蒙藥肋柱花的質量標準研究△

巴根那 包明蘭* 王秀梅 烏云嘎 奧烏力吉，2 王秀蘭，2

(1.內蒙古民族大學蒙醫藥學院，內蒙古 通遼 028000； 2.內蒙古蒙醫藥工程技術研究院，內蒙古 通遼 028000; 3.內蒙古民族大學蒙醫藥學院2015級碩士研究生,內蒙古 通遼 028000)

肋柱花蒙藥肋柱花是龍膽科植物肋柱花Lomatogonium carinthia- cum(Wulf)Reichb.的干燥全草，是蒙醫常用藥及特色藥材，蒙古名音譯為哈比日根-地格達，亦稱特木爾-地格達。按蒙醫藥理論，肋柱花具有清熱、健胃、愈傷等功效；用于溫熱、流感、傷寒、中暑頭痛、肝膽熱、黃疸、傷熱等病癥的治療[1-2]，也是蒙醫治療肝膽疾病的主要傳統藥物，臨床療效顯著。藥理研究表明，肋柱花含有的口山酮類化合物、獐芽菜苦苷、木犀草素、齊墩果酸等成分均有不同程度的利膽、保肝活性[3]，可在一定程度上揭示蒙藥肋柱花用于治療肝膽疾病的物質基礎。為了確保藥材質量，本文采用薄層色譜法對肋柱花中獐牙菜苦苷和木犀草素進行了定性鑒別；用HPLC法對肋柱花中獐牙菜苦苷進行定量分析，建立了質量控制方法。

1 儀器與試藥

1.1 實驗材料 獐牙菜苦苷對照品及木犀草素對照品是由中國藥品與生物檢驗所購買。(批號：0985-200403 ；11620-200402)。肋柱花由錫林浩特西烏珠穆沁旗蒙醫醫院提供。蒙藥肋柱花為龍膽科植肋柱花Lomatogonium carinthiacum(Wulf)Reichb.的干燥全草。全草由內蒙古民族大學蒙醫藥學院布和巴特爾教授鑒定為肋柱花全草(批號：20150711.20150823.20150814)。薄層色譜硅膠G，硅膠GF254均由青島海洋化學試劑公司提供。其他試劑均為分析純。

1.2 儀器 BS210S型(max210g d=0.1mg)電子天平(日本島津)；ZF-1型紫外燈(上海)；HHS21-4型恒溫水浴鍋(上海)；KQ-100型雙頻超聲波清洗器(昆山市)。高效液相色譜儀LC-20AT型(日本島津)；SPD-M10AVP紫外分光光度計(上海)。

2 方法與結果

2.1 薄層色譜鑒別

2.1.1 肋柱花中獐牙菜苦苷的薄層色譜鑒別 樣品溶液的制備：取肋柱花粗粉1.0g，置于錐形瓶中加25mL甲醇，加蓋，稱重，超聲50min，置于室溫放涼，稱重，加甲醇補足減失的重量，過濾，濾液備用。

獐牙菜苦苷對照品溶液的制備：精密稱取獐牙菜苦苷對照品5.0mg，置于10mL量瓶中加甲醇至刻度，混勻，再從溶液中吸取1mL液體，置于試管中加3mL甲醇，即得對照品溶液。

樣品溶液(3份)和獐牙菜苦苷對照品溶液分別吸取3μl，按《中華人民共和國藥典》(2015版 第四部0502)薄層色譜法[4-5]，分別點于同一羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠GF245薄層板上，以乙醚-乙酸乙酯-甲醇(1:5:2)為展開劑，展開10cm，晾干，在紫外燈(254nm)下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同的顏色斑點。(圖1)；再于硅膠GF254薄層色譜板上以乙酸乙酯-甲醇(10:2)，二氯甲烷-甲醇(17:3)作為展開劑，展開驗證時得到同樣的結果。(圖2～3)。

2.1.2 肋柱花中木犀草素的薄層色譜鑒別 樣品溶液的制備：稱取肋柱花粗粉1.0g置于錐形瓶中加25mL鹽酸-甲醇(2.5mol/L)溶液，加蓋，稱重，30min回流提取。置于室溫，稱重，加鹽酸-甲醇溶液補足減失的部分，過濾，濾液備用。

木犀草素對照品溶液的制備：從木犀草素對照品中稱取5.2mg，加5mL甲醇，配成1.04mg/mL溶液，備用。

樣品溶液(3份)和木犀草素對照品溶液各吸取6μL和2μL，按《中華人民共和國藥典》(2015版 第四部0502)薄層色譜法[4-5]，分別點于同一羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以環乙烷-乙酸乙酯-甲酸(10:10:2)作為展開劑，展開10cm，晾干，噴三氯鋁乙醇溶液，110℃加熱，在紫外燈(365nm)下檢視，，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同的顏色斑點。(圖4)；再于硅膠G薄層色譜板上以環己烷-乙酸乙酯-甲醇(10:8:2)和二氯甲烷-甲醇-甲酸(7:2:0.5)作為展開劑，展開驗證時得到同樣的結果。(圖5～6)。

2 定量測定研究[6-9]

2.1 色譜條件 色譜柱：Diam onsil C18 (250mm×4.6mm，5μm)；獐牙菜苦苷對照品的流動相為：甲醇-水(25:75)，檢測波長：237nm，柱溫：50℃，流速：1.0mL/min。

2.2 供試品溶液的制備 樣品溶液的制備：稱取肋柱花粗粉1.0g，加入錐形瓶中加25mL甲醇，加蓋，稱重，超聲處理50min，室溫晾干，稱重，加甲醇補足減失的重量，過濾，濾液吸取1mL置25mL量瓶中加甲醇至刻度，混勻，備用。(1mL溶液內1.6mg生藥)

獐牙菜苦苷對照品溶液的制備：精密稱取獐牙菜苦苷對照品10mg，置10mL量瓶中加甲醇至刻度，混勻。從溶液中精密抽取0.25mL置2mL量瓶中加甲醇至刻度，備用。

2.3 線性關系及其工作范圍的考察 按照“2.2”法制備的對照品溶液中分別精密吸取2.5μL，5μL，7.5μL，10μL，12.5μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測定其峰面積(A)并以峰面積(Y)對對照品的進樣量(X)進行線性回歸，得回歸方程：Y=9943898X-11915，r=0.999 9。結果表明，獐牙菜苦苷對照品進樣量在0.313μg ～1.563μg范圍內，與峰面積具有良好的線性關系，相關性顯著。結果見表1。

表1 線性關系檢測結果

2.4 精密度實驗 從2.2樣品溶液，以及獐牙菜苦苷溶液和木犀草素溶液各精密吸取10μL，分別用HPLC測量峰面積，同樣方法各進樣5次。結果顯示精密度良好。結果顯示樣品溶液獐牙菜苦苷RSD=0.36%和獐牙菜苦苷對照品RSD=0.16%。結果見表2。

表2 精密度實驗結果

2.5 穩定性試驗 按照“2.2”法制備的對照品溶液，各精密吸取10μL，每隔4h用HPLC測量峰面積，結果16h內穩定性良好，獐牙菜苦苷RSD=0.63%。結果見表3。

表3 穩定性檢測結果

2.6 重復性實驗 同一批號肋柱花樣品精密稱取1.0g，共稱取5份。照上述方法制得供試品溶液5份，按含量測定方法，分別精密吸取10μL，注入液相色譜儀，測定其峰面積，并計算含量，結果見表4。結果表明，該含量測定方法具有良好的重復性。獐牙菜苦苷RSD=0.97%。

表4 重復性實驗結果

2.7 回收率實驗 從樣品中稱取0.10g，6份。分別加獐牙菜苦苷對照品及木犀草素對照品，照上述方法制備供試品溶液，在上述色譜條件下測定，并按下列公式計算回收率結果，獐牙菜苦苷平均回收率為99.50%；RSD=0.92%。結果見表5。

回收率(%)=[測得量(mg)—樣品中含量(mg)/加入對照品量(mg)] ×100%

表5 回收率實驗結果

3 肋柱花中獐牙菜苦苷的含量測定

按照“2.2”法制備的樣品溶液，精密吸取10μL，按上述色譜條件下記錄峰面積，計算其含量，結果見表6。

表6 含量測定結果

4 結論

用3種不同展開系統進行肋柱花中獐芽菜苦苷和木犀草素的薄層鑒別結果，在本試驗條件下，均能檢出清晰的薄層斑點。用HPLC法測定肋柱花中獐芽菜苦苷和木犀草素的含量，結果本實驗條件下，獐芽菜苦苷平均含量為7.64～7.69mg/g。本研究方法操作簡便、可行可靠，重現性好，專屬性強，可用于肋柱花的質量控制。

本研究對蒙藥材肋柱花進行系統的質量標準控制，為臨床安全有效用藥及制定質量標準體系提供參考依據。

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