紫外分光光度法測定化妝品中煙酰胺的含量

(廣東省科技職業技術學校 化工教研室，廣州 510650)

煙酰胺(nicotinamide)，化學名為3-吡啶甲酰胺，又稱維生素B3，是一種水溶性維生素，其結構式見圖1。

圖1 煙酰胺結構式

煙酰胺的作用近年來逐漸被學界所知，在化妝品行業中應用廣泛，是一種多功能活性成分，其功效已在許多專業期刊中得到證實。研究表明[1]，煙酰胺可以有效地減少可消除皮膚因老化或外界侵害造成的皺紋、起皮、毛孔變大等，使得皮膚外觀更加光滑和均勻，具有美白、抗衰老、改善皮膚屏障功能、保濕和治療痤瘡六大護膚功效。市場上有多個品牌的化妝品都標注含有煙酰胺，然而這些產品中是否真的添加了煙酰胺以及添加量都不得而知。因此針對煙酰胺的檢測研究有利于保護廣大消費者的權益。同時，可以規范企業的化妝品成分標注行為。

目前，煙酰胺的檢測主要以高效液相色譜法和毛細管電泳法為主，而紫外分光光度法尚沒有相關報道[2]。本實驗建立了一種測定化妝品中煙酰胺含量的紫外分光光度法。該方法前處理簡單、快速、定量準確。

1 試驗部分

1.1 儀器與試劑

(1)UV-1800PC型紫外分光光度計，上海美普達儀器有限公司；SC-10型高速離心機，轉速10000r/min以上，安徽中科中佳科學儀器有限公司；NH-1001型超聲水浴，廣州華南超聲設備有限公司；BSA124型電子天平，賽多利斯科學儀器(北京)有限公司；JJ600型電子天平，常熟市雙杰測試儀器廠；100μL～1000μL可調式移液器，大龍興創實驗儀器(北京)有限公司。

(2)所用試劑均為分析純，試驗用水為分析實驗室用二級水。

(3)煙酰胺標準貯備液：準確稱取煙酰胺標準物0.3000g至50mL燒杯中，用水溶解，轉移至100mL容量瓶中，用水定容至刻度成標準貯備液(3000μg/mL)。再吸取10.00mL的標準貯備液至100mL容量瓶中，用水定容至刻度作為標準使用溶液(300.0μg/mL)。

1.2 樣品的提取溶劑的選擇

據報道煙酰胺溶于水和醇，不溶于二氯甲烷。而二氯甲烷可以除去化妝品中脂溶性成分以及表面活性劑成分[3]。因此選擇了較為簡便的水/二氯甲烷體系，比例為1∶1。

1.3 樣品的前處理方法

稱取樣品約0.10g于10mL具塞離心管中，加入5mL水和5mL二氯甲烷[4]，強烈震蕩后，超聲提取15min，強烈震蕩后于8000r/min轉速下離心分離3min，取上清液檢測。

1.4 煙酰胺檢測波長的確定

吸取8.00mL的煙酰胺標準使用溶液(300.0μg/mL)至100mL容量瓶中，用水定容至刻度。用紫外分光光度計的光譜掃描獲得的煙酰胺在200nm至350nm間的特征吸收曲線，見圖2。從吸收曲線圖可看出煙酰胺在214nm和262nm處有最大吸收峰，262nm的紫外吸收有相對的特異性。考慮到在該波長下檢測，可以避免二氯甲烷的紫外吸收干擾以及部分樣品雜質對紫外吸收的干擾，有利于目標成分的準確定量，因此確定檢測波長為262nm。

圖2 煙酰胺的吸收曲線圖

2 結果與討論

2.1 方法的線性與檢出限

分別吸取0、1.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00mL的煙酰胺標準使用溶液(300.0μg/mL)至100mL容量瓶中，用水定容至刻度。該系列的標準溶液的質量濃度分別為0、3.000、6.000、12.000、18.000和30.000μg/mL。按紫外分光光度法測定其吸光度，數據如表1所示。

表1 標準曲線數據點

以吸光度A對質量濃度c(μg/mL)繪制標準曲線，見圖3。煙酰胺濃度在0.000至30.000μg/mL范圍內與吸光度呈線性關系，線性回歸方程為A=0.024723*c-0.00107，相關系數R=0.99998。

圖3 煙酰胺的標準曲線圖

在相同的測試條件下，以3、10倍空白樣品的標準偏差0.001342(n=6)除以標準曲線的斜率0.02473，計算出煙酰胺的檢出濃度為0.16μg/mL，最低定量濃度為0.54μg/mL。

2.2 方法的精密度和重復性試驗

取不同煙酰胺含量的膏霜樣品提取液0.10mL至100mL容量瓶中，用水稀釋至刻度。在波長262nm下測定其吸光度，平行測定6次，計算得相對標準偏差(RSD)在1.41%～5.89%。將同一樣品按1.2處理方法提取并測定6次，計算得RSD在3.56%～4.62%。結果見表2。

表2 膏霜樣品中煙酰胺測定的精密度和重復性(n=6)

取不同煙酰胺含量的水劑樣品提取液0.10mL至100mL容量瓶中，用水稀釋至刻度。在波長262nm下測定其吸光度，平行測定6次，計算得相對標準偏差(RSD)在1.91%～3.35%。將同一樣品按1.2處理方法提取并測定6次，計算得RSD在1.45%～3.87%。結果見表3。

表3 水劑樣品中煙酰胺測定的精密度和重復性(n=6)

取不同煙酰胺含量的乳劑樣品提取液0.10mL至100mL容量瓶中，用水稀釋至刻度。在波長262nm下測定其吸光度，平行測定6次，計算得相對標準偏差(RSD)在2.56%～4.29%。將同一樣品按1.2處理方法提取并測定6次，計算得RSD在2.99%～4.71%。結果見表4。

表4 乳劑樣品中煙酰胺測定的精密度和重復性(n=6)

2.3 方法的加標回收率試驗

準確移取0.00、1.00、4.00、8.00mL煙酰胺標準使用溶液(300.0μg/mL)置于100mL容量瓶中，再分別移取1.00mL各類樣品加入中，用水稀釋至刻度。得高、中、低水平下的樣品加標回收率，如表5所示，回收率在100.20%～108.78%之間。

表5 煙酰胺加標回收率

2.4 方法的試樣穩定性試驗

吸取同一樣品提取液，于室溫放置0、30、60、90、120min測定吸光度，其吸光度的RSD為1.09%～2.07%，表明樣品在2h內穩定，數據見表6。

表6 煙酰胺2h內穩定性數據

2.5 與高效液相色譜法比較(GB/T 29664-2013)

根據GB/T 29664-2013化妝品中維生素B3(煙酸、煙酰胺)的測定中的液相色譜分析條件進行HPLC分析。樣品中煙酰胺的含量，用標準曲線外標法來確定，然后計算煙酰胺含量與紫外分光光度法進行比較。HPLC測定結果與紫外分光光度法比較見表7。

表7 HPLC法與紫外分光光度法測定結果比較

由表7可知，紫外分光光度法測定樣品中煙酰胺含量比HPLC法略偏低，其相對于HPLC法的偏差沒有超過5%，基本上可以滿足樣品中煙酰胺含量測定的需要。

2.6 實際樣品分析

對市售主要含有煙酰胺的6種不同類型的化妝品進行了測定，它們的煙酰胺質量比含量在4.70mg～51.27mg/g之間。

3 結論

利用煙酰胺在紫外光區262nm處有明顯的吸收，建立了化妝品中煙酰胺含量的紫外分光光度法，在0至30.000μg/mL范圍內，煙酰胺質量濃度與紫外吸光度呈良好的線性關系，線性回歸方程為A=0.02473*C-0.00107，相關系數R=0.99998，采用此法對化妝品中煙酰胺的含量是可行的。該方法簡單易行，靈敏度較高，結果準確，可快速測定化妝品中煙酰胺的含量，結果令人滿意。

[1] 彭曉鳳，孫宏麗，吳一微.美白化妝品中煙酰胺的分離分析方法研究進展[J].湖北師范大學學報(自然科學版)：2017，37(1)：51-55.

[2] 王宏斌，蘇曉春.煙酰胺在化妝品中的應用[J].中國化妝品：行業版，2003，(9)：65-68.

[3] 毛希琴.高效液相色譜法測定化妝品中的煙酸和煙酰胺[J].日用化學工業，2012，42(6)：470-472.

[4] 林毅侃，顧宇翔，王承平等.高效液相色譜法測定化妝品中煙酰胺的含量[J].香精香料化妝品，2015(3)：29-32.