PI3K/mTOR抑制劑NVP—BEZ235對乳腺癌小鼠移植瘤生長的抑制作用

王歡歡 丁米娜 姜春如 陳麗艷

摘 要：乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一。NVP-BEZ235是PI3K和mTOR雙重靶向抑制劑，具有抑制多種腫瘤惡性進展的作用[1]，但機制仍不明確。因此，我們利用乳腺癌MCF-7細胞建立小鼠移植瘤模型，觀察不同濃度NVP-BEZ235對移植瘤生長的影響，并初步探討其機制。

關鍵詞：乳腺癌；小鼠；移植瘤

1 材料

裸鼠30只購自北京維通利華實驗動物技術有限公司，NVP-BEZ235購自Selleck公司，MCF-7由延邊大學腫瘤研究中心提供。

2 方法

2.1 MCF-7乳腺癌移植瘤模型的建立與分組給藥

培養乳腺癌MCF-7細胞，消化離心，制備細胞懸液，用PBS調整細胞密度為5×10.6/mL，每只裸鼠乳腺脂肪墊下注射0.2mL，建立裸鼠乳腺癌移植瘤模型。30只實驗裸鼠隨機分為3組，（1）對照組：生理鹽水0.1mL，灌胃；（2）NVP-BEZ235高劑量組：60mg/kg/day，灌胃，（3）NVP-BEZ235低劑量組：30mg/kg/day，灌胃。各組均每天一次。

2.2 觀察藥物對移植瘤生長的影響

給藥期間，每2天用游標卡尺測量裸鼠腫瘤的最長徑（a）和橫徑（b），計算腫瘤體積V=a×b.2，繪制腫瘤生長曲線。

2.3 蛋白免疫印跡檢測Ki-67、LC3B的表達

腫瘤組織勻漿提取蛋白，BCA法測定蛋白含量，SDS-PAGE電泳分離，轉膜，牛奶封閉，一抗4℃過夜，二抗孵育2h，ECL化學發光，凝膠呈像儀檢測結果，使用Image J軟件進行半定量分析。

2.4 統計方法

應用SPSS軟件進行數據處理，以P<0.05表示差異具有統計學意義。

3 結果

3.1 NVP-BEZ235抑制MCF-7乳腺癌裸鼠移植瘤的生長

接種后第4天各組均見腫瘤生長，成瘤率100%，移植瘤生長基本相同。隨著時間的延長，腫瘤體積逐漸增大，20-28d對照組生長明顯快于給藥組（P均<0.05），高劑量組腫瘤生長最慢，各組腫瘤生長情況見圖1。結果表明NVP-BEZ235對裸鼠體內的腫瘤有明顯抑制作用。

3.2 NVP-BEZ235對裸鼠移植瘤中Ki-67、LC3B的影響

蛋白免疫印跡結果顯示，NVP-BEZ235給藥組腫瘤組織中增殖相關蛋白Ki-67、LC3B的表達明顯低于對照組，差異具有統計學意義（P<0.05，P<0.05），這表明NVP-BEZ235抑制腫瘤組織增殖可能與誘導細胞自噬有關。見圖2。

4 討論

目前研究表明，自噬與腫瘤發生發展密切相關。誘導腫瘤細胞發生自噬是化療藥物抑制腫瘤細胞增殖的重要機制之一。我們的前期研究表明，NVP-BEZ235體外應用對乳腺癌細胞具有抑制增殖、誘導細胞凋亡及自噬的效應[2]。因此本論文進一步探討了其對MCF-7乳腺癌小鼠移植瘤生長的抑制作用。本研究首先構建了MCF-7乳腺癌裸鼠移植瘤模型，并檢測了NVP-BEZ235對移植瘤的生長抑制作用。研究結果顯示，NVP-BEZ235對MCF-7乳腺癌裸鼠移植瘤具有良好的生長抑制作用，并且能夠下調移植瘤組織中Ki-67和LC3B的表達。LC3B是自噬重要的標志性蛋白，因此研究結果提示，NVP-BEZ235可誘導乳腺癌細胞發生自噬。

綜上所述，NVP-BEZ235能夠有效抑制MCF-7乳腺癌裸鼠移植瘤生長可能與其抑制腫瘤細胞增殖、誘導細胞自噬有關，具體作用機制有待于進一步深入探討。

參考文獻：

[1] Li Y， Zhao H， Wang Y， et al. Isoliquiritigenin induces growth inhibition and apoptosis through downregulating arachidonic acid metabolic network and the deactivation of PI3K/Akt in human breast cancer[J]. Toxicol Appl Pharmacol， 2013，272：37-48.

[2]王鶴儒，于洋，陳麗艷.PI3K/mTOR抑制劑NVP-BEZ235抑制人乳腺癌細胞增殖及促進細胞自噬[J].臨床與實驗病理學雜志，2016，36（8）：1139-1141.