高效液相色譜—熒光法測定食用油中苯并芘含量

何旭東 李紅梅

摘 要：該文建立了高效液相色譜-熒光法測定食用油中苯并芘含量實(shí)驗(yàn)方法。色譜柱采用安捷倫C18柱（250mm×4.6mm，5μm），以乙腈和水為流動相，用熒光檢測器測定食用油中苯并芘的含量。苯并芘的線性范圍分別為1～10ng/mL，最低檢出限為0.2ng/mL，平均加標(biāo)回收率為94.0%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差2.9%。該方法適用于食用油中苯并芘含量定量分析。

關(guān)鍵詞：苯并芘；高效液相色譜；熒光檢測器

中圖分類號 TS201.6 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A 文章編號 1007-7731（2018）09-0135-02

Quantitative Determination of Benzopyrene in Edible oil by High Performance Liquid Chromatography—Fluorescence Detector

He Xudong1 et al.

（1Yangzhou Product Quality Supervision and Inspection Institute，Yangzhou 225000，China）

Abstract：To study a method for quantitative determination of Benzopyrene in edible oil by High Performance Liquid Chromatography—Fluorescence Detector.The analytical chromatographic column was Agilent C18（250 mm×4.6mm，5μm），the mobile phase was acetonitrile-water（88∶12，V/V）.The samples were determined by an Fluorescence detector.The calibration curves had good linearity in the range of 1～10ng/mL for Benzopyrene，the detection limit for Benzopyrene was 0.2ng/mL，the average recoveries of Benzopyrene were 94.0%（n=6，RSD =2.9%）.The method is reproducible for qualitative analysis of Benzopyrene in edible oil.

Key words：Benzopyrene；HPLC；Fluorescence detector

苯并芘又稱苯并（α）芘[1-8]，英文縮寫B(tài)aP，是一種常見的高活性間接致癌物和突變原，主要存在于煤焦油、各類碳黑和煤、石油等燃燒產(chǎn)生的煙氣、香煙煙霧、汽車尾氣中，以及焦化、煉油、瀝青、塑料等工業(yè)污水中。苯并芘在土壤和作物中容易殘留，是一種高活性致癌物質(zhì)，肉和魚中的BaP含量取決于烹調(diào)方法，水果、蔬菜和糧食中的BaP含量取決其來源，各個(gè)國家和地區(qū)都重視食品中苯并芘的含量，國家標(biāo)準(zhǔn)GB 2762-2017[9]規(guī)定食用油中苯并芘限量10μg/kg。本文采用分子印記柱提取食用油中苯并芘，然后用液相色譜-熒光檢測定量，適用于食用油中苯并芘含量的測定。

1 材料與方法

1.1 材料和儀器 苯并芘標(biāo)準(zhǔn)品（上海安譜科學(xué)儀器有限公司）；食用油（大連中食國實(shí)）；乙腈（色譜純），Tedia公司；實(shí)驗(yàn)用水，超純水；中性氧化鋁固相萃取柱（上海安譜科學(xué)儀器有限公司），苯并芘分子印跡柱（上海安譜科學(xué)儀器有限公司）。1200液相色譜-熒光檢測器，安捷倫公司；超純水機(jī)，美國Millipore公司；電子天平，瑞士Sartorius公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 色譜條件選擇 色譜柱：安捷倫C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：乙腈∶水=88∶12；進(jìn)樣量10μL；流速1.0mL/min。熒光檢測器：激發(fā)波長：384nm，發(fā)射波長：406nm。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制 準(zhǔn)確稱取苯并芘標(biāo)準(zhǔn)品10mg，用乙腈溶解后定容至10mL容量瓶中，搖勻，該溶液作為標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液。準(zhǔn)確移取上述溶液并且用流動相稀釋定容為1，2，4，6，10ng/mL標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。

1.2.3 樣品制備 準(zhǔn)確稱取0.4g試樣，加入5mL正己烷，旋渦混合0.5min，待凈化。采用苯并（a）芘分子印跡柱凈化樣液，收集凈化液，氮?dú)獯蹈桑瑴?zhǔn)確吸取0.4mL乙腈渦旋復(fù)溶試樣0.5min，過微孔濾膜待測[10]。

2 結(jié)果與分析

2.1 提取柱選擇 本文采取了中性氧化鋁柱和苯并芘分子印跡柱前處理食用油中的苯并芘，實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)采用中性氧化鋁洗脫后，食用油不保留，苯并芘難以提取出來。所以采用苯并芘分子印跡柱，結(jié)果比較滿意。

2.2 線性關(guān)系的考察 吸取苯并芘標(biāo)準(zhǔn)溶液10μL，高效液相色譜-熒光檢測器檢測，標(biāo)準(zhǔn)曲線圖見圖1。以峰面積為縱坐標(biāo)，以濃度（ng/mL）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程：y=33.35885x+1.54424，R2=0.99966。苯并芘在1～10ng/mL之間線性關(guān)系良好。并以信噪比等于3為標(biāo)準(zhǔn)，測得苯并芘的檢出限為0.2ng/mL。

2.3 精密度試驗(yàn) 精密吸取苯并芘標(biāo)準(zhǔn)品溶液10 μL重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖峰面積，并測定峰面積的平均值和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，測定結(jié)果見表1。連續(xù)6次實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，精密度實(shí)驗(yàn)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.36%，本實(shí)驗(yàn)測定苯并芘精密度良好，具有良好的準(zhǔn)確度。

2.4 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取同一樣品，重復(fù)測定6次，記錄色譜圖，測定結(jié)果見表2，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.46%，說明用本方法測苯并芘含量重復(fù)性良好。

2.5 回收率實(shí)驗(yàn) 精密稱取樣品6次，準(zhǔn)確加入苯并芘0.5μg，按照1.2.3樣品制備樣品溶液，液相色譜外標(biāo)法定量。由表3可知，回收率在89.1%～97.0%，平均回收率為94.0%，表明高效液相色譜-熒光法檢測食用油中苯并芘含量具有良好的準(zhǔn)確性。

2.6 樣品測定 用電子天平準(zhǔn)確稱取6個(gè)平行樣品，按1.3.3方法制備樣品溶液，液相色譜-熒光檢測器檢測，計(jì)算含量，其結(jié)果見表4，由表4可知，樣品中苯并芘平均含量都在2.603ng/mL，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.9%。苯并芘標(biāo)準(zhǔn)品及樣品的色譜圖見圖1、圖2，苯并芘標(biāo)準(zhǔn)品出峰時(shí)間在8.2min左右。

3 結(jié)論

本文采用高效液相色譜-熒光法對食用油中苯并芘含量，結(jié)果表明：采用C18柱，流動相以乙腈∶水=88∶12，方法的精密度比較好、回收率較高，表明該法適用于食用油中苯并芘含量的測定。

參考文獻(xiàn)

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[9]中國人民共和國國家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會.GB 2760-2014食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)[S].

[10]中國人民共和國國家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會.GB 5009.27-2016食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中苯并（a）芘的測定[S].

（責(zé)編：張宏民）