一種抗豬流行性腹瀉的中藥復方制劑的亞慢性毒性試驗

洪偉鳴 徐懿 宋亮 陳海峰 吉光杰 左偉勇

摘要 [目的]為了觀察一種抗豬流行性腹瀉病的中藥復方制劑的亞慢性毒性。[方法]根據《獸藥試驗技術規范匯編》中的亞慢性毒性試驗技術要求；選用小白鼠進行了亞慢性毒性研究。[結果]試驗組與空白對照組實驗數據相比差異不顯著（P>0.05），表明該復方制劑對小鼠血常規檢查和血液生化指標檢測沒有造成任何不良影響。[結論]臨床使用該復方制劑進行治療安全可靠。

關鍵詞 豬流行性腹瀉；中藥復方制劑；小鼠；亞慢性毒性

中圖分類號 S858.28文獻標識碼 A文章編號 0517-6611（2018）31-0074-03

Key words [Objective] To study subchronic toxicity of one traditional Chinese medicine compound preparation against porcine epidemic diarrhea. [Method] According to the technical requirements of subchronic toxicity test in the Compilation of Technical Specifications for Veterinary Drug Testing， the subchronic toxicity of mice was studied. [Result] There was no significant difference（P<0.05） between data of the experimental group and the blank control group. The results showed that the compound preparation had no adverse effect on blood routine examination and blood biochemical index test in mice. [Conclusion] The traditional Chinese medicine compound preparation can be safely used for clinical application.

Key words Porcine epidemic diarrhea；Traditional Chinese medicine compound preparation；Mouse；Subchronic toxicity test

豬流行性腹瀉（PED）是由豬流行性腹瀉病毒（PEDV）引起的急性、接觸性、高度傳染性的一種消化道疾病，是危害養豬產業最重要的傳染病之一。該病臨床主要癥狀表現為急性腸炎以及嘔吐、水樣腹瀉和脫水。PED的波及范圍甚廣，在全球均有病例報道。并且PED發病率高，各種年齡的豬都能感染發病，7日齡以下仔豬感染死亡率可高達80%～100%[1]。PED的頻發給我國養豬產業造成了嚴重的經濟損失[2]。

由于PEDV具有高度的變異性，給臨床治療帶來了很多困難。目前市面上預防PED主要是依靠PED弱毒苗和滅活苗[3]。治療PEDV的藥物以西藥為主，雖可緩解病情和降低死亡率，但極易引起致病病毒變異而導致產生耐藥性，并存在動物體內藥物殘留等隱患[4]。因此，開展抗PEDV藥物的研發對控制豬流行性腹瀉病、促進養豬產業的健康發展有著十分重要的意義。隨著市場上人們對綠色、安全畜產品的需求度越來越高，中藥作為化學藥物的替代品用于防治畜禽疾病愈發獲得了大家的肯定。該研究所用藥物為江蘇省獸用生物制藥高技術研究重點實驗室研制的一種用于防治豬流行性腹瀉病的純中藥復方制劑，為全面評價其安全性和為臨床安全科學用藥提供依據，根據農業部《獸藥試驗技術規范匯編》的技術要求[5]，進行了亞慢性毒性試驗研究。同時，也為后續深入探討該復方制劑在臨床上的推廣應用研究提供科學依據和支撐。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

清潔級昆明系小白鼠80只，雌雄各半，體重20±2g，購自江蘇省揚州大學比較醫學中心[動物生產許可證號：SYXK（蘇）2015000003]。

1.2 試驗藥物

抗豬流行性腹瀉的中藥復方制劑由黃連、白頭翁等10味中藥精制而成，濃縮至1 mL藥液相當于1 g藥材。由江蘇省獸用生物制藥高技術研究重點實驗室自行研制。

1.3 儀器

全自動血液細胞分析儀（BC-5380，深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司）；全自動生化分析儀（BS-420，深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司）；光學顯微鏡（BX53，日本OLYMPUS公司）；電子天平（MS204S，梅特勒托利多公司）。

1.4 動物分組及處理

將小白鼠隨機分成四組，即低劑量組、中劑量組、高劑量組和空白對照組，每組20只，雌雄各半，進行適應性飼養后開展試驗。根據預試驗的劑量，低、中、高3個劑量組分別按0.01、0.02、0.04 mL/g 3個不同劑量給藥，空白對照組按0.04 mL/g給予生理鹽水。藥物及生理鹽水均事先拌于飼料中并烘干制作成型，任由實驗動物采食，連續給藥28 d。每天仔細觀察小鼠的活動、采食、飲水、發病和死亡等情況，對小鼠進行空腹稱重，計算增重，給藥結束后對存活小鼠進行血常規和血液生化學指標檢測，隨后統一剖殺觀察主要臟器是否存在病變或其他異常[5]。

1.5 檢測項目

1.5.1 血常規檢查 摘除小鼠眼球進行采血，利用全自動血液細胞分析儀測定紅細胞數、白細胞數、血小板數、血紅蛋白濃度、紅細胞壓積、血小板壓積和淋巴細胞數。

1.5.2 血液生化學檢測 采血分離出血清后利用全自動生化分析儀檢測谷丙轉氨酶、谷草轉氨酶、堿性磷酸酶、總蛋白、白蛋白、白蛋白/球蛋白、尿素氮、肌酐和血糖含量。

1.5.3 臟器系數及組織病理學檢查 對存活小鼠進行統一剖檢，測定心、肝、脾、肺、腎等臟器的絕對重量及臟器系數（臟器系數=臟器濕重/體重×100），同時選擇性的對肝、腎、脾、胃腸等器官進行目檢，記錄異常或臟器病變情況。

1.6 數據統計分析

試驗數據以平均數±標準差表示，采用SPSS13.0軟件進行統計分析，組間比較采用單因素方差分析及t檢驗，檢驗水準α=0.05。

2 結果與分析

2.1 臨床表現

整個試驗過程中3個給藥組與空白對照組的小鼠均未出現死亡，采食和飲水均正常，活動自如，呈現健康狀態。

2.2 體重變化情況

如表1所示，從第7天起至28天空白對照組小鼠體重均略低于3個試驗組，但整個試驗周期內各試驗組與空白對照組相比小鼠體重差異均不顯著（P>005），各試驗組間體重比較也無顯著差異（P>0.05），由此可說明該復方制劑對小鼠的體重影響甚微。

2.3 血常規檢查情況

血常規檢查結果顯示如表2所示，空白對照組白細胞數略高于3個試驗組，但統計結果分析差異不顯著（P>0.05）。其余各個檢測指標低、中、高3個劑量組與空白對照組相比差異均不顯著（P>0.05）。由此可說明該復方制劑對小鼠血常規檢查的各項指標未帶來不良影響。

2.4 血液生化學檢測情況

血液生化學檢測結果如表3所示，結果顯示空白對照組的總蛋白與血糖含量略低于3個試驗組，但結果統計分析差異不顯著（P>0.05）。其余各個檢測指標各試驗組測定結果與空白對照組測定結果相比差異均不顯著（P>0.05），由此可說明該復方制劑對小鼠血液生化學檢測指標未造成不良影響。

2.5 臟器系數

試驗結束時統一剖殺小鼠測定心臟、肝臟、腎臟等主要臟器的絕對重量，測出臟器系數，結果見表4。從表中結果可見，3個試驗組與空白對照組的臟器系數相比較差異均不顯著（P>0.05）。各組的臟器系數均在正常值范圍內，據此可說明該復方制劑對小鼠的主要臟器系數未造成不良影響。

2.6 組織病理學檢查情況

隨機挑選各試驗組10只小鼠進行統一剖檢，仔細觀察該復方制劑有無對小鼠內臟器官的造成不良影響。觀察后未見肝臟、腎臟、脾臟、胃和腸等器官組織的形態、顏色、質地出現異常，組織病理學檢查亦未見臟器發生病理異常變化。由此可說明該復方制劑未對小鼠的內臟器官造成不良影響。

3 討論

亞慢性毒性試驗是評價新獸藥一般毒性的重要內容，對后續臨床安全合理用藥甚為關鍵。試驗研究結果表明，該復方制劑分別按0.01、0.02、0.04 mL/g等3個不同劑量進行連續給藥28 d，研究結果表明3個試驗組小鼠在整個試驗周期內均生長正常，活動自如，體重變化、血常規檢查、血液生化學檢測、臟器系數、組織病理學檢查與空白對照組相比均無顯著差異（P>0.05）。有研究報道表明如若動物的肝功能或腎功能受到損傷，血液中的谷丙轉氨酶（ALT）、谷草轉氨酶（AST）或肌酐（CR）會顯著升高[6-7]，而上述3個指標在該試驗研究中均處于正常值范圍內。

故可認為按臨床推薦劑量使用該復方制劑治療豬流行性腹瀉病是安全可靠的，同時也為后續將該制劑開發為新獸藥奠定了扎實的基礎。

參考文獻

[1] 高君愷，劉浩飛，楊倩.豬流行性腹瀉病毒的研究進展[J].南京農業大學學報，2014，37（1）：1-5.

[2] CHEN J F，WANG C B，SHI H Y，et al.Molecular epidemiology of porcine epidemic diarrhea virus in China[J].Arch Virol，2010，155（9）：1471-1476.

[3] 張冰，關增春，于曉娜，等.豬流行性腹瀉預防及診斷研究進展[J].湖北畜牧獸醫，2014，35（9）：84-86.

[4] 李彬，劉浩飛，孫冰，等.豬流行性腹瀉病毒TaqMan熒光定量PCR方法的建立與應用[J].江蘇農業學報，2014，30（1）：125-129.

[5] 農業部獸藥審評委員會辦公室.獸藥試驗技術規范匯編[S].北京：農業部獸藥審評委員會辦公室，2001.

[6] 洪偉鳴，左偉勇，宋亮，等.雞支康口服液的亞慢性毒性試驗研究[J].中國畜牧獸醫，2013，40（9）：140-143.

[7] 王越，沈連忠，李波.臨床前研究中肝損傷的臨床病理指標的選擇及意義[J].中國藥事，2009，23（8）：813-816.

[8] 任麗，蔣素華，劉紅，等.血肌酐水平、MDRD-GFR、CG-GFR與腎小管間質病變相關性研究[J].檢驗醫學與臨床，2010，7（22）：2436-2438.