不同提取物對野棉花抗炎鎮痛作用的影響研究*

李 香，許義紅，孫曉惠，韓忠耀，付云燕，伍俊科

(黔南民族醫學高等專科學校，貴州都勻 558000)

野棉花為毛茛科銀蓮花屬植物打破碗花花的根(Anemone hupehensis Lem.)或全草，多年生草本植物，苗藥亦稱米花棍。主要含白頭翁素、多糖等成分，由于采集方便、療效顯著，在貴州黔南苗族聚集區被廣泛用于腳氣腫痛、風濕骨痛、跌打損傷、癰疽腫毒、蜈蚣咬傷等癥候的治療[1-2]，通過查閱相關文獻資料，野棉花有鎮痛作用，但其抗炎鎮痛作用活性部位未見有關報道。本實驗通過對野棉花全草不同提取物的抗炎鎮痛作用進行比較，為其下一步抗炎鎮痛有效成分及作用機制奠定基礎。

1 材料與方法

1.1動物 SPF級昆明種小鼠700只，體質量18～22 g，雌雄各半，許可證號:SCXK(黔)2016-0002，由貴州醫科大學提供。小鼠分別飼養于空調室內，室溫(22±2)℃，濕度(70±5)%，喂養標準顆粒飼料，自由飲水和攝食。

1.2藥品、試劑及儀器 乙酸乙酯、正丁醇、石油醚分析純(重慶江川化工有限公司)；二甲苯、冰醋酸、角叉菜膠均為分析純(天津市富宇精細化工有限公司)；旋轉蒸發器RE-52AA(上海亞榮生化儀器廠)；GJ-8402型熱板測痛儀(中國浙江醫療器械廠)；電子天平(瑞士METTLER)；阿司匹林腸溶片(批號：ZKA1402)。

1.3方法

1.3.1樣品制備 野棉花采自貴州黔南苗族布依族自治州都勻市，經黔南民族醫學高等專科學校魏學軍教授鑒定為毛茛科銀蓮花屬植物打破碗花花(Anemone hupehensis Lem.)全草。野棉花全草用75%乙醇回流提取，減壓濃縮，回收乙醇至稠膏，得粗提物，將粗提取物用蒸餾水混懸，分別用乙酸乙酯、正丁醇萃取，回收溶劑，冷凍干燥，得到野棉花粗提物、乙酸乙酯、正丁醇提取物和水部位，各提取物密封置冰箱中冷藏，臨用前以配成所需濃度。

1.3.2分組及給藥 小鼠分為70組，每組10只。即生理鹽水組(空白對照組)，根據全草生藥用量6～12 g及提取后得膏率折算小鼠用量后選取中劑量0.78 g/kg作為阿司匹林組(陽性對照組)濃度。將野棉花75%乙醇粗提物、乙酸乙酯、正丁醇、水部位的高、中、低劑量組，根據其得膏率及其全草生藥用量,設計其高中低劑量分別為1.56、0.78、0.39 g/kg。

1.3.3耳廓腫脹[3]各組小鼠連續灌胃給藥7 d，末次給藥30 min，于小鼠右耳正反兩面均勻涂二甲苯每只0.2 mL，左耳不涂以對照。30 min后小鼠脫頸處死，剪下左、右耳片，用6 mm打孔器沿同一位置打下左右耳片，于電子天平精密稱重，右耳質量-左耳質量=腫脹度，腫脹抑制率=(模型組平均腫脹度-給藥組平均腫脹度)×100%/模型組平均腫脹度。

1.3.4足跖腫脹[4-5]各組小鼠連續灌胃給藥7 d后于小鼠右后足墊皮下注射1.0%角叉菜膠45 μL致炎，再給予對應藥物，于次日處死小鼠，剪下雙后足，精密稱量，足跖腫脹度=右足重量-左足重量。腫脹抑制率=(模型組平均腫脹度-給藥組平均腫脹度)×100%/模型組平均腫脹度。

1.3.5棉球肉芽腫脹[6-7]各組小鼠注射乙醚進行淺麻醉，將滅菌的棉球約4.5 mg植入小鼠右腋窩下，縫合，各組小鼠連續灌胃給藥7 d，末次給藥1 h后處死，取出棉球，70 ℃烘箱干燥至恒重，精密稱重，肉芽腫脹重=干燥后棉球重-原棉球重，計算小鼠肉芽腫脹抑制率。腫脹抑制率=(模型組平均肉芽腫干重-給藥組平均肉芽腫干重)×100%/模型組平均肉芽腫干重。

1.3.6熱板致痛[8]取小鼠于實驗前用熱板測痛儀(55.0±0.5)℃測定小鼠舔后足所需時間作為小鼠的痛閾值，挑選痛閾值在5～30 s內的。各組小鼠連續灌胃給藥7 d，末次給藥1 h后，分別將小鼠置于熱板上測定痛閾值，痛閾提高率(%)=(給藥后平均痛閾值-給藥前平均痛閾值)/給藥前平均痛閾值×100%。

1.3.7醋酸致扭體反應[9]各組小鼠連續灌胃給藥7 d，末次給藥1 h后，各小鼠腹腔分別注射0.6%冰乙酸20 mL/kg,觀察并記錄小鼠扭體潛伏期及15 min內各小鼠扭體反應的次數，計算鎮痛率。鎮痛率=(空白對照組平均扭體次數-給藥組平均扭體次數)×100%/空白對照組平均扭體次數。

2 結 果

2.1抗炎作用效果分析 與空白對照組比較，小鼠耳廓腫脹、足趾腫脹及棉球肉芽腫脹實驗水部位低劑量的抗炎作用差異無統計學意義(P>0.05)，其余各劑量提取部位均有明顯的抗炎作用(P<0.05)，見表1～3。

表1 野棉花不同提取物對小鼠耳廓腫脹的影響

*：P<0.01，與空白對照組比較

表2 野棉花不同提取物對小鼠足跖腫脹的影響

*：P<0.01，與空白對照組比較

2.2鎮痛作用效果分析 與空白對照組比較，其他各組均有明顯的鎮痛作用(P<0.05)，見表4、5。

表3 野棉花不同提取物對小鼠棉球肉芽腫的影響

*：P<0.01，與空白對照組比較

表4 野棉花不同提取物對熱板法致痛的影響

*：P<0.01，與空白對照組比較

表5 野棉花不同提取物對扭體法小鼠疼痛的影響

續表5 野棉花不同提取物對扭體法小鼠疼痛的影響

*：P<0.01，與空白對照組比較

3 討 論

疼痛是機體受到內外環境的一種傷害性刺激時出現的情緒反應的生理病理過程。可視為機體受到傷害的警告，發揮防御保護的作用，同時也是多種疾病一種癥狀。中醫方面認為，通則不痛，痛則不通。如果經脈流行，血氣環轉，上下內外，若病邪相加，氣行不暢，血運不調則氣血不通，不通則痛。現代醫學很多組胺，鉀離子等炎性介質既引起炎癥又致痛。目前相關文獻表明，很多生物堿，苷類，多糖有一定抗炎鎮痛的作用[10-11]。

野棉花全草盛產于貴州省黔南苗族聚集區，一年四季均可采集使用，課題組在開展課題之前，走訪貴州黔南許多中醫醫生，稱其在腫瘤、積食、腫痛、殺蟲方面有一定作用，特別是鎮痛與殺蟲效果比較顯著，在民間被廣泛用于腳氣腫痛、風濕骨痛、跌打損傷、癰疽腫毒、馬腹痛、牙痛[12-13]等癥候的治療。由于全年可采，鎮痛療效顯著，因此成為貴州黔南民間常用的中藥，雖然該藥具備一定鎮痛作用，但其鎮痛作用的活性部位，鎮痛抗炎有效成分，鎮痛抗炎機制未見相關文獻報道，因此本課題第一次通過實驗來探索野棉花在抗炎鎮痛方面的療效，為下一步其鎮痛抗炎的有效成分及鎮痛抗炎機制提供研究基礎，并為鎮痛抗炎新藥研究奠定一定理論基礎。

本實驗以抗炎、鎮痛為主要指標。根據相關參考文獻制備野棉花全草的粗提物、乙酸乙酯、正丁醇、水層等不同提取物。根據其用藥6～12g及其得膏率，設計高、中、低3個不同劑量組。與空白對照組比較，小鼠耳廓腫脹、足趾腫脹及棉球肉芽腫脹實驗水部位低劑量的抗炎作用差異無統計學意義(P>0.05)，其余各劑量提取部位均有顯著的抗炎鎮痛作用(P<0.05)。乙酸乙酯部位在熱板法鎮痛試驗中活性最強，正丁醇部位在小鼠耳廓腫脹、足趾腫脹及棉球肉芽腫脹抗炎實驗中和扭體法中活性最強。初步判斷正丁醇和乙酸乙酯部位是其主要的

抗炎鎮痛活性部位。實驗表明，野棉花具備良好的抗炎鎮痛作用，同時，隨著增加不同提取物的劑量，其鎮痛率、痛閾值、抑制率越高，腫脹度與扭體次數降低，證明高劑量組有較好的鎮痛抗炎效果，下一步將對其具體作用機制和有效成分進行深入研究。

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