HPLC法測定卵磷脂中6個成分的含量

周文君

（朝陽市質量檢驗檢測中心 遼寧 朝陽 122000）

1.前言

在臨床醫學所使用的磷脂類材料中，磷脂酰膽堿、磷脂酰肌醇、鞘磷脂等，均是具有藥用價值的卵磷脂，這些卵磷脂能夠在慢性肝炎、肝硬化、高膽固醇血癥等方面起到預防、治療的作用。

2.實驗器材和原料

本文根據HPLC法的測試實驗要求，選用了蒸發光散射檢測器[1]。

實驗樣本方面，本文選用了由上海某制藥公司提供的五組蛋黃卵磷脂作為實驗樣本，標示為a1～a5。此外，為了保證實驗數據的準確性，本文還分別選取了六個成分的對照品進行對比實驗，通過數據對比來獲取各組樣本蛋黃卵磷脂的成分含量特點。

3.實驗開展

在HPLC法當中，針對卵磷脂的測定一般依靠色譜柱來完成，通過蒸發光散射檢測儀的照射，與色譜柱進行對比，并對流動相進行分析，最終獲得樣本的特征。本文在進行實驗時，選用了diol色譜柱，色譜精度為5μm，色譜柱規格為25c×0.4cm。流動相分為A、B兩組，其中A組流動為正庚烷：異丙醇=65∶113，B組流動為正庚烷：異丙醇：水=31∶61∶13。其洗脫梯度的具體數據為：其中A75%和B50%為0分鐘，A50%和B50%為3分鐘，A100%則為5～11分鐘，B75%則為13～20分鐘。流速為0.8mL/min，色譜柱溫度為40℃，進樣量為10μL。

隨后，本文依據這一數據開展了分離度的測定實驗。分別取六種成分的對照樣品，加入到A組流動相當中進行稀釋、溶解，稱之為為特定容量的溶液，其中，韓棕櫚酸甘油酯為27.5μg/ml、膽固醇450μg/ml、磷脂酰乙醇胺656μg/ml、磷脂酰膽堿3378μg/ml、鞘磷脂58.3μg/ml以及溶血性磷脂酰膽堿48.8μg/ml。隨后根據色譜條件進行進樣，獲取各蜂的分離度，并進行符合程度測定。

4.實驗結果分析

4.1 繪制標準化結果曲線

在完成了分離度測定之后，本文采用metter AE型號分析天平，對對照品磷脂酰膽堿以及磷脂酰乙醇胺進行精密稱取，稱取計量分別為68mg和13mg，將二者共同置于20ml的量瓶之中，用A流動相的溶液進行混合稀釋，并將其作為儲備溶液。再分別量取四組儲備溶液，以2∶1∶1∶1的比例放置在量瓶之中，量瓶容量分別為20毫升、10毫升、10毫升和10毫升，并運用A組流動相進行稀釋，使其成為標準溶液。分別對標準溶液和儲備溶液進行精準量取，在色譜條件下進行進樣測定，隨后對棕櫚酸甘油酯和膽固醇、鞘磷脂、溶血性磷脂酰膽堿進行精準量取，分別為5.5mg、43mg、10.9mg、10.3mg，并分別放置于量瓶之中。與前者相同，運用A組流動相進行混合稀釋，形成各組儲備液。再通過精密量取，獲取各組儲備液10ml、2ml、2ml和3ml，共同放置到量瓶之中，由A組流動相進行稀釋，作為雜質標準溶液，分別精準量取2μL、5μL、10μL、20μL和30μL，對比色譜條件進行測定。

4.2 對數分析

通過實驗測定可以獲取峰面積的對數和進樣量的對數，兩組對數分別對應為縱坐標和橫坐標，進而形成logA與logW的方程關系及及相關系數[2]，通過進樣量的分析可以確認線性范圍的區間，如下表：

方程及相關系數 線性范圍磷脂酰膽堿為 logA=1.840logW+2.813（r=0.9979） 1.69～33.88μg磷脂酰乙醇胺 logA=1.417logW+2.981（r=0.9996） 0.33～6.97μg棕櫚酸甘油酯 logA=1.252logW+3.200（r=0.9990） 0.17～8.83μg膽固醇 logA=1.290logW+3.097（r=0.9993） 0.88～14.83μg鞘磷脂 logA=1.116logW+2.971（r=0.9553） 0.21～3.85μg溶血性磷脂酰膽堿 logA=1.376logW+3.084（r=0.9957） 0.49～4.72μg

4.3 供試樣品測定

為了完成測試對比，本文將a1～a5五組蛋黃卵磷脂進行了測定，選取樣品量75mg，分別放置于25mL的量瓶之中，通過A組流動相進行稀釋并完成混合，再將其在色譜條件當中測定的峰值面積的對數帶入到回歸方程當中進行計算。計算結果顯示，五組樣品的六個成分的含量十分相近，均控制在一定區間。其中，棕櫚酸甘油酯的含量為1.27±0.03μg；膽固醇的含量為8.83±0.17μg；磷脂酰乙醇胺的含量為15.88±0.37μg；磷脂酰膽堿的含量為76.93±5.98μg；鞘磷脂的含量約為2.39±0.03μg；溶血性磷脂酰膽堿的含量則為2.11±0.07μg。

5.結論

相較于其他的測量方法如薄層分析法、氣相色譜法而言，HPLC法具有簡單、快捷的特征。通過檢驗可以看出，作為同一批次的蛋黃卵磷脂，在六個成分的含量方面差別不大，這部分卵磷脂具有較好的藥用價值，能夠作為乳化劑或口服使用。

[1]杜章斌，滕英來，汪勇，等.核磁共振氫譜法測定卵磷脂、溶血磷脂和甘油磷脂酰膽堿含量[J].中國油脂，2015，40(03):83-86.

[2]祝藝娟，黃媛，晁若冰.HPLC法測定脂肪乳注射液及卵磷脂中溶血磷脂的含量[J].藥物分析雜志，2012，32(06):1048-1051.