QuEChERS結(jié)合氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定吐根藥材中38種農(nóng)藥殘留

孫 菡 ，袁 浩 ，徐艷梅 ，郭一璇

（1.河北省藥品檢驗(yàn)研究院，河北 石家莊 050011； 2.河北省辛集市第一中學(xué)，河北 石家莊 052300）

吐根為茜草科頭九節(jié)屬植物 Cephaelis ipecacuanha（Brot.）A.Rich.或 Cephaelis acuminata Karsten 的干燥根及根莖，主要有效成分為生物堿，《歐洲藥典》[1]《美國藥典》[2]《日本藥局方》[3]均有收載。吐根主產(chǎn)地為巴西，我國不產(chǎn)，因此沒有相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，相關(guān)研究也較少。其主要用于催吐、鎮(zhèn)咳祛痰等，我國多用于止咳類成方制劑中，如小兒化痰止咳顆粒等。吐根主要活性成分為生物堿，其中主要成分為吐根堿、吐根酚堿等異喹啉型生物堿[4]。早期，我國企業(yè)主要通過進(jìn)口流浸膏進(jìn)行吐根酊及含吐根類成方制劑的生產(chǎn)，近些年隨著需求量的增加，國內(nèi)企業(yè)也開始進(jìn)口吐根藥材進(jìn)行生產(chǎn)。隨著國內(nèi)需求量連年增加，野生吐根已供不應(yīng)求，種植面積必然會不斷增大，但國內(nèi)暫無關(guān)于農(nóng)藥殘留等的相關(guān)檢測與研究，對于多用于兒童止咳類成方制劑的藥材來說風(fēng)險(xiǎn)較大。本研究中參考國家禁限用農(nóng)藥名目，最終確定適宜使用氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（GC-MS/MS）法測定吐根中38種農(nóng)藥殘留，并參考QuEChERS方法[5-10]，確定樣品提取方法。通過制訂GC-MS/MS檢測法[11-15]，并通過科學(xué)的驗(yàn)證方式，建立了快速、靈敏的農(nóng)藥殘留測定方法，收集了樣品農(nóng)殘數(shù)據(jù)。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

GCMS-TQ8040型氣相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀，配有電子轟擊源（EI，日本Shimadzu公司）；AE240型電子分析天平（瑞士Mettler Toledo公司）；超純水儀（美國 Millipore公司）；精密移液器（德國 Eppendorf公司）。

1.2 試藥

38種農(nóng)藥試劑購自農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研檢測所、Solution in Methanol公司及 DR.Ehrenstorfor GmbH 公司；乙腈、丙酮為GC純，醋酸為色譜純（美國默克公司）；無水硫酸鎂，無水乙酸鈉，PSA，C18，硅膠，石墨化碳黑（博納艾吉爾公司）。吐根藥材來源于河北安國中藥市場，產(chǎn)地為巴西和哥斯達(dá)黎加，經(jīng)河北省藥品檢驗(yàn)研究院中藥室段吉平主任中藥師鑒定均為正品。

2 方法與結(jié)果

2.1 分析條件

2.1.1 色譜條件

色譜柱：HP-5毛細(xì)管色譜柱（30 m ×0.25 mm，0.25 μm）；柱溫梯度：起始溫度 50 ℃ ，保持 1 min，以25℃ /min的速率升至 125℃，再以 10℃ /min的速率升至280℃，保持10 min；進(jìn)樣口溫度：200℃；流速：1 mL /min；進(jìn)樣量：1 μL；進(jìn)樣方式：不分流。

2.1.2 質(zhì)譜條件

離子源：EI源；離子源溫度：230℃；質(zhì)譜傳輸接口溫度：280℃；碰撞氣體：氬氣；監(jiān)測模式：多反應(yīng)監(jiān)測模式（MRM），每個(gè)農(nóng)藥選擇2個(gè)特征MRM，其中一個(gè)作為定量離子對，另一個(gè)作為定性離子對，其中存在異構(gòu)體的品種每個(gè)異構(gòu)體選擇2個(gè)特征MRM，一個(gè)作為定量離子對，另一個(gè)作為定性離子對。詳見表1。

表1 38種農(nóng)藥的保留時(shí)間、優(yōu)化的質(zhì)譜分析參數(shù)及試驗(yàn)結(jié)果

圖1 38種有機(jī)磷農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的全掃描總離子流圖

2.2 溶液制備

標(biāo)準(zhǔn)貯備液：稱取固體農(nóng)藥試劑適量，精密稱定，分別用丙酮配置成質(zhì)量濃度約為100 μg/mL的單一農(nóng)藥成分的標(biāo)準(zhǔn)貯備液；精密量取液體農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)試劑適量，分別用丙酮配制成質(zhì)量濃度為5～50 μg/mL的單一農(nóng)藥成分的標(biāo)準(zhǔn)貯備液，儲藏于-18℃冰箱中。精密量取標(biāo)準(zhǔn)貯備液，加丙酮配制成高、中、低3個(gè)質(zhì)量濃度的38種農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。取高濃度混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，在scan模式下測定總離子流圖(見圖1)。

供試品溶液：取藥材樣品，粉碎，過100目篩（樣品有一定毒性，易引起過敏，注意防護(hù)），取樣品3 g，精密稱定，加乙腈15 mL，浸泡30 min，勻漿，加入無水硫酸鎂與無水乙酸鈉的混合粉末（4∶1）5 g，搖勻，再置振蕩器上劇烈振搖（350次/分）3 min，于冰浴中冷卻10 min，離心（4 000 r/min）5 min，取上清液 9 mL，置已預(yù)先裝有凈化材料的分散固相萃取凈化管（無水硫酸鎂200 mg，PSA 200 mg，C18200 mg）中，渦旋，充分混勻，再置振蕩器上劇烈振搖（350 次 /分）5 min，離心（4 000 r/min）5 min，精密吸取上清液5 mL，氮?dú)獯抵两?，用丙酮溶解并定容? mL，混勻。

空白樣品基質(zhì)溶液：取空白藥材樣品，按供試品溶液制備方法制備空白基質(zhì)溶液。

2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：取系列質(zhì)量濃度的38種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液加入空白基質(zhì)，按擬訂色譜條件進(jìn)樣分析，以質(zhì)量濃度（μg/L）為橫坐標(biāo)、峰面積（A）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，在選定范圍內(nèi)兩者線性關(guān)系良好（r≥0.995）。

回收率試驗(yàn)：分別取空白吐根藥材3 g，按照38個(gè)農(nóng)藥品種的線性數(shù)據(jù)，以線性低點(diǎn)2倍，5倍，10倍的濃度折算加入量，每個(gè)點(diǎn)加入2份樣品，按擬訂方法進(jìn)行試驗(yàn)，計(jì)算38種農(nóng)藥回收率。結(jié)果見表1。

精密度試驗(yàn)：因樣品均未檢出上述農(nóng)藥成分，因此使用回收率中加標(biāo)回收數(shù)據(jù)作為連續(xù)測定數(shù)據(jù)，結(jié)果的RSD≤9.6%（見表 1）。

檢出限測定：以回收率試驗(yàn)測定方法制備測定溶液進(jìn)行試驗(yàn)，以信噪比＝3確定方法的檢出限，38種農(nóng)藥的檢出限范圍為 0.2 ～ 5.2 μg/kg（見表 1）。

2.4 樣品檢測

對7批次的吐根藥材按擬訂方法進(jìn)行檢測，結(jié)果并未檢出上述農(nóng)藥殘留。經(jīng)與藥材提供方進(jìn)行溝通發(fā)現(xiàn)，本次收集到的樣品以野生吐根為主，這應(yīng)該是農(nóng)藥殘留較少的主要原因。

3 討論

3.1 提取方法選擇

提取方法的選擇是殘留測定的重要步驟，方法簡便、效率高、凈化效果好等都是需要考慮的內(nèi)容。本研究中參考近些年發(fā)展起來的QuEChERS農(nóng)藥殘留測定方法，并根據(jù)自有設(shè)備對樣品提取方法進(jìn)行研究。樣品提取中采用勻漿法替代中藥提取中常用的超聲法。此法簡便快捷，提取效率高，能有效減少試驗(yàn)時(shí)間，但主要針對蔬菜、水果等含水量較高的樣品。而中藥材多為水分低于10%的干物質(zhì)，提取中不利于目標(biāo)物的游離，因此試驗(yàn)中考慮加水浸泡使植物細(xì)胞膨脹，以提高提取效率。

3.2 凈化吸附劑選擇

選擇凈化吸附劑時(shí)考慮到樣品與待測成分的性質(zhì)。對PSA、C18、氧化鋁、硅膠、弗羅里硅土等進(jìn)行了比較，PSA主要用于去除糖類、酚類、有機(jī)酸、脂肪酸，并對親脂性色素有一定吸附作用，C18是重要的凈化劑，兩者實(shí)際應(yīng)用較廣，與中性氧化鋁和弗羅里硅土相比對回收的影響更小，但是對色素的凈化作用弱；石墨化碳黑可去除色素等物質(zhì)，但同時(shí)會導(dǎo)致回收率下降?？紤]到吐根藥材色素含量低，不需要增加脫色劑，為保證回收率并兼顧溶液凈化效果，經(jīng)過比對試驗(yàn)，選擇無水硫酸鎂，PSA，C18各200 mg作為凈化吸附劑。

3.3 應(yīng)用價(jià)值

雖然本試驗(yàn)中的樣品均未檢出相應(yīng)農(nóng)藥殘留，但研究中建立的測定吐根中38種農(nóng)藥殘留的GC-MS/MS法，操作快捷簡便、靈敏可靠，大大縮短了試驗(yàn)室檢測時(shí)間，可用于將來吐根種植品上市后的農(nóng)藥殘留檢測與數(shù)據(jù)收集工作。

參考文獻(xiàn)：

[1] European Pharmacopoeia Commission.EP7[M].Strasbourg：European Directorate Health Care，2010：1155-1156.

[2] The United States Pharmacopeial Convention.USP32-NF27[M].USA PharmacopoeiaRockville：The United States Pharmacopeial Convention，2009：2682.

[3] The Japanese Pharmacopoeia.JP15[M].Tokyo：Ministry of Health，Labour and Welfare，2006：1303.

[4] 孫 磊，肖宏華，金宏宇.吐根的生藥鑒定與薄層色譜鑒別[J].中國藥品標(biāo)準(zhǔn)，2012，13（5）：351-353.

[5] 孔令軍，張婭婷，谷令彪，等.中藥材農(nóng)藥殘留的研究進(jìn)展[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2015，21（21）：231-234.

[6] 李家春，伍靜玲，秦建平，等.基于Qu ECh ERS法-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法的5種中藥材中35種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量的快速分析[J].藥物分析雜志，2016，36（1）：122-128.

[7] 陳曉水，邊照陽，楊 飛，等.對比3種不同的QuEChERS前處理方式在氣相色譜法-串聯(lián)質(zhì)譜檢測分析煙草中上百種農(nóng)藥殘留中的應(yīng)用[J].色譜，2013，31（11）：1116-1128.

[8] 李 蓉，儲大可，張朋杰，等 .QuEChERS/HPLC-MS/MS法測定黃瓜、菜心、葡萄、香蕉中127種農(nóng)藥殘留[J].分析測試學(xué)報(bào)，2015，34（5）：502-511.

[9] 徐 娟，陳 捷，王 嵐，等.QuEChERS提取與高效液相色譜-電噴霧電離串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法檢測果蔬中的230中農(nóng)藥殘留[J].分析測試學(xué)報(bào)，2013，32（3）：293-301.

[10] 王連珠，周 昱，黃小燕，等.基于 QuEChERS提取方法優(yōu)化的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定蔬菜中51種氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留[J].色譜，2013，31（12）：1167-1175.

[11] Anastassiades M，Lehotay SJ，Stajnbaher D，et al.Fast and easy multiresidue method employing acetonitrile extraction/partitioning and ″dispersive solid-phase extraction″for thedetermination of pesticide residues in produce[J].J AOAC Int， 2003（86）：412-431.

[12] 田紹瓊，毛秀紅，苗 水，等.氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定人參和黃芪中 7 種毒殺芬殘留量[J].色譜，2012，30（1）：14-20.

[13] 苗 水，郟征偉，毛秀紅，等.氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測定黃芪中 238 種農(nóng)藥殘留[J].中國藥學(xué)雜志，2012，47（4）：303-310.

[14] 譚福能，何媛媛.固相萃取-氣相色譜法檢測三七中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留[J].文山學(xué)院學(xué)報(bào)，2014，27（6）：1-3.

[15] 李麗莉，邱明明，何頌華，等.液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定黃芪中 119 中農(nóng)藥殘留[J].藥物分析雜志，2012，32（3）：424-433.