2,4-二硝基苯肼、亞甲基藍、4-氨基安替比林、亞硝酰、鐵氰化鈉、對二氨基苯甲醛、3,5-二硝基苯甲酸、氯化鈉、氧化鋁、茚三酮、吡啶、苯甲酸、亞硝酸鈉、硫酸銅、硝酸鋁等均為分析純。

1.3 儀器 JP-100S型超聲波清洗器(深圳市潔盟清洗設備有限公司)；UV-1800型紫外-可見分光光度計(島津企業管理(中國)有限公司)；N-1100V型旋轉蒸發儀(上海愛朗儀器有限公司)；BT125D型電子分析天平(德國Sartorius公司)；BS110s型電子分析天平(德國Sartorius公司)。

2 方法與結果

2.1 實驗方法

2.1.1 蒲桃枝葉化學成分預實驗

2.1.1.1 石油醚提取液的制備 稱取粗粉 5 g，置于50 mL燒杯中，加石油醚20 mL，振蕩搖勻，密閉并多次振搖，室溫放置1 d，過濾，得石油醚提取液，供揮發油、油脂、甾體和三萜類成分的檢測[8-9]。

2.1.1.2 乙醇提取液的制備 取蒲桃枝葉粗粉 10 g，加入95%乙醇100 mL，加熱回流提取1 h，過濾，濾液分為兩份：一份為乙醇供試液用作黃酮類、蒽酮類、有機酸、香豆素和強心苷、內酯類等成分的檢測；一份經減壓濃縮等醇浸膏，取0.5 g醇浸膏于10 mL試管中，加入3 mL 2% HCl 溶液，超聲溶解，過濾，得醇浸膏酸水液，用作生物堿的檢測[8-9]。

2.1.1.3 水供試液的制備 取蒲桃枝葉粗粉 10 g，置于200 mL的三角燒杯中，加入100 mL蒸餾水，室溫浸泡過夜，濾取10 mL濾液用作氨基酸、多肽和蛋白質的檢測。剩余的浸液及藥渣在70 ℃水浴上熱浸1 h，過濾，濾液用于糖、多糖及其苷類、有機酸、鞣質類、酚類等成分的檢測[8-9]。

2.1.2 總黃酮含量的測定

2.1.2.1 蘆丁標準曲線的繪制 參考文獻[10]方法以蘆丁濃度(X)為橫坐標，吸光度(Y)為縱坐標，繪制蘆丁標準曲線。

2.1.2.2 樣品含量的測定 準確稱取蒲桃枝葉藥材粗粉5.0 g，置于100 mL三角燒瓶中，加入95%乙醇50 mL，室溫超聲提取3次，合并濾液，濾渣洗滌3次，過濾，轉移至1000 mL容量瓶中，定容至刻度，搖勻，即得供試品溶液。精密吸取供試品溶液2.0 mL于25 mL棕色容量瓶中，后續處理方法同2.1.2(1)項，測定供試品溶液的吸光度值(A)。

2.1.2.3 沒食子酸標準曲線的繪制 參考文獻方法[11]以沒食子酸吸光度(Y)為縱坐標，沒食子酸質量濃度(X)為橫坐標，繪制標準曲線。

2.1.2.4 總酚含量測定 準確稱取蒲桃枝葉藥材粗粉5.0 g，置于100 mL三角燒瓶中，加入95%乙醇50 mL，室溫超聲提取3次，合并濾液，濾渣洗滌3次，過濾，轉移至1000 mL容量瓶中，定容至刻度，搖勻，即得供試品溶液。精密吸取供試品溶液0.1 mL于10 mL棕色容量瓶中，后續處理方法同2.1.3(1)項，測定供試品溶液的吸光度值(A)。平行測定3次。

2.2 實驗結果

2.2.1 化學成分預實驗 采用試管實驗法、紙色譜法對2.1.1項下所得的蒲桃枝葉石油醚提取液、乙醇提取液、水提取液分別進行化學成分檢查，通過各種不同成分特有的顏色反應和沉淀反應，初步鑒定供試液可能含有的化學成分及其類型。實驗結果見表1～3。

表1 蒲桃枝葉石油醚提取液化學反應結果

“+” 示陽性結果， “-” 示陰性結果

表2 蒲桃枝葉乙醇提取液化學反應結果

“+” 示陽性結果， “-” 示陰性結果

表3 蒲桃枝葉水提取液化學反應結果

“+” 示陽性結果， “-” 示陰性結果

2.2.1 蒲桃枝葉總黃酮和總酚含量 在本實驗條件下，蘆丁回歸方程為Y=0.0131X-0.0003，相關系數(R2=0.9976)，結果表明蘆丁含量在0.00 ～ 49.26 μg/mL范圍內呈良好的線性關系。沒食子酸回歸方程為Y= 0.1056X+0.0257 (R2=0. 9974)，結果表明沒食子酸含量在0.00～10.01 μg/mL范圍內呈良好的線性關系；根據回歸方程得到蒲桃枝葉中總酚含量為24.71%，總黃酮含量為20.77%。結果見表4。

表4 蒲桃枝葉中總酚和總黃酮含量測定結果 (n=3)

3 討論

中藥及天然藥物是藥物的重要組成部分，其防病治病的物質基礎是其中所含的大量骨架結構多樣和生物活性廣泛的的有效成分。據報道，上市的新藥中有超過 1/3 直接或間接來源于天然產物，而在合成藥物中，也有相當一部分是借鑒了天然產物的骨架結構或藥效團[12-13]。我國具有豐富的中藥及天然藥物資源，且有傳統的中醫藥理論體系，并具有長期的臨床應用經驗。因此，從藥用植物中尋找和開發創新藥物是一條適合我國的新藥研發途徑。

本研究對梅州山區野生蒲桃枝葉可能含有的化學成分進行初步研究和分析，并測定了蒲桃枝葉乙醇提取物中總酚和總黃酮的含量。實驗結果表明，蒲桃枝葉中可能含有糖、多糖、苷類、黃酮、酚類、鞣質、內酯、香豆素、甾體、三萜、油脂等多種化學成分，其中總酚含量為24.71%，總黃酮含量為20.77%。初步確定了蒲桃枝葉中可能存在的化學成分，為其化學成分、質量標準、藥理活性及藥物開發的研究提供科學依據。

[1]中國科學院中國植物志編委會. 中國植物志(第53卷)[M]. 北京: 科學出版社, 1984: 68-69.

[2]廣東省食品藥品監督管理局. 廣東省中藥材標準(第一冊)[M]. 廣州: 廣東科技出版社, 2004: 200-201.

[3]國家中醫藥管理局《中華本草》編委會. 中華本草(第五冊)[M]. 上海：上海科學技術出版社, 1999：656-657.

[4]林大都, 成金樂, 彭麗華, 等. 蒲桃的研究進展[J]. 安徽農業科學, 2015, 43(10): 76-78.

[5]鄧家剛, 李學堅, 覃振林. 蒲桃仁提取物降血糖作用的實驗研究[J]. 廣西植物, 2006, 26(2): 214-216.

[6]Mohanty S, Cock I E. Bioactivity of Syzygium jambos methanolic extracts: Antibacterial activity and toxicity[J]. Pharmacognosy Research, 2010, 2(1): 4-9.

[7]Muniappan A, Pandurangan S B, Savarimuthu I. Syzygium cumini, a novel therapeutic agent for diabetes: Folk medicinal and pharmacological evidences[J]. Complementary Therapies in Medicine, 2013, 21:232-243.

[8]裴月湖. 天然藥物化學實驗指導[M]. 北京: 人民衛生出版社, 2016：140-158.

[9]甘典輝, 笪舫芳, 伍小燕, 等. 壯藥土生地化學成分預試研究[J]. 中國醫藥科學, 2014, 4(5): 43-45.

[10]李利華. 芹菜不同部位總黃酮含量測定及其抗氧化活性[J]. 食品研究與開發, 2013, 34(7): 12-15.

[11]關小麗, 楊子明, 顏小捷, 等. 8種殼斗科植物多酚含量及抗氧化能力[J]. 中國實驗方劑學雜志, 2015, 21(2): 65-69.

[12]葉文才. 中藥及天然藥物活性成分: 新藥研發的重要源泉[J]. 藥學進展, 2016, 40(10): 721-722.

[13]Newman D J, Cragg G M. Natural products as sources of new drugs over the 30 years from 1981 to 2010[J]. Journal of Natural Products, 2012, 75(3): 311-335.