體外真菌(1-3)-β-D葡聚糖檢測影響因素探討

（1四川省婦幼保健院檢驗科 四川 成都 610045）

（2西南醫科大學附屬醫院檢驗科 四川 瀘州 646000）

（3四川省婦幼保健院功能影像科 四川 成都 610045）

成春嵐1 向成玉（通訊作者）2 朱巧英1 陳曦3 石艷艷1 倪雪梅1 李寧1

真菌(1-3)-β-D葡聚糖的檢測是診斷深部真菌感染的快速準確的方法，其特異性和敏感性已經得到一致的公認[1.2.3.4.5]。但是據報道生物大分子和頭孢菌素等對檢測結果有影響[3.4.5]，常常出現假陽性、假陰性結果。為了觀察體外檢測過程中是否受到常見介質的影響。我們選擇了正常血漿、無熱原蒸餾水、0.9%的生理鹽水、0.02%兩性霉素B生理鹽水和0.75%氟康唑生理鹽水對白色念珠菌進行稀釋，以觀察治療用藥兩性霉素B和氟康唑對體外檢測結果的影響?，F將結果報告如下。

1.材料與方法

1.1 儀器與試劑

MD-80型微生物動態快速檢測系統，T01智能恒溫儀，冰浴槽以及GKT109動態真菌檢測試劑盒(定量),均由北京金山川科技發展公司提供。

1.2 待測液制備

將白色假絲酵母菌用正常血漿、無熱原蒸餾水、0.9%的生理鹽水、0.02%兩性霉素B生理鹽水和0.75%氟康唑生理鹽水稀釋為0.05麥氏單位（含白色念珠菌1×107CFU/ml）。取上述制備好的各樣本100ul，加入樣品處理液中混勻后70℃保溫10分鐘取出后立刻放入冰水浴中即為待測樣品。細菌培養取每種液體10ul傾注于平板接種，根據生長的菌落進行計算。

1.3 測定分析

取待測樣品200ul直接加入反應主劑中，溶解后使用微量加樣器轉移至10×75mm標準玻璃反應管中（操作規程中不要產生氣泡），插入MD-80微生物快速動態測定系統中進行反應，反應結束后由標準曲線自動計算出待測血漿中葡聚糖含量。操作過程中注意避免微生物及細菌污染。

1.4 統計分析

測定結果用SPSS統計軟件t檢驗進行分析,(1-3)-β-D葡聚糖含量以均數±標準差表示，P＜0.05為差異有顯著性意義。

2.結果

實驗組白色假絲酵母菌菌落數大于10萬CFU/L，葡聚糖含量為93.8±15.8ug/L，對照組白色假絲酵母菌菌落數為2000CFU/L，葡聚糖含量為7.1±2.5ug/L,經spss統計軟件t檢驗，組內結果無顯著性差異（P＞0.05），組間結果有顯著性差異（P＜0.05）。結果見附表。

表1 兩組(1-3)-β-D葡聚糖濃度（ug/L）

表2 兩組白色假絲酵母菌菌落數（CFU/L）

3.討論

（1-3）-β-D葡聚糖是一種多糖，普遍存在于除接合菌外的真菌細胞壁中，占真菌細胞壁干重的50%以上，尤其在酵母樣真菌中含量最高[1]，其他微生物如細菌、病毒及動物、人體細胞均缺乏此成分。因此，血漿（1-3）-β-D葡聚糖檢測對真菌深部感染早期診斷具有重要意義[1.2.3.4.5]。

某些情況可干擾檢測結果而出現假陽性，如標本污染等。本研究中所需器皿均行滅菌、去熱源處理，操作中堅持無菌原則，所選病例均排除了干擾因素，檢測結果可靠。

為了觀察體外其他因素對結果的影響，我們對檢測介質進行研究，所選幾種介質除抗真菌藥外，基本為實驗時常用的介質，結果發現：實驗組、對照組內葡聚糖體外檢測無顯著差異，表明檢測結果與液體介質無關；特別是在真菌治療過程中使用兩性霉素和氟康唑很普遍，但本研究未發現治療用兩性霉素和氟康唑對結果有異常的影響。組間結果差異有顯著性，表明與菌落數顯著相關，說明一定濃度的真菌溶液葡聚糖含量才足夠檢出。當溶液中含有的真菌小于10000個菌落數時，體外檢測其葡聚糖含量不能測出，說明這一計量真菌溶液葡聚糖含量還達不到體外檢測檢出水平。至于是否能引起感染，尚需動物實驗進一步證明。這需要下一步實驗來研究。

[1] Von EiffM,RoosN,Schul R,et al.Pulmonary, aspergillosis:early dignosis improves surviva1[J]. Respiration,1995,62(6):341-347.

[2]李岷，吳紹熙.一種深部真菌早期診斷的新方法-測定真菌細胞壁成分葡聚糖.國外醫學皮膚性病學分冊，1998，24（6）：344-346.

[3]聞平.血清內毒素和1-3-β-D葡聚糖檢測方法的探討[J].上海醫學檢驗雜志，2001，16(2):96-97.

[4] Mennink KerstenMA,Donnelly JP,Verweij PE. Detection of circulating galactomannan for the diagnosis and management of invasive aspergillosis[J].Lancet Infect Dis,2004,4(6):349-357.

[5]張建芳，徐修禮，樊新,等.深部真菌感染患者血漿葡聚糖檢測的臨床意義[J].中華醫院感染學雜志，2005.15（3）：354-355.