石楠葉中熊果酸的索氏提取工藝優化

廖嬋娟，彭國平

(1.湖南農業大學生物科學技術學院，長沙 410128；2.邵陽職業技術學院，邵陽 422000）

0 引言

石楠（Photinia serrulata Landl）為薔薇科（Rosaceae）蘋果亞科（Maloideae）植物，世界約有60種現分布于東亞、東南亞和北美；其中我國有40余種，分布于我國秦嶺及淮河以南各地。石楠葉為華東地區較常用的藥材，藥用價值較高。據《本草綱目》記載，它可治頭風，有補腎壯陽，治療關節疼痛的功效。現代醫學表明，臨床上用石楠葉治療腰背酸痛、風濕痹痛、足膝無力和蕁麻疹等，效果較好。

熊果酸（Ursolic acid ），又名烏蘇酸、烏索酸、α-香樹脂醇，是一種弱酸性五環三萜類化合物。熊果酸純品為白色針狀結晶（乙醇中結晶），味苦，其分子式為C30 H48O3，分子量為：456.68。熔點285～287 ℃，不溶于水和石油醚，易溶于二氧六環、吡啶、乙醇和甲醇。熊果酸具有廣泛的生物學效應，尤其是其保肝、抗炎、抑菌、抗腫瘤、增強免疫功能、降血糖血脂等作用日益引起人們的重視。

本論文探索以石楠葉為原料，以醇提取法提取熊果酸的工藝條件，優化工藝參數，為以后的中試和工業化生產提供了參考。

1 材料與儀器

1.1 材料

石楠葉、無水乙醇、稥草醛、冰醋酸、高氯酸、熊果酸標準品。

1.2 儀器

索氏提取器、電子分析天平、中藥粉碎機、紫外分光光度計儀。

2 方法

2.1 原料預處理

石楠葉曬干，用小型中藥粉碎機粉碎后過40目篩，備用。

2.2 提取工藝流程

將過篩后的石楠葉粉末4.00 g，置于索氏提取器套袋內，然后向索氏提取器燒瓶中加入一定體積，濃度為40%～100%的乙醇溶液，提取30～150 min；提取完抽濾，用紫外分光光度計分析濾液中熊果酸的含量，減壓回收濾液中的有機溶劑。

2.3 單因素試驗

影響提取的主要因素有：乙醇濃度、物料比、提取溫度和提取時間，分別對以上因素進行提取工藝的單因素試驗。

2.4 正交設計試驗

根據單因素試驗結果，選擇影響石楠葉提取物提取效果因素中有意義的水平進行正交設計試驗，經統計分析確定其最佳提取工藝條件。

2.5 分光光度法測熊果酸含量

方法：用5%稥草醛-冰醋酸及高氯酸在60℃熱水浴中加熱15 min顯色，在波長548 nm處用分光光度計測定枇杷葉中的熊果酸含量。結果：回歸方程為Y=0.0180X+0.0979，相關系數r=0.9986。

2.6 單因素實驗

2.6.1 乙醇濃度對熊果酸提取率的影響

采用提取溫度為80℃，提取時間為90 min，料液比為1∶20的條件下，以石楠葉熊果酸提取物得率為指標確定乙醇的最佳提取濃度，通過實驗數據分析，隨著乙醇濃度增大，熊果酸的提取率逐漸增大，當乙醇濃度為80%時，熊果酸的提取率最高。隨著乙醇濃度的增加，熊果酸的提取率有所下降，因此，本實驗采用的乙醇濃度為80%。

圖1 乙醇濃度與熊果酸提取率的關系

2.6.2 物料比對熊果酸提取得率的影響

采用乙醇濃度為80%，提取溫度為80℃，提取時間為90 min，考察不同物料比對熊果酸提取得率的影響，通過實驗數據分析，隨著物料比中溶劑用量的增加，熊果酸的提取得率增加，但當物料比達到1∶20（g：mL），再增加溶劑用量，熊果酸的提取率增加趨勢緩慢，因此，本實驗采用的物料比為1∶20。

圖2 液固比與熊果酸提取率的關系

2.6.3 提取溫度對熊果酸提取率的影響

采用乙醇濃度為80%，提取時間為90 min，物料比為1∶20，考察不同提取溫度對熊果酸提取得率的影響，通過實驗數據分析，隨著提取溫度增大，熊果酸的提取率逐漸增加，當提取溫度為90℃的時候熊果酸的提取率最大，因此，本實驗采用提取溫度為90℃。

圖3 溫度與熊果酸提取率的關系

2.6.4 提取時間對熊果酸提取得率的影響

采用乙醇濃度為80%，提取溫度為80℃，物料比為1∶20，考察不同提取時間對熊果酸提取得率的影響，通過實驗數據分析，熊果酸提取率隨時間的增加而升高，但當時間超過2 h后，熊果酸提取率增加趨勢平緩，考慮到成本以及效益，因此，本實驗采用提取時間為120 min。

圖4 提取時間與熊果酸提取率的關系

2.7 熊果酸醇提取工藝條件的優化

在單因素實驗的基礎上，為綜合考察乙醇濃度（A）、物料比（B）、提取溫度（C）、提取時間（D）對熊果酸提取率的影響，采用四因素三水平正交表L9（34）作正交實驗，試驗設計和結果分別見表1和表2。

表1 熊果酸醇提取法提取工藝優化L9(34)正交試驗因素水平表

表2 熊果酸醇提取法提取工藝優化L9(34)正交試驗設計及結果

表中的實驗數據和極差分析表明，就熊果酸的提取率而言，影響因素作用大小依次為B＞C＞A＞D，即物料比＞提取溫度＞乙醇濃度＞提取時間。熊果酸提取率最佳工藝條件為：A2B3C3D1即提取劑選用乙醇濃度為80%，物料比為1:25（g：mL），提取溫度為90℃，提取時間為90 min。

2.8 結論

熊果酸醇提取法在單因素試驗的基礎上，對乙醇濃度、物料比、提取溫度和提取時間四因素進行正交試驗以確定最佳提取工藝條件。結果表明，其最佳提取工藝參數為：乙醇濃度為80%，物料比為1:25（g：mL），提取溫度為90℃，提取時間為90 min。

參考文獻

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