曝氣水中鄰氨基苯酚的HPLC檢測(cè)方法

陳鴻申，肖 飛，王 睿，張明生 *

(1.貴州大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院，貴州 貴陽(yáng) 550025；2.貴州省分析測(cè)試研究院， 貴州 貴陽(yáng) 550002)

鄰氨基苯酚(o-Aminophenol)，化學(xué)名為2-氨基苯酚，溶于水、乙醚或酒精，微溶于苯。純品是白色針狀結(jié)晶，久置時(shí)轉(zhuǎn)變成棕色或黑色。鄰氨基苯酚是一種重要的化工中間體，廣泛應(yīng)用于染料、醫(yī)藥、印刷業(yè)以及生物領(lǐng)域[1]。近年來(lái)人們利用鄰氨基苯酚作為脂肪酸的化學(xué)修飾試劑分析脂肪酸[2]，由鄰氨基苯酚與羰基化合物制成的Schiff堿及其某些金屬配合物在催化行為、磁學(xué)性質(zhì)和酶模擬等方面也有著重要作用[3]，此外，鄰氨基苯酚還作為有機(jī)和染料中間體，用于生產(chǎn)酸性媒介藍(lán)R、硫化黃棕、熒光增白劑EBF等，是金、銀的檢定試劑[4]。

近年來(lái)，鄰氨基苯酚在有機(jī)合成和分析試劑中的大量應(yīng)用[5-7]，產(chǎn)生了可能會(huì)損害人體健康的苯酚、間甲酚等化合物[8-12]，尤其是人們將其使用后，直接排入水體，造成了嚴(yán)重的環(huán)境污染，因此，及時(shí)監(jiān)測(cè)水生環(huán)境中的鄰氨基苯酚至關(guān)重要。

目前雖有鄰氨基苯酚檢測(cè)方法的報(bào)道，但實(shí)際操作起來(lái)較為繁瑣，且檢出限有時(shí)達(dá)不到檢測(cè)要求[13-18]。因此，本研究建立了曝氣水中鄰氨基苯酚的高效液相色譜檢測(cè)方法，以期為環(huán)境中鄰氨基苯酚的檢測(cè)分析提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1儀器 Waterse2695/2998高效液相色譜儀(美國(guó)Waters公司)；移液槍(GILSON，法國(guó))；Al204電子天平；溫度調(diào)節(jié)裝置。

1.1.2試劑 鄰氨基苯酚標(biāo)準(zhǔn)品(純度為100%)由環(huán)境保護(hù)部固體廢物與化學(xué)品管理技術(shù)中心提供；乙腈(優(yōu)級(jí)純)購(gòu)置于美國(guó)Fisher Scientific公司；純凈水(屈臣氏)集團(tuán)(香港)有限公司。

1.2 方法

1.2.1標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置 準(zhǔn)確稱取樣品0.0100 g鄰氨基苯酚標(biāo)準(zhǔn)品于100 mL容量瓶中，用曝氣自來(lái)水超聲溶解并定容，配制成濃度為100 μg/mL的受試物儲(chǔ)備液。再逐級(jí)稀釋成所需系列的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，-20℃避光保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2定量分析及計(jì)算 定量分析方法：建立外標(biāo)曲線，通過(guò)比較樣品溶液中組分峰面積，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上直接讀出樣品溶液中的濃度。

樣品定量計(jì)算：采用外標(biāo)法對(duì)鄰氨基苯酚進(jìn)行定量計(jì)算，工作曲線公式為：y=ax+b，其中y表示色譜峰響應(yīng)的峰面積，單位為微伏·秒。x表示樣品濃度，單位為mg/L。a為工作曲線的斜率，單位為(微伏·秒M·s)/(mg/L)。b為工作曲線的截距，單位為微伏·秒。

1.3 分析條件

高效液相色譜柱：Thermo Hypersil GOLD， Dim(mm)：250×4.6， 5 μm， part No. 25005-254630；柱溫：25℃；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量：10 μL；流動(dòng)相A為純水，流動(dòng)相B為乙腈(A∶B = 48%∶52%)；檢測(cè)器：PDA，234 nm；運(yùn)行時(shí)間5.5 min。

2 結(jié)果與分析

2.1 線性和范圍

將1.2.1中的儲(chǔ)備液用曝氣自來(lái)水稀釋成濃度為0.2、0.5、1.0、2.0、5.0和10.0 μg/mL的系列受試物溶液，然后分別取1.5 mL所配制的受試物溶液，按1.3的儀器操作條件上機(jī)測(cè)定。繪制校正曲線(圖1)，得出線性回歸方程y = 30535 x - 1708.8，R2= 0.9997。分析結(jié)果見表1，校正曲線見圖1，圖譜見圖2、圖3。

表1 鄰氨基苯酚濃度與對(duì)應(yīng)峰面積Tab.1 Concentration and the corresponding peak area of o-aminophenol

圖1 鄰氨基苯酚的校正曲線Fig. 1 Calibration curve of o-aminophenol

圖2 鄰氨基苯酚標(biāo)準(zhǔn)曲線典型圖譜Fig.2 Typical chromatogram of o-aminophenol

圖3 鄰氨基苯酚空白典型圖譜Fig.3 Typical chromatogram of blank test

2.1 重復(fù)性

選濃度為1.0 μg/mL的鄰氨基苯酚溶液用于方法重復(fù)性試驗(yàn)，由表2可知，6次重復(fù)分析，鄰氨基苯酚的峰面積RSDArea=0.36%，滿足定性分析和定量分析的要求。

2.3 準(zhǔn)確度

按1.2.1中標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置方法，準(zhǔn)確稱取樣品0.0100 g鄰氨基苯酚標(biāo)準(zhǔn)品于100 mL容量瓶中，配制成濃度為100 mg/L的樣品儲(chǔ)備液。將該樣品儲(chǔ)備液稀釋100倍后，用于準(zhǔn)確度分析。由表3可知，5次平行分析，單次測(cè)定值與5次測(cè)定的平均值偏差在0.06%～1.7%范圍內(nèi)，準(zhǔn)確度能夠滿足試驗(yàn)要求。

表2 鄰氨基苯酚重復(fù)性分析結(jié)果Tab.2 The results of repetitives of o-aminophenol

表3 鄰氨基苯酚的準(zhǔn)確度分析結(jié)果Tab.3 The results of accuracy of o-aminophenol

2.4 回收率

通過(guò)基質(zhì)加標(biāo)的方法，在相同的基質(zhì)中分別加入不同含量的樣品，混勻后用于回收率試驗(yàn)，比較其實(shí)測(cè)濃度與理論濃度的差別，即回收率。5次不同濃度的回收率分析結(jié)果在98.0%～104.8%范圍內(nèi)，滿足試驗(yàn)要求(表4)。

表4 鄰氨基苯酚的回收率試驗(yàn)分析結(jié)果Tab.4 The results of recovery rate of o-aminophenol

2.5 穩(wěn)定性

選取濃度為0.90 mg/L和1.8 mg/L的受試物溶液用于穩(wěn)定性測(cè)定，分別于0 h、6 h、12 h和24 h取樣分析。分析結(jié)果顯示，該樣品在12 h內(nèi)能夠在曝氣自來(lái)水中保持穩(wěn)定，即實(shí)時(shí)濃度保持在原濃度的80%以上(表5)。

表5 鄰氨基苯酚的穩(wěn)定性分析結(jié)果Tab. 5 The results of stability of o-aminophenol

注：表5中C0表示0 h時(shí)的樣品濃度，Cn表示在其他時(shí)間的樣品濃度。

2.6 檢出限和定量限

選取0.2 mg/L的樣品工作液用于檢出限和定量限試驗(yàn)，平行分析6次，由S/N計(jì)算出LOD和LOQ。6次分析平均結(jié)果，鄰氨基苯酚的LOD為0.08 mg/L，LOQ為0.27 mg/L(表6)。

3 結(jié)論與討論

鄰氨基苯酚作為酚類化合物，是一種重要的化工中間體，廣泛應(yīng)用于染料、醫(yī)藥、印刷業(yè)以及生物領(lǐng)域，同時(shí)在有機(jī)合成和分析試劑中也有大量應(yīng)用，該過(guò)程會(huì)產(chǎn)生大量的酚類化合物，如苯酚、間甲酚等可損害人體健康的化合物，給環(huán)境造成嚴(yán)重的污染，因此，對(duì)暴露于環(huán)境中的鄰氨基苯酚進(jìn)行監(jiān)測(cè)極其重要。芳香胺類的定量分析一般可采用重氮化方法，用重氮化方法測(cè)定芳香胺類的純度，得到的結(jié)果是總胺量，因此正確性較差。高效液相色譜是一種高效能分析技術(shù)，由于不受樣品揮發(fā)性和熱不穩(wěn)定性的限制，因而適合于分析高沸點(diǎn)、熱不穩(wěn)定及強(qiáng)極性化合物[14]。

表6 鄰氨基苯酚的檢出限和定量限分析結(jié)果Tab.6 The results of detection limit and the quantitative of o-aminophenol

本研究改進(jìn)了已報(bào)道的HPLC方法，從線性范圍、重復(fù)性、準(zhǔn)確度、加標(biāo)回收率、檢出限和定量限等進(jìn)行方法驗(yàn)證。試驗(yàn)結(jié)果表明在波長(zhǎng)234 nm、流速1.0 mL/min 、柱溫為25℃操作條件下，鄰氨基苯酚在0.2～10.0 μg/mL曝氣生態(tài)水中呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，即y = 30535 x - 1708.8，R2= 0.9997。此外，重復(fù)性(峰面積RSDArea=0.36%)、準(zhǔn)確度(0.06%～1.7%)、加標(biāo)回收率(98.0%～104.8%)、檢出限和定量性(LOD=0.08mg/L、LOQ=0.27 mg/L)等試驗(yàn)結(jié)果均能滿足鄰氨基苯酚的定性分析和定量分析。本方法具有重復(fù)性好，檢出限低、出峰時(shí)間快，分離特性好等優(yōu)點(diǎn)，可為環(huán)境中鄰氨基苯酚的分析檢測(cè)提供參考。

參 考 文 獻(xiàn)：

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