甜菜堿對酒精性肝損傷大鼠高同型半胱氨酸血癥和肝脂質(zhì)過氧化的影響

海秀玲 姜怡鄧（通訊作者） 張效敏 白曉林

（1寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院 寧夏 銀川 750004）

（2寧夏醫(yī)科大學(xué) 寧夏 銀川 750004）

（3寧夏回族自治區(qū)人民醫(yī)院 寧夏 銀川 750000）

隨著近年來人們物質(zhì)生活水平的提高，人們的生活方式和飲食習(xí)慣發(fā)生了較大程度的改變，人均攝入酒精量日益增加，過量的酒精攝入可以導(dǎo)致消化系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、循環(huán)系統(tǒng)等出現(xiàn)病變，其中肝臟作為代謝酒精的主要器官，其的損傷最為嚴(yán)重，在加之高脂飲食的影響，導(dǎo)致酒精性肝損傷的發(fā)病率呈現(xiàn)逐年上升的趨勢[1]。蛋氨酸循環(huán)障礙導(dǎo)致高同型半胱氨酸血癥的發(fā)生可能是酒精性脂肪肝炎發(fā)病的主要機制之一[2]。甜菜堿又名三甲基甘氨酸，是廣泛分布于動物、植物、微生物體內(nèi)的季銨型水溶性生物堿，是人體內(nèi)唯一可替代葉酸的的甲基供體，參與蛋氨酸循環(huán)和卵磷脂合成。本文采用隨機平行對照的方法，以SD大鼠為研究對象，探究甜菜堿對酒精性肝損傷大鼠高同型半胱氨酸血癥和肝脂質(zhì)過氧化的影響，具體如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

選取30只SPF級雄性大鼠作為分析對象。大鼠的體重在139～171g之間，平均體重為（150±9）g，由本市的動物實驗中心提供。所用藥品：鹽酸甜菜堿，純度為99%，購自浙江菊花集團進出口有限公司；注射用腺苷蛋氨酸（SAM），購自德國基諾藥廠，規(guī)格為每支500mg，又名思美泰；各項指標(biāo)檢測試劑購自本市生物研究所。所有大鼠的自身條件和各個大鼠之間的比較條件均符合本次研究進行的要求。

1.2 方法

將30只大鼠正常喂養(yǎng)一周后按照隨機數(shù)表的方法隨機分為3組，分別為模型組、甜菜堿組和SAM組，每組10只。每天給予三組大鼠酒精和0.5ml的魚油灌胃，酒精劑量的給予以大鼠的體重為準(zhǔn)。初始期為每千克7g酒精，隨后每周遞增每千克0.2g，酒精和魚油的供給共持續(xù)8周。與此同時給予本院自制的飼料，成分為普通飼料、豬油和全脂奶粉，比例為8∶1∶1，將適量的硫酸亞鐵加入每公斤飼料中。在造模后的第四周，甜菜堿組按照大鼠體重的標(biāo)準(zhǔn)給予每千克300mg的甜菜堿水劑灌胃；SAM組給予每千克100mg的SAM腹腔注射，模型組不給予任何治療，治療時長為4周。在第8周處死全部大鼠，造模結(jié)束[3]。在造模結(jié)束后采集大鼠的血液和肝組織標(biāo)本，對血漿總同型半胱氨酸（tHcy）濃度、血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST）、白蛋白（Alb）、白/球蛋白比值（A/G）、肝勻漿丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）及還原性谷胱甘肽（GSH）指標(biāo)進行檢測，同時對大鼠的肝臟進行病理組織學(xué)檢測。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察記錄造模結(jié)束、經(jīng)檢查后三組大鼠的tHcy、ALT、AST、Alb、A/G、MDA、SOD、GSH指標(biāo)和肝臟病理組織學(xué)的檢驗結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

本次研究所得數(shù)據(jù)均采用SPSS13.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，計數(shù)資料用χ2檢驗，計量資料用t檢驗，以P＜0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.結(jié)果

本次研究中共采用研究大鼠30只，30只大鼠在研究期間均表現(xiàn)正常，無意外情況發(fā)生或死亡狀況出現(xiàn)。

2.1 大鼠的血漿tHcy水平測定和肝勻漿MDA、SOD、GSH含量測定結(jié)果

模型組大鼠血漿tHcy水平顯著高于甜菜堿組（P＜0.05），但與SAM組相比無顯著差異（P＞0.05）；與模型組相比，甜菜堿組和SAM的MDA含量明顯降低（P＜0.05），甜菜堿組顯著增加了SOD的活性（P＜0.05），GSH含量雖然有提高的趨勢，但是差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。SAM組的GSH含量顯著提高（P＜0.05），但對于SOD活性的提高無顯著差異（P＞0.05），具體數(shù)據(jù)見表1。

表1 三組大鼠的各項指標(biāo)檢測結(jié)果數(shù)據(jù)對比

2.2 大鼠的肝功能各項指標(biāo)檢測結(jié)果

與模型組相比較，甜菜堿組和SAM組的ALT、AST水平顯著降低（P＜0.05）；甜菜堿組和SAM組之間的ALT、AST水平相較無顯著差異（P＞0.05），具體數(shù)據(jù)見表2。

表2 三組大鼠的肝功能各項指標(biāo)檢測結(jié)果數(shù)據(jù)對比

2.3 大鼠肝組織病理組織學(xué)檢測結(jié)果

模型組存在肝小葉結(jié)構(gòu)，肝細胞索排列紊亂，肝細胞呈現(xiàn)明顯腫脹的跡象，胞漿疏松，呈現(xiàn)顆粒狀變化，出現(xiàn)不同程度的彌漫性肝細胞脂肪變性，脂變肝細胞的體積增大，胞漿內(nèi)可見大小不一、數(shù)量不等的脂肪空泡，胞核處于周邊位置。肝組織內(nèi)存在小葉內(nèi)炎癥，在少部分組織內(nèi)可以見到匯管區(qū)炎癥，沒有見到肝細胞點、片狀壞死。甜菜堿組和SAM組脂肪變性肝細胞較模型組明顯減少，有少量脂肪空泡出現(xiàn)，小葉內(nèi)和匯管區(qū)的炎癥明顯減輕。

3.討論

近年來我國的經(jīng)濟迅速發(fā)展，人們物質(zhì)生活水平的提高帶來了生活方式和飲食習(xí)慣的改變。據(jù)相關(guān)調(diào)查顯示，近年來我國的人均酒精攝入量呈現(xiàn)逐年上升的趨勢。長期飲酒或飲酒過度會對肝造成損傷，但是酒精性肝損傷的發(fā)病機制至今還不明了，相關(guān)研究表明，甲硫氨酸代謝障礙可導(dǎo)致的血漿高同型半胱氨酸血癥可能與其發(fā)病機制有關(guān)。人體飲酒過后，酒精子在體內(nèi)首先被轉(zhuǎn)化為乙醛，然后被轉(zhuǎn)化為乙酸。乙醇主要在人體的肝細胞中代謝，在代謝的過程中會引起某些代謝酶的變化，從而促進脂肪酸的合成，最終引起甘油三酯在肝細胞內(nèi)聚集[4]。甜菜堿廣泛存在于人體內(nèi)，它可以來源于如甜菜、小麥等的食物，也可以由人體內(nèi)的膽堿逐漸發(fā)生氧化而生成。甜菜堿主要作為滲透壓調(diào)節(jié)劑和甲基供體產(chǎn)生生物學(xué)作用，有維持細胞內(nèi)滲透壓、防止蛋白質(zhì)變性和通過蛋氨酸循環(huán)參與蛋白質(zhì)、脂肪代謝的功能。本文的研究中以平行對照的方式，比較甜菜堿和腺苷蛋氨酸（SAM）作為甲基供體在改善甲硫氨酸循環(huán)和肝脂質(zhì)過氧化方面的作用。在改善甲硫氨酸循環(huán)障礙方面，甜菜堿組與模型組比較，血漿tHcy水平顯著降低（P＜0.05），說明甜菜堿對HHcy有很明顯的改善作用，同時對肝過量釋放tHcy有顯著的抑制作用。其參與BHMT的合成，在tHcy向甲硫氨酸的轉(zhuǎn)化中起到很強的催化作用，是甲硫氨酸循環(huán)的重要途徑之一，可以有效防止tHcy出現(xiàn)堆積[5]。同時甲硫氨酸循環(huán)的正常進行可以有效維持血液中S-腺苷蛋氨酸（SAM）的濃度，從而代替SAM在人體肝臟和其他疾病中的治療作用。另一方面，甜菜堿通過增強SOD活性，抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，減少自由基的損傷，對肝細胞有很好的保護作用。從本文的研究結(jié)果可知，甜菜堿可以通過治療高同型半胱氨酸血癥、改善肝脂質(zhì)過氧化來防治酒精肝損傷；同時甜菜堿的作用效果顯著好于腺苷蛋氨酸，對人體有更好的相容性，通過種種作用機制直接或間接作用于發(fā)病體，有很好的效果。

綜上所述，甜菜堿對酒精性肝損傷大鼠高同型半胱氨酸血癥和肝脂質(zhì)過氧化有非常好的治療作用與積極影響，值得進行深入研究。

[1]田旭東，孫平，李彥龍，等.甜菜堿對酒精性肝病大鼠肝細胞色素P4502E1基因和蛋白表達的影響[J].西部中醫(yī)藥，2014(7):8-12.

[2]趙雪珂，程明亮.茅臺酒對大鼠肝組織中CYP2E1基因及蛋白質(zhì)表達的影響[J].貴陽醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2013，38(6):573-577.

[3]張春，壽璽，李志強，等.CYP2E1在HBV轉(zhuǎn)基因小鼠急性肝損傷時的表達及意義[J].新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2016，39(10):1272-1276.

[4]魏琴.PD-1/PD-L1和ICOS/ICOSL共刺激分子在HBV轉(zhuǎn)基因小鼠急性肝損傷中的動態(tài)變化研究[D].新疆醫(yī)科大學(xué)，2014.

[5]孟子愉，尹芝南.GammadeltaT細胞在HBsAg轉(zhuǎn)基因小鼠急性肝損傷中的作用[C]//全國免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會.2015.