小鵝瘟病毒卵黃抗體的保存期試驗

孫心 姜宇 梁宛楠/哈藥集團生物疫苗有限公司

小鵝瘟（Goose parvovius，GP），是由鵝細小病毒（Goose parvovius，GPV）引起雛鵝急性腸炎及肝、腎、心實質臟器炎癥，病原性強，死亡率高，該病主要感染1月齡以內的雛鵝，雛番鴨也很易感染，可經呼吸道和消化道感染，并能經卵垂直傳播，發病率和死亡率可高達90%～100%，對養鵝業危害嚴重。為了有效的防控該病的發生，通過現地分離的病毒接種于鵝胚后，收獲培養物，經滅活劑滅活后制成免疫原，接種健康產蛋母雞，收集雞卵，提取卵黃抗體，并加入適當防腐劑制成小鵝瘟病毒卵黃抗體。卵黃抗體（immunoglobulin of yolk ；IgY）是禽類經特定抗原免疫后，在卵黃中所產生的相應特異性抗體。IgY是一種天然存在、無殘留、無毒副作用的免疫球蛋白，是抗生素的替代品。目前卵黃抗體廣泛應用于一些疾病的緊急預防和治療。本研究將試制的3批小鵝瘟病毒卵黃抗體，置室溫和2℃～8℃冰箱內保存，間隔不同時間測定抗體的物理性狀檢查，并檢測卵黃抗體的效價及對雛鵝攻毒的保護效力，從而確定有效的保存時間，為提高本病的治療和緊急預防提供依據。

一、材料和方法

1.供試驗的疫苗。3批小鵝瘟病毒卵黃抗體為本實驗自行研制，批 號 為 201601、201602、201603，瓊擴效價≥1∶16，卵黃抗體原液效價為1∶128。

2.試驗方法。將研制的3批小鵝瘟病毒卵黃抗體，分別置于室溫和2℃～8℃保存，分別在6、12、18、24個月取出做物理性狀檢查，并檢測卵黃抗體的效價及對雛鵝攻毒的保護效力。

3.研究指標。（1）物理性狀檢驗：按現行《中國獸藥典》附錄進行檢驗，應呈略帶白色澄明液體，久置后有少量白色沉淀；（2）無菌檢驗：按現行《中國獸藥典》附錄進行檢驗，應無菌生長；（3）抗體效價測定按瓊擴試驗方法進行，卵黃抗體的瓊擴效價應≥1∶16；（4）制定指標按下述標準判定保存的抗體是否合格。

合格：卵黃抗體性狀，達到《質量標準》的要求；抗體無菌生長；瓊擴試驗測定抗體效價不降低。雛鵝保護試驗時應達80%以上的保護率；不合格：達不到上述標準的抗體判為不合格。

二、結果評估

1.結果判定。分別記錄每次檢測的所有數據，就可以得出抗體經保存后的物理性狀及抗體效價的變化情況。

2.試驗的有效性。試驗測定了3批抗體的保存期，保存后于不同時間測定抗體的瓊擴效價，充分保證試驗結果的可靠性，本試驗可以認為有效。

表1 室溫保存的效價測定結果

三、結果

1.物理性狀檢查結。于室溫和2℃～8℃保存的卵黃抗體，分別在保存后的6、12、18和24個月，對保存的卵黃抗體做了物理性狀檢查，其結果基本一致。外觀呈略帶白色澄明液體，瓶底部有少許白色沉淀。

2.無菌檢驗結。按現行《中國獸藥典》附錄進行檢驗，無菌生長。

3.支原體檢驗結果。按現行《中國獸藥典》附錄進行檢驗，無支原體生長。

4.外源病毒檢驗結果。按現行《中國獸藥典》附錄進行檢驗，無外源病毒污染。。

5.卵黃抗體效價測定結果。取3批卵黃抗體置室溫（25℃）及2℃～8℃條件下作不同保存時間測定，測定時，各取3瓶保存的抗體混合后，作瓊擴試驗，記錄保存前后的效價變化情況，結果見表1、2。

從表1，2可以看出，卵黃抗體經2℃～8℃保存，效價未降低，進一步的保存時間正在測定之中。在室溫保存時，個別批次保存9個月后瓊擴效價降低。

6.雛鵝的攻毒試驗結果。制備的抗體經一定時間保存后，除以瓊擴試驗測定抗體效價的變化情況以外，在保存后的不同時間，將抗體接種雛鵝，測定攻毒后的雛鵝保護率，結果見表3。

四、結論

將制備的小鵝瘟病毒卵黃抗體置室溫及2℃～8℃保存，經過一定時間保存后測定，保存抗體的物理性狀良好，符合現行《中國獸藥典》標準。另外，在室溫保存6個月或2℃～8℃保存24個月后，瓊擴效價不降低。但個別批次的卵黃抗體，于室溫保存9個月后，效價降低。將保存的小鵝瘟病毒卵黃抗體注射雛鵝后再攻擊小鵝瘟強毒，結果室溫保存6個月及2℃～8℃保存6、12、18、24個月的抗體注射雛鵝后，全部獲得保護，對照8/10以上死亡，證明提取的卵黃抗體具有良好的穩定性，可在2℃～8℃保存24個月。

表2 2℃～8℃保存的效價測定結果

表3 雛鵝攻毒結果

參考文獻（略）