安徽大別山區金寨產靈芝子實體質量分析

徐茂紅 趙克霞 許應生 薛曉輝 屠后為 陳莉莉 趙學群 吳茂林

摘要 [目的]分析安徽大別山區金寨人工種植靈芝的質量。[方法]依據2015版《中國藥典》，采用薄層色譜法（TLC法）鑒別靈芝子實體，采用灰分測定法、浸出物測定法分別測定其灰分、浸出物含量，采用紫外分光光度法（UV法）測定其中多糖、三萜及甾醇含量。[結果]靈芝子實體供試品與對照品在色譜相應位置顯現相同顏色熒光斑點；灰分和浸出物含量分別小于3.2%、大于3.0%；多糖、三萜含量分別大于0.90%、0.50%。[結論]安徽大別山區金寨人工種植靈芝質量符合2015版《中國藥典》要求，可用于開發保健品或疾病輔助治療藥物。

關鍵詞 靈芝子實體；質量分析；安徽大別山區金寨

中圖分類號 S567.3+1文獻標識碼 A文章編號 0517-6611（2018）15-0160-03

Abstract [Objective]The research aimed to study the quality of cultivated Ganoderma lucidum in Anhui Jinzhai Dabie Mountain area.[Method ]According to the Chinese Pharmacopoeia 2015， using TLC method to determine Ganoderma lucidum fruit body， the contents of ash and extract were measured by ash determination and extract determination， and the contents of Ganoderma lucidum polysaccharides and triterpenes were measured by UV method. [Result] Ganoderma lucidum fruit body for the test product and the reference substance in the corresponding position of the chromatogram showed the same color fluorescent spots.The contents of ash and extract were less than 3.2% and greater than 3.0%， andpolysaccharides and triterpenes were greater than 0.90% and 0.50%. [Conclusion]The quality of cultivated Ganoderma lucidum in Anhui Jinzhai Dabie Mountain area was satisfied with the Chinese Pharmacopoeia 2015， and it can be uesd to health care products and adjuvant treatments.

Key words Ganoderma lucidum fruit body；Quality analysis；Anhui Jinzhai Dabie Mountain area

大別山區是目前國家11個集中連片特殊困難地區之一[1]，位于大別山區的金寨縣地處安徽省西部（115°22′19″～116°11′52″E、31°06′41″～31°48′51″N），大別山主脈北坡，屬亞熱帶濕潤性季風氣候，該地氣候條件較適合靈芝的人工種植。為促進地方經濟發展，當地政府積極給予政策和資金支持，引導企業和農戶大力種植靈芝。目前，該地靈芝產品的種植、加工、研發及銷售已成為當地經濟發展的重要支柱之一[2]。

靈芝（Ganoderma lucidum）是擔子菌綱多孔菌科靈芝屬真菌，《中國藥典》2015年版一部中將赤芝[Ganoderma lucidum（Leyss.ex Fr.）Karst.]或紫芝（Ganoderma sinense Zhao，Xu et Zhang）的干燥子實體作為藥材來源。長期以來我國傳統醫學一直視其為滋補強壯、固本扶正的名貴中藥。現代研究表明，靈芝多糖、三萜類等主要活性成分具有抗腫瘤[3]、抗氧化[4-5]、調節免疫功能[6]等生物活性。筆者對安徽大別山區金寨產靈芝子實體粗粉進行鑒別，并對其總灰分、浸出物、多糖和三萜含量等進行測定和研究，以期為靈芝產品的開發利用提供依據。

1 材料與方法

1.1 儀器

Xiangyi L-550離心機（長沙湘儀儀器有限公司）；AB135-S分析天平（瑞士梅特勒公司）；ZMT型數顯馬弗爐（長沙市秋龍儀器設備有限公司）。

1.2 材料

靈芝子實體，安徽利民生物科技股份有限公司提供；葡萄糖標準品（上海安譜實驗科技股份有限公司）；甘露糖標準品（德國Dr.Ehrenslorfer公司）；木糖標準品（德國Dr.Ehrenslorfer公司）；半乳糖標準品（德國Dr.Ehrenslorfer公司）；三氟乙酸（EU公司）。

1.3 方法

1.3.1 灰分測定法。測定用的供試品粉碎，通過二號篩，混均勻后，取供試品2～3 g（如測定酸不溶性灰分，可取供試品 3～5 g），置熾灼至恒重的坩堝中，稱定重量（準確至0.01 g），緩緩熾熱，注意避免燃燒，至完全炭化時，逐漸升高溫度至500～600 ℃，使完全灰化并至恒重。根據殘重，計算供試品中灰分含量（%）。

1.3.2 浸出物測定法。取供試品2～4 g，精密稱定，置100～250 mL的錐形瓶中，加水50～100 mL，密塞，稱定重量，靜置1 h后，連接回流冷凝管，加熱至沸騰，并保持微沸1 h。放冷后，取下錐形瓶，密塞，再稱定重量，用水補足減失的重量，搖勻，用干燥濾器濾過，精密量取濾液25 mL，置于已干燥至恒重的蒸發皿中，在水浴上蒸干后，于105 ℃干燥 3 h，置干燥器中冷卻30 min，迅速精密稱定重量。除另有規定外，以干燥品計算供試品中水溶性浸出物的含量（%）。

1.3.3 靈芝子實體多糖溶液制備。

1.3.3.1 對照品溶液制備。取無水葡萄糖對照品適量，精密稱定，加水制成0.12 mg/mL的溶液，即得。

1.3.3.2 標準曲線繪制。精密量取“1.3.3.1”中對照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mL，各加水至2.0 mL，迅速精密加入硫酸蔥酮溶液（精密稱取蔥酮0.1 g，加硫酸100 mL使溶解，搖勻）6 mL，立即搖勻，放置15 min后，立即置冰浴中冷卻15 min，取出，以相應的試劑為空白，用紫外-可見分光光度法在625 nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標、濃度為橫坐標繪制標準曲線。

1.3.3.3 供試品溶液的制備。取本品粉末約2 g，精密稱定，置圓底燒瓶中，加水60 mL靜置1 h，加熱固流4 h，趁熱濾過，用少量熱水洗滌濾器和濾渣，將濾渣及濾紙置燒瓶中，加水60 mL，加熱回流3 h，趁熱濾過，合并濾液，置水浴上蒸干，殘渣用水5 mL溶解，邊攪拌邊緩慢滴加乙醇75 mL，搖勻，在4 ℃放置12 h，離心，棄去上清液，沉淀物用熱水溶解并轉移至50 mL容量瓶中，放冷，加水至刻度，搖勻，取溶液適量，離心，精密量取上清液3 mL，置25 mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得。

1.3.4 靈芝子實體三萜溶液制備。

1.3.4.1 對照品溶液制備。取齊墩果酸對照品適量，精密稱定，加甲醇制成0.2 mg/mL的溶液，即得。

1.3.4.2 標準曲線繪制。精密量取“1.3.4.1”中對照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mL，分別置15 mL具塞試管中，揮干，放冷，精密加入新配制的香草醛冰醋酸溶液（精密稱取香草醛0.5 g，加冰醋酸使溶解成10 mL，即得）0.2 mL、高氯酸0.8 mL，搖勻，在70 ℃水浴中加熱15 min，立即置冰浴中冷卻5 min，取出，精密加入乙酸乙酯4 mL，搖勻，以相應試劑為空白，按照紫外-可見分光光度法在546 nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標、濃度為橫坐標繪制標準曲線。

1.3.4.3 供試品溶液的制備。取本品粉末約2 g，精密稱定，置圓底燒瓶中，加水60 mL靜置1 h，加熱固流4 h，趁熱濾過，用少量熱水洗滌濾器和濾渣，將濾渣及濾紙置燒瓶中，加水60 mL，加熱回流3 h，趁熱濾過，合并濾液，置水浴上蒸干，殘渣用水5 mL溶解，邊攪拌邊緩慢滴加乙醇75 mL，搖勻，在4 ℃放置12 h，離心，棄去上清液，沉淀物用熱水溶解并轉移至50 mL容量瓶中，放冷，加水至刻度，搖勻，取溶液適量，離心，精密量取上清液3 mL，置25 mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得。

1.3.5 樣品含量測定。分別精密稱取6份靈芝子實體粉末，按照“1.3.1”和“1.3.2”方法，計算總灰分和浸出物含量。按照“1.3.3.3”和“1.3.4.3”方法制備供試品溶液，分別計算多糖和三萜含量。

2 結果與分析

2.1 靈芝子實體的鑒別

按照2015年版《中國藥典》第一部靈芝【鑒別】項（2）法進行，結果見圖1。結果表明，供試品薄層色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，比移值（Rf）相同，且出現相同顏色的熒光斑點。

2.2 靈芝子實體的總灰分含量

取供試品能通過二號篩的粉末2～3 g，精密稱定，平行6份，按照2015年版《中國藥典》第四部【通則2302】法進行。根據殘渣重量，計算供試品中總灰分的含量，檢測結果見表1。檢測結果顯示，重復性較好，且符合2015年版《中國藥典》不超過3.2%的限量要求。

2.3 靈芝子實體的浸出物含量

取供試品粉末2～4 g，精密稱定，平行6份，按照2015年版《中國藥典》第四部【通則2201浸出物測定法】項熱浸法進行。根據浸出物重量，計算供試品中浸出物的含量，檢測結果見表2。檢測結果顯示，重復性較好，且符合2015年版《中國藥典》不得少于3.0%的要求。

2.4 靈芝子實體的多糖含量

精密量取供試品溶液2 mL，置10 mL具塞試管中，按照“1.3.3.2”標準曲線制備項下的方法，自“迅速精密加入硫酸蔥酮溶液6 mL”起，同法操作，測定吸光度為0.027 2。根據標準曲線（圖2），得出回歸方程y=0.573 8x+0.014 1，再根據回歸方程計算得出供試品溶液中無水葡萄糖的含量為2.28%，滿足2015版《中國藥典》不得少于0.90%的限量要求。

2.5 靈芝子實體的三萜含量

精密量取供試品溶液0.2 mL，置15 mL具塞試管中，按照“1.3.4.2”標準曲線制備項下的方法，自“揮干”起，同法操作，測定吸光度為0.013 0。根據標準曲線（圖3），得出回歸方程y=1.573 7x-0.001 1，再根據回歸方程計算得出供試品溶液中齊墩果酸的含量為0.89%，滿足2015版《中國藥典》不得少于0.50%的限量要求。

3 結論與討論

已有研究表明，靈芝及其提取物抗氧化、抗腫瘤、調節免疫功能等藥理作用與其靈芝多糖、三萜含量密切相關[7-8]。該研究采用蒸餾水、乙醇溶液浸提，應用UV法測定靈芝多糖、三萜含量，結果表明，靈芝子實體供試品與對照品在色譜相應位置顯現相同顏色熒光斑點；灰分和浸出物含量分別小于3.2%、大于3.0%；多糖、三萜含量分別大于0.90%、0.50%。可見，安徽大別山區金寨人工種植靈芝質量符合2015版《中國藥典》限量要求，可為靈芝系列產品開發提供試驗依據。

參考文獻

[1] 中共中央，國務院.中國農村扶貧開發綱要（2011-2020年）[A].2011.

[2] 六安市人民政府.2016-2020年六安市國民經濟和社會發展第十三個五年規劃綱要[A].2016.

[3] 閆征，王宏旭，劉莉瑩，等.靈芝三萜類化合物的體外抗腫瘤活性研究[J].國際檢驗醫學雜志，2017，38（5）：633-634，637.

[4] 陳杰，董揚，魯吉珂，等.3種不同產地靈芝子實體粗多糖體外抗氧化活性比較研究[J].食品工業科技，2016，37（21）：100-104.

[5] 陳杰.不同產地靈芝子實體化學成分及抗氧化活性研究[D].天津：天津科技大學，2016.

[6] WANG Y Y， KHOO K H， CHEN S T， et al.Studies on the immuno-modulating and antitumor activities of Ganoderma lucidum（Reishi）polysaccharides：Functional and proteomic analyses of a fucose-containing glycoprotein fraction responsible for the activities[J].Bioorg Med Chem，2002，10：1057-1062.

[7] LIU J，SHIMIZU K，KONISHI F，et al.Anti-androgenic activities of the triterpenoids fraction of Ganoderma lucidum[J].Food chemistry，2007，100：1691-1696.

[8] ZHOU X W， LI L Q， YIN Y Z， et al.Identification of medicinal Ganoderma species based on PCR with specific primers and PCR-RFLP[J].Planta medica，2008，74（2）：197-200.