豬瘟和豬圓環病毒2型混合感染流行病學調查

鄭藝杰 王藝娟

（1，福建省龍海市動物疫病預防控制中心 363100；2，福建省漳州市動物疫病預防控制中心 363000）

豬瘟 （CSF）是由豬瘟病毒 （CSFV)引起的豬高度接觸性傳染病，是嚴重危害生豬生產的重要疫病，其分布廣、危害大，給養豬業造成巨大的經濟損失[1]。2017年國家調整完善重大動物疫病防控支持政策，對豬瘟暫不實施國家強制免疫政策，但在福建省仍將豬瘟列為全面免疫病種之一。當前豬瘟病以溫和型、非典型豬瘟為主，而急性豬瘟較少，其發病特點為感染時間和潛伏期長、不受季節影響、免疫無效等特點[2]。

豬圓環病同樣也是危害我國養豬業的一種重要疫病，其中PCV2與多種新的豬傳染病的發生密切相關，包括斷奶仔豬多系統衰竭綜合征 （PMWS）、豬呼吸道病復合征 （PRDC）及豬增生性和壞死性肺炎 （PNP）等[3，4]，其中以PMWS的影響最為嚴重。PCV2可引起豬的多系統功能障礙性疾病，侵害機體的免疫系統，造成豬的免疫抑制[5,6]，影響豬免疫功能，使豬群對其他病原體的抵抗能力下降[7]，以豬副嗜血桿菌的繼發性感染最為常見。2000年郎洪武等首次在國內豬群中檢測到PCV2的感染，PCV2的感染和流行，給我國規模化豬場造成相當大的經濟損失[8,9]。

豬瘟病毒 （CSFV）和豬圓環病毒2型 （PCV2）嚴重影響豬群健康，是危害豬場生產的兩種主要病毒。為了更好地預防和控制豬瘟、豬圓環病等相關疫病，需要對龍海市豬群中豬瘟病毒與豬圓環病毒2型單一感染、混合感染情況有較為清楚的認識，以便制定更有針對性的防治措施來提高豬場的生產效率。

1 材料與方法

1.1 檢測樣本

2016年3月～2017年6月，從龍海市部分豬場35頭病死豬中無菌采集扁桃體、肺臟、脾臟等組織，于-20℃凍存送檢。

1.2 主要試劑

病毒RNA提取試劑盒、promega反轉錄試劑盒、病毒DNA提取試劑盒、DNA Marker1和2x Taq PCR MasterMix均購于天根生化科技有限公司。

1.3 主要儀器

TGL-16MC冷凍離心機；BIO-RAD凝膠成像系統；ABI 7500 PCR儀；DYY-6C型電泳儀。

1.4 引物設計與合成

根據GenBank登錄的豬瘟病毒基因和豬圓環2型基因序列，利用primer5.0設計2對引物。引物序列如下∶HCV-F：5'-CCACCTCGAGATGCTATGTGGA-3'， HCV-R： 5'-CCATGTGCCATGTACAGCAGAG-3'， 目標片段： 167bp； PCV-F：5’ -TGGGTVTTVACAATTAACAATC-3'， PCV-R： 5'-CAGCCACCCGTAAAAGTCGT-3'，目標片段：236bp。以上引物分別由上海英駿生物技術有限公司合成。

1.5 病毒核酸的提取及PCR反應體系

病毒DNA、RNA提取，反轉錄及PCR反應體系依次按實驗操作步驟完成。

2 結果與分析

2.1 DNA與RNA提取效果檢測

用1%的瓊脂糖凝膠電泳對病毒DNA和RNA進行檢測，結果見圖1～2。提取的DNA條帶明亮、清晰，可以進行下一步實驗。

2.2 PCR擴增結果

PCR結果可見，PCR擴增產物具有良好的特異性，片段長度大小與預期的一致，沒有非特異性雜帶，說明這2對引物可以運用于病源檢測。CSFV擴增結果如圖3，PCV擴增結果如圖4。

圖1 病毒基因組DNA電泳檢測結果

圖2 病毒基因組RNA電泳結果

圖3 豬瘟PCR擴增結果

圖4 豬圓環病毒2型PCR擴增結果

2.3 35份病料檢測結果

送檢樣品中對PCV2、CSFV的檢測結果為：RT-PCR和PCR的產物電泳結果顯示檢測樣品可擴增出PCV2、CSFV的特異性片段分別為236bp、167bp。分別檢測35份樣品中有22份樣可擴增出236bp特異性片段，有19份樣品可擴增出167bp，說明檢測豬圓環病毒2型 （PCV2）35份樣品中檢出陽性22份，陽性率為62.85%；豬瘟病毒 （CSFV）陽性19份，陽性率為54.28%，豬瘟病毒 （CSFV）、豬圓環病毒2型（PCV2）都呈陽性者13份，混合感染率為37.14%，參見表1～2。

表1 CSFV和PCV2兩種病毒檢測結果

表2 CSFV和PCV2兩種病毒總感染

3 討論

從送檢結果可以看出： (1)送檢病豬中豬瘟陽性率偏高，很多病豬受到豬瘟病毒的影響； （2）豬圓環2型帶毒率達到62.85%，這與曾中華于2004～2006年在漳州市豬圓環病毒流行病學調查中提到的，龍海市送檢組織樣品中PCV2陽性率56.92%，豬場PCV2陽性率52.17%相比較[10]，組織樣品陽性率增加5.93%，已嚴重危害豬群健康； （3）兩種病毒混和感染較為嚴重。

4 綜合防治措施

豬瘟病毒 （CSFV）及豬圓環病毒2型 （PCV2）都會嚴重危害豬群健康，降低飼料報酬率，給養豬場造成很大經濟損失，所以應采取必要措施對這兩種病毒進行防治，最終達到消滅傳染源，切斷傳播途徑，減少易感動物，從而提高豬場生產效率。

（1）制定科學免疫程序，提高豬群抗病能力。疫苗接種是控制豬瘟和豬圓環病的有效方法，定期進行抗體及病原的監測，準確了解豬群的健康狀態，及時發現問題并采取防范措施。

（2）加強豬群飼養管理，減少應激因素刺激。嚴格引種檢疫，嚴禁引入隱性感染的豬群，清除帶毒母豬和種公豬，實行全進全出制度；強化環境消毒滅源工作，及時對尸體、死胎、流產物和其他污染物、排泄物銷毀做無害化處理，減少環境載毒量，創造豬只適宜的生存環境。

（3）采取合理藥物預防，控制豬群繼發感染。豬圓環病是一種免疫抑制性疾病，在平時飼養管理中應注重提高豬群免疫抵抗力，增加維生素、氨基酸、礦物質的水平，注射或添加抗病毒的干擾素，黃芪多糖等，控制豬藍耳病病毒、豬鏈球菌、豬副嗜血桿菌、豬肺炎支原體等病原的繼發感染，最大限度地降低豬群的死亡率，減少經濟損失。

[1]袁東波,湯德元,曾智勇,等．豬瘟病毒的分子結構及其新型疫苗研究［J］.世界農業,2008(1)：59-62.

[2]夏迎春.我國豬瘟的流行現狀與防控措施建議[J].當代畜禽養殖業,2017(2):51.

[3]劉建波,張輝,劉長明.豬圓環病毒的流行趨勢與防控對策[J].動物醫學進展2014,35(1):111-115.

[4]葛猛,楊陽,蔣重合,等.豬圓環病毒2抗體水平的監測及意義[J].湖南畜牧獸醫,2009(3):8-10.

[5]萬青山.四川部分地區豬圓環病毒2型流行病學調查研究[D].四川農業大學,2013.

[6]戴愛玲,劉建奎,李鴻文,等.閩西地區豬圓環病毒2性血清學調查及遺傳變異分析[J].中國獸醫學報,2016,36(6):896-901.

[7]盧寄軍,王祝榮,張進.湖南省豬圓環病毒2型流行病學調查[J].中國動物檢疫,2012,29(2):42-43.

[8]趙津.我國東南地區豬圓環病毒流行病學調查及PCV2、PEDV、TGEV和GAR復合PCR方法的建立與應用[D].南京農業大學,2013.

[9]石坤.上海地區PCV2分子流行病學及PCV2感染豬肺泡巨噬細胞的磷酸化蛋白組學研究[D].中國農業科學院,2016.

[10]曾中華.漳州市豬圓環病毒病流行病學調查與凈化技術研究[D].揚州大學,2006.