淇河鯽的胚胎發生觀察

（河南師范大學水產學院，河南新鄉 453007）

淇河鯽（Carassius auratus in Qihe river），屬于鯉形目（Cypriniformes）、鯉科（Cyprinidae）、鯽屬（Carassius），原產于河南鶴壁地區的淇河中下游，故稱為淇河鯽。是“淇河三珍”之一，具有極高的營養價值、經濟價值和社會價值。與普通鯽相比，淇河鯽形態明顯不同，其特點為脊背寬厚，厚度可雙倍于普通鯽魚，體形飽滿，又稱為“雙脊魚”。因其是三倍體魚類，具備快速生長、個大體壯的優良性狀。作為天然雌核發育的種群，淇河鯽具有穩定的遺傳性能[1-4]，由于易繁殖、疾病少等優點，深得人們青睞，因而池塘養殖規模得以迅速發展[5-8]。淇河鯽風味鮮美，營養成分豐富，更有“以其食魚，唯淇之鯽”的美譽，使其成為具有廣闊發展前景的養殖對象[9]。

因肉嫩味美，營養豐富使淇河鯽被過度捕撈，加之生存環境的持續惡化，導致種質資源不斷衰退，因此開展淇河鯽的人工繁育技術就顯得十分必要。此次試驗觀察了淇河鯽胚胎發育全程，為其人工養殖技術的發展提供基礎資料。

1 實驗材料與方法

1.1 實驗材料

2017年5月從河南師范大學水產養殖實訓基地取性成熟淇河鯽成魚。雌魚選擇腹部飽滿的個體，雄魚選擇體質強健、鰓蓋粗糙，輕按腹部可擠出精液的個體[10]。

1.2 實驗方法

利用人工催產和干法受精得到受精卵。對條件良好的親魚胸腔注射催產素人絨毛膜促性腺激素（HCG），注射劑量依據每千克體重計算。雌魚注射劑量為1000國際單位，雄魚減量一半。使用時將激素充分溶解于生理鹽水，擦干注射部位水分后，用70%酒精消毒后進行激素注射。注射完成后放入暫養池中加以流水刺激，12h內留意親魚發情行為，待其發情行為顯著后，捕撈親魚并用棉布擦除親魚腹部水漬，將精子和卵子擠入潔凈培養皿中，用手攪拌、沖洗后將其置于孵化池孵化，水溫保持在23～25℃[10-11]。

用數碼體視顯微鏡（OLYMPUS SZ61）對其胚胎發育狀況進行觀察并拍照，準確記錄不同時期典型特征及胚胎發育時序。開始發育的早期每10 min采樣觀察，多細胞期后每0.5 h采樣觀察，進行至第二天則每隔1 h采樣觀察。每次觀察記錄不少于30粒正常發育的受精卵，依據該批次中一半以上的受精卵達到某一發育時期的時間做為該時期的發育起始時間。

2 實驗結果和分析

2.1 淇河鯽胚胎發育時序

水溫24℃左右，淇河鯽的胚胎發生全程歷時約58 h，依次經過胚盤形成、卵裂、囊胚、原腸胚、神經胚、器官形成和孵化出膜7個階段。依據其胚胎發育過程中所呈現的不同外部形態特性及器官分化情況，發育歷程還可細分為23個發育時期（表1）。

表1 淇河鯽的胚胎發育時序（24℃）

2.2 胚胎發育各階段形態特征

2.2.1 受精卵胚盤形成階段

淇河鯽的卵呈淺黃色，主要為橢圓形和圓球形，粘性卵，卵徑范圍1.5～1.8 mm。受精卵卵膜吸水后其體積膨脹變大，呈透明狀。受精后40 min卵黃周邊原生質開始慢慢向動物極匯聚，出現一塊顏色加深的突起暗斑，其漸漸向上升起形成胚盤。

2.2.2 卵裂階段

受精后1.33 h進行首次卵裂，從胚盤中間開始一分為二形成兩個等大的分裂球，為經裂。此即進入2細胞期。約25 min后觀察到第二次卵裂，與第一次卵裂所形成的卵裂溝垂直，形成大小一致的四個卵裂球，此為4細胞期。胚盤繼續經裂，又經過30 min進入8細胞期。第三次卵裂所形成的兩條卵裂溝與第一條卵裂溝平行，生成的八個分裂球以4×2的形式排成兩列。隨后胚胎陸續進入16細胞期，分裂球在胚盤上依四行四列的正方形樣式排列。之后經過32細胞期，隨著卵裂持續進行慢慢進入多細胞期。此后分裂球越變越小，層層累積難以觀察，分裂球團形如桑葚。

2.2.3 囊胚階段

受精后4 h，層層的細胞堆積在卵黃上方，細胞界限不明顯，形成半球形隆起，且隆起高度達到最高。此時胚胎發育至囊胚早期。細胞持續分裂，胚盤面積擴增但高度開始下降，約50 min后胚體頂部扁平化發展，發育至囊胚中期。囊胚繼續變扁開始緊貼在卵黃上，由于囊壁的細胞往下生長，慢慢包圍部分卵黃，進入“下包”過程。此時胚胎進入囊胚晚期，距離受精已有5.83 h。

2.2.4 原腸胚階段

受精后7.5 h，胚胎囊胚層不斷發育生長，向植物極下包卵黃，約包住胚體表面的1/2。因部分囊胚層細胞向胚胎內部生長卷曲，在胚盤周邊形成稍厚的胚環，此時發育至原腸早期。可明顯觀察到卵黃在有規律地做伸縮遠動。胚層繼續下包，1.67 h后約包住胚胎表面的2/3。在胚環的一定地點，細胞集中增厚形成胚盾。胚盾開始變大，達到原腸中期。這一時期的卵黃動態更為顯著，卵黃變形發生突起凹陷互換的現象，約80 s一個循環。發育持續進行部分囊胚層細胞慢慢向胚盾聚集，使其生長變長而延伸到動物極頂點。胚層包裹大量卵黃約占其表面的4/5，胚胎發育進行到原腸晚期，距離受精已有10.09 h。

2.2.5 神經胚階段

受精后12.59 h，囊胚層細胞繼續下包卵黃囊至其底端，仍有少部分卵黃露在胚孔外未被完全包被，形成卵黃栓，胚胎發育至神經胚期。隨著卵黃栓逐漸消失，胚孔逐漸模糊封閉，胚體的輪廓變得逐漸明顯，呈“C”字形貼在卵黃上。胚體的一端也開始變得膨大，胚盾的中部發育形成神經溝。

2.2.6 器官形成階段

受精后14.83 h胚胎發育進入器官形成階段。胚體頭部開始隆起擴大，出現團塊狀，此時進入腦原基期。17.5 h后胚體頭部兩側中央形成的突起越來越明顯，后變成囊泡，標志著胚胎進入視泡期。此時胚體的尾繼續隆起，頭部仍透明，距離受精24 h時發育進程至耳囊期。耳囊在后腦兩側以小泡狀體呈現，胚體環繞卵黃一周的5/6以上，大部分卵黃內陷。此時可以觀察到多對肌節。受精后25.25 h，胚體尾端開始慢慢與卵黃囊分開，生長發育呈棒狀，進入尾芽期。約再過1.5 h后頭部和尾部與卵黃脫離，胚體可環繞卵黃一周。頭部眼囊也更加明顯。29.67 h后隨著肌節數量增多，可在顯微鏡下觀察到胚體的肌肉在輕微收縮抖動，是胚胎進入肌肉效應期的開始。同時眼囊周圍開始有黑色素沉著。受精后32 h，可觀察到與頭部接觸的稍后部位心臟在有節律的跳動，進入心跳期，約為52次/分鐘。隨后心跳還會加速，6 h后心臟跳動加速至72次/分鐘。此時期內眼部色素積聚越來越多，顏色加深。受精后約35.5 h卵黃逐漸減小內陷，尾部搖擺頻率增高。受精后40 h軀體上有均勻分布的黑色斑點，卵黃越來越小，從尾部開始軀干的1/3脫離卵黃。此時的尾部可來回擺動，胚體隨之在卵膜內不斷轉動。

2.2.7 孵化出膜階段

受精后42 h,胚胎發育至出膜前期。此時尾部擺動劇烈，軀體的一半脫離卵黃，并可環繞卵黃一圈多。距離受精后44 h，觀察到頭部后方有略顯紅色的液體流動。隨后眼囊完全變黑，卵黃進一步縮小，軀體在卵膜內翻轉明顯，心跳可達104次/分鐘。受精后56 h可看到有紅色血液不斷流向心臟，體節清晰可辨。受精后58 h，卵膜開始破裂，進入出膜期。大部分仔魚尾部先出膜。隨后卵膜全部脫落，仔魚孵出。

3 討論

本次觀察結果顯示，淇河鯽胚胎發育歷時約58 h，其中器官形成期最長，約為27.17 h。受精卵胚盤形成階段歷時最短，大約持續1.33 h，與大多魚類的胚胎發育觀察結果類似，早期胚胎發育的形態上無明顯差別[11-21]。但由于遺傳因素的影響，淇河鯽發育過程仍然表現出特異性，特別是原腸階段觀察到的卵黃伸縮運動。

與易念等[12]在三倍體鯽魚胚胎（72 h）發育觀察到的結果相比，淇河鯽胚胎發育所需時間少于三倍體鯽魚，這可能與水溫及卵徑大小有關，張永泉等[22]及張耀紅等[16]的研究表明，卵徑的大小是影響魚類破膜時間及積溫的因素之一。溫度是魚類胚胎發育過程中至關重要的因素，多數研究結果顯示，在適宜的溫度范圍內，黃河鯉[11]、唐魚[13]、青鳉[16]及黃河裸裂尻魚[20]等魚類在適當的提高溫度條件下孵化出膜時間縮短。溫度是影響發育速度的主要因素，胚胎發育每一階段的完成都需要一定熱量，此熱量用該時期的溫度積累值表示，即積溫。這里依照胚胎發育某階段的積溫（h·℃）=某階段胚胎發育持續時間（h）×水溫均值（℃），其中水溫均值依據此發育時期里多次測量水溫的算術平均值為準。計算出淇河鯽胚胎發育過程中各個階段的積溫數值，各階段數值之和即是發育所需的總積溫。結果顯示從受精卵胚盤形成階段到孵化出膜階段的積溫依次為31.26 h·℃，64.16 h·℃，84.95 h·℃，126.59 h·℃，56 h·℃，680.61 h·℃，396 h·℃，其中器官形成期的積溫數值最大，達到總積溫值的47.28%。完成整個發育全程所需的總積溫為 1439.57 h·℃。

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