大補(bǔ)陰丸中多指標(biāo)成分研究

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一、研究意義

大補(bǔ)陰丸出自元代醫(yī)學(xué)家朱震亨著述的《丹溪心法》，此書由明代程充校訂，刊于1481年。原方載為黃柏（炒褐色）、知母（酒浸，炒，各四兩）、熟地（酒蒸）、龜板（酥炙）各六兩為末，豬脊髓和蜜丸，桐子大，每服七十丸、空心淡鹽湯下。此方降陰火補(bǔ)腎水。目前收錄于2015版《中國(guó)藥典》一部，其中在含量檢測(cè)項(xiàng)僅對(duì)黃柏的主要成分小檗堿進(jìn)行測(cè)定，無(wú)法全面反映此方君藥熟地黃和臣藥鹽知母等藥味，現(xiàn)主要對(duì)大補(bǔ)陰丸進(jìn)行全波長(zhǎng)3D掃描，確定其主要成分[1]。本文采用了HPLC-DAD法確定了大補(bǔ)陰丸中的主要成分。

二、儀器與材料

Agilent1260高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫科技有限公司）、DAD檢測(cè)器、Alltech6000型蒸發(fā)光散射檢測(cè)器、CBL-Model9960D型超聲振蕩儀、Sartorius BSA224S型電子天平。甲醇和乙腈（色譜純，安徽時(shí)聯(lián)特種溶劑股份有限公司），磷酸二氫鉀（分析純，天津博迪化工股份有限公司），水為純化水。其余試劑均為分析純，芒果苷對(duì)照品（111607，中國(guó)食品藥品檢定研究院），毛蕊花糖苷對(duì)照品（111530，中國(guó)食品藥品檢定研究院），密力特苷（19467-03-9）、新芒果苷（64809-67-2）和地黃苷 D（81720-08-3）均來(lái)自成都格利普生物科技有限公司，大補(bǔ)陰丸廠家為杭州胡慶余堂藥業(yè)有限公司。

三、研究方法與結(jié)果

1.大補(bǔ)陰丸HPLC-DAD含量測(cè)定

色譜條件：色譜柱：AccurasilC18（4.6mm×250mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈-0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液（30∶70）；流速為1.0ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為270nm；柱溫為35℃；進(jìn)樣量為10μl。

對(duì)照品溶液的制備：取芒果苷和毛蕊花糖苷對(duì)照品適量，精密稱定，加鹽酸-甲醇（1∶100）的混合溶液制成每1ml含芒果苷50μg和毛蕊花糖苷10μg的溶液，即得。

供試品溶液的制備：取本品水蜜丸，研細(xì)，取約0.3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入鹽酸-甲醇（1∶100）的混合溶液25ml，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理（功率140W，頻率42kHz）1小時(shí)，放冷，再稱定質(zhì)量，用上述混合溶液補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得[2]。

按照以上方法對(duì)大補(bǔ)陰丸進(jìn)行含量測(cè)定。（見(jiàn)圖1）

2.大補(bǔ)陰丸色譜條件的建立

對(duì)大補(bǔ)陰丸按照上述條件、方法進(jìn)行HPLC-DAD全波長(zhǎng)三維掃描。（見(jiàn)圖2）

圖1 大補(bǔ)陰丸含量色譜圖

圖2 大補(bǔ)陰丸全波長(zhǎng)三維掃描

通過(guò)全波長(zhǎng)掃描可以看出，在270nm處，色譜峰數(shù)目較多，且通過(guò)芒果苷（鹽知母）和毛蕊花糖苷（熟地黃）全波長(zhǎng)三維掃描（見(jiàn)圖3），可以看出在270nm處，兩者均有吸收。同時(shí)對(duì)熟地黃中所含化學(xué)成分進(jìn)行進(jìn)一步三維掃描，并確定了熟地黃中密力特苷的三維掃描色譜圖（見(jiàn)圖4），并證明了密力特苷對(duì)主方法沒(méi)有干擾，確定了此方法的合理性和優(yōu)越性[3]。

圖3 芒果苷和毛蕊花糖苷全波長(zhǎng)三維掃描

圖4 密力特苷三維掃描色譜圖

四、討論

本文首先對(duì)2015版《中國(guó)藥典》檢測(cè)方法進(jìn)行優(yōu)化，確定了最佳流動(dòng)相比例和吸收波長(zhǎng)（270nm），使各種成分得到了很好的分離效果。同時(shí)對(duì)大補(bǔ)陰丸進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，得到了主要成分芒果苷和毛蕊花糖苷三維立體色譜圖，證明了在270nm處二者均有吸收，此檢測(cè)方法能全面地反映大補(bǔ)陰丸的主要含量指標(biāo)，并且通過(guò)進(jìn)一步對(duì)君藥熟地黃和鹽知母中其他主要化學(xué)成分進(jìn)行三維掃描，驗(yàn)證了在270nm處密力特苷、地黃苷D和新芒果苷對(duì)主方法沒(méi)有干擾。因此本方法為大補(bǔ)陰丸的質(zhì)量控制提供了有效依據(jù)，可進(jìn)一步提高大補(bǔ)陰丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。※

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典（一部）[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2015.

[2]蔡鈴英，陳子春.高效液相色譜法測(cè)定大補(bǔ)陰丸中鹽酸小檗堿的含量[J].中國(guó)民族民間醫(yī)藥，2010（14）：39.

[3]孫忠義.大補(bǔ)陰丸在臨床中的應(yīng)用[J].內(nèi)蒙古中醫(yī)藥，1996（S1）：74.