鮮紅天麻化學成分研究△

鄭秀花，劉偉，陳龍，王曉，郭蘭萍，董紅敬*

[1.山東中醫藥大學 藥學院，山東 濟南 250355；2.齊魯工業大學(山東省科學院) 山東省分析測試中心 山東省中藥質量控制技術重點實驗室，山東 濟南 250014；3.中國中醫科學院 中藥資源中心，北京 100700]

多數中藥需炮制后才能供臨床使用，經過炮制后其藥性、化學成分等均發生了一定程度的變化[1-5]。天麻為蘭科植物天麻GastrodiaelataBl.的干燥塊莖，具有息風止痙、平抑肝陽、祛風通絡的功能，常用于頭痛、肢體麻木等癥狀的治療[6-7]。歷代本草記載天麻的炮制方法主要有酒制、姜制等，現多用其蒸制品[8-12]。目前關于天麻干品化學成分的研究頗多，發現其主要含有天麻素、巴利森苷等酚類化合物[13-16]。然而對新鮮天麻化學成分的研究確鮮有報道，目前多采用LC-UV/MS等分析方法對其炮制前后的成分變化進行推測，并不能對其變化后的成分進行結構確認[17]。對鮮紅天麻的化學成分進行系統分離，可為紅天麻炮制前后化學成分變化研究提供良好的物質基礎。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Waters 2695高效液相色譜儀(美國Waters公司)；RIGOL-3000系列高效液相色譜儀(北京普源精電科技有限公司)；CHEETAHTMMP系列中壓制備液相色譜儀(天津博納艾杰爾科技有限公司)；分析型色譜柱為Waters-Symmetry?C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)(沃特世公司)；半制備型色譜柱為YMC Pack ODS-A(250 mm×10.0 mm，5 μm)(日本YMC公司)；Bruker-400核磁共振波譜儀(瑞士布魯克公司)；Agilent 6520四級桿飛行時間質譜儀(美國安捷倫科技有限公司)。

1.2 材料

色譜級甲酸(天津市科密歐化學試劑有限公司)；色譜級甲醇(山東禹王實業有限公司化工分公司)；色譜乙腈(美國Tedia公司)。

實驗所用紅天麻采集于云南省昭通市彝良縣小草壩天麻種植基地，經云南省農業科學院藥用植物研究所劉大會研究員鑒定為蘭科天麻屬植物紅天麻GastrodiaelataBl.f.elata的新鮮塊莖。

2 提取與分離

鮮紅天麻36 kg，洗凈，切塊，榨汁，過濾，濾液采用D101大孔樹脂進行分離純化，分別用純水(25 L)，10%(25 L)、30%(25 L)、50%(25 L)、70%(25 L)、95%乙醇(25 L)水梯度洗脫，合并70%乙醇水部位，濃縮得浸膏19.695 g。取70%乙醇水部位浸膏，采用50%甲醇水溶解后過0.45 μm有機濾膜，采用中壓制備色譜(C18反相柱，40 mm×400 mm)，分別以甲醇-0.1%甲酸水(30%、50%、100%)進行梯度洗脫，共分離得到10個流分(Fr.1～10))。分別取 Fr.3～5(1.283 g)、Fr.7(108 mg)，采用甲醇-0.1%甲酸水(50∶50，V/V)進行等度洗脫，得到化合物1(22 mg)、2(15 mg)、3(156 mg)、4(72.3 mg)；Fr.8(160 mg)用甲醇-0.1%甲酸水(69∶31，V/V)進行等度洗脫，得化合物5(10 mg)、6(9 mg)；Fr.10(89 mg)用甲醇-0.1%甲酸水(70∶30，V/V)等度洗脫，得到化合物7(19 mg)。

3 結構鑒定

化合物1：白色針晶，ESI-MS：m/z243.10[M-H]-；1H-NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ：6.99(2H，d，J=8.0 Hz，H-2′，6′)，6.95(1H，dd，J=2.0，8.0 Hz，H-6)，6.92(1H，br d，H-2)，6.78(1H，d，J=8.0 Hz，H-5)，6.65(2H，d，J=8.4 Hz，H-3′，5′)，4.20(2H，s，H-7)，3.73(2H，s，H-7′)，3.19(3H，s，-OCH3)；13C-NMR(DMSO-d6，100 MHz)δ：155.8(C-4′)，154.9(C-4)，131.7(C-1′)，130.5(C-2)，129.5(C-1)，128.3(C-3)，128.8(C-2′，6′)，127.3(C-6)，115.4(C-3′，5′)，115.2(C-5)，74.2(C-7)，57.5(-OCH3)，34.8(C-7′)。該化合物數據與文獻報道一致[18]，化合物1鑒定為4-羥基-3-(4-羥基芐基)芐基甲基醚。

化合物2：白色結晶，ESI-MS：m/z205.06[M+H]+；1H-NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ：9.20(2H，s，4，4′-OH)，6.96(4H，d，J=8.4 Hz，H-2，2′，6，6′)，6.66(4H，d，J=8.4 Hz，H-3，3′，5，5′)，3.68(2H，s，H-7)；13C-NMR(DMSO-d6，100 MHz)δ：155.9(C-4，4′)，132.6(C-1，1′)，129.9(C-2，2′，6，6′)，115.6(C-3，3′，5，5′)，39.4(C-7)。該化合物數據與文獻報道一致[19]，化合物2鑒定為4，4′-二羥基二苯甲烷。

化合物3：淡黃色粉末，ESI-MS：m/z175.07[M+Na]+，151.08[M-H]-；1H-NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ：9.35(1H，br s，4-OH)，7.11(2H，d，J=8.4 Hz，H-2，6)，6.72(2H，d，J=8.4 Hz，H-3，5)，4.30(2H，s，H-7)，3.41(3H，q，J=7.2 Hz，H-1′)，1.11(3H，t，J=7.2 Hz，H-2′)；13C-NMR(DMSO-d6，100 MHz)δ：157.2(C-4)，129.7(C-2，6)，129.3(C-1)，115.4(C-3，5)，72.0(C-7)，64.9(C-1′)，15.6(C-2′)。以上數據與文獻報道一致[20]，化合物3鑒定為對羥芐基乙基醚。

化合物4：白色粉末，ESI-MS：m/z253.09[M+H]+，229.09[M-H]-；1H-NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ：9.50(2H，-OH)，7.11(4H，d，J=8.4 Hz，H-2，2′，6，6′)，6.73(4H，d，J=8.4 Hz，H-3，3′，5，5′)，4.33(4H，s，H-7，7′)；13C-NMR(DMSO-d6，100 MHz)δ：157.3(C-4，4′)，129.7(C-2，2′，6，6′)，129.1(C-1，1′)，115.5(C-3，3′，5，5′)，71.4(C-7，7′)。以上數據與文獻報道一致[21]，化合物4鑒定為4，4′-二羥基二芐基醚。

化合物5：白色粉末，ESI-MS：m/z307.15[M+H]+，305.12[M-H]-；1H-NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ：9.16(3H，-OH)，6.97(2H，d，J=8.0 Hz，H-2′，6′)，6.92(2H，d，J=8.0 Hz，H-2″，6″)，6.84(1H，d，J=2.4 Hz，H-3)，6.77(1H，dd，J=8.0，2.4 Hz，H-5)，6.68，(1H，d，J=8.0 Hz，H-6)，6.64(2H，d，J=8.0 Hz，H-3″，5″)，6.62(2H，d，J=8.0 Hz，H-3′，5′)，3.68(2H，s，H-7′)，3.63(2H，s，H-7″)；13C-NMR(DMSO-d6，100 MHz)δ：155.8(C-3″)，155.7(C-4″)，153.4(C-1)，132.6(C-4)，132.5(C-1″)，131.9(C-2)，130.9(C-3)，129.9(C-2′，6′)，129.8(C-2″，6″)，128.3(C-1′)，127.4(C-5)115.5(C-3′，5′)，115.4(C-6，3″，5″)，39.8(C-7″)，34.9(C-7′)。以上數據與文獻報道一致[22]，化合物5鑒定為2，4-二對羥基芐基苯酚。

化合物6：白色粉末，ESI-MS：m/z353.23[M+NH4]+，335.13[M-H]-；1H-NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ：8.32(2H，-OH)，7.24(2H，d，J=8.4 Hz，H-2″，6″)，7.23(2H，d，J=8.4 Hz，H-2，6)，7.13(2H，d，J=8.4 Hz，H-2′，6′)，6.96(2H，d，J=8.4 Hz，H-3，5)，6.77(2H，d，J=8.0 Hz，H-3″，5″)，6.73(2H，d，J=8.4 Hz，H-3′，5′)，4.93(2H，s，H-7′)，4.38(2H，s，H-7)，4.35(2H，s，H-7″)；13C-NMR(DMSO-d6，100 MHz)δ：158.4(C-4)，157.7(C-4″)，157.3(C-4′)，135.0(C-1)，131.0(C-1′)，130.1(C-2′，6′)，129.8(C-2″，6″)，129.0(C-2，6)，127.6(C-1″)，115.6(C-3″，5″)，115.5(C-3″，5″)，115.0(C-3，5)，71.5(C-7′)，71.1(C-7)，69.7(C-7″)。以上數據與文獻報道一致[23]，化合物6鑒定為天麻酚A(Gastrol A)。

化合物7：白色粉末，UV λmax(nm)：201.3，230.8，274.7。ESI-MS：m/z281.1147[M+Na]+(理論值281.114 8，化合物分子式為C16H18O3)；1H-NMR數據7.24(2H，d，J=8.4 Hz)，7.22(2H，d，J=8.4 Hz)，6.94(2H，d，J=8.4 Hz)，6.76(2H，d，J=8.4 Hz)可歸屬于二組 AA′BB′偶合的苯環質子信號，顯示化合物中含有兩個對位取代的苯環；δH4.93(2H，s)、4.35(2H，s)顯示有兩個亞甲基信號，HMBC顯示，δH4.93與δC127.6、130.0、158.3有遠程相關，δH4.35與δC129.5、65.1有遠程相關，說明兩個亞甲基信號連接在苯環上，推斷化合物為4，4′-二羥基二芐基醚的衍生物[21]。1H-NMR數據δH3.43(2H，q)、1.12(3H，t)及1H-1H COSY數據顯示化合物中含有-OCH2CH3基團；HMBC顯示δH3.43(2H，q)與71.7有遠程相關。故確定-OCH2CH3連在芐基上。因此，化合物7鑒定為4-乙氧甲基苯基-4′-羥基芐醚[24]，化合物7的主要HMBC及1H-1HCOSY關系如圖1所示，具體碳氫信號歸屬見表1。

圖1 化合物7的主要HMBC及1H-1H COSY關系

表1 化合物7的1H-NMR(400 MHz)和13C-NMR(100 MHz)數據(DMSO-d6)

4 結論

文獻報道，干天麻中主要含有巴利森苷類、天麻素、對羥基苯甲醇的多聚體等化合物，本研究對鮮紅天麻70%乙醇水的大孔樹脂部位進行了分離，得到的主要是分子量較小的苯基取代衍生物，可為紅天麻炮制前后化學成分變化研究提供一定的物質基礎。

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