馬鈴薯及土壤中霜脲氰殘留量的高效液相色譜快速分析方法

張鋒鋒 陳翔 牛艷 王曉菁

摘要[目的]建立高效液相色譜方法快速測定馬鈴薯莖葉、塊莖及其土壤中霜脲氰殘留量的方法。[方法]樣品經(jīng)乙腈提取，NH2固相萃取小柱凈化后，以乙腈-水為流動相，使用C18色譜柱，通過Waters 2695高效液相色譜-紫外檢測器，在254 nm檢測波長下對霜脲氰進(jìn)行分析檢測，面積外標(biāo)法定量。[結(jié)果]在0.1、0.5、2.0 mg/kg 3個不同添加濃度水平下，馬鈴薯莖葉中平均回收率為78.0%～1044%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.7%～3.4%；馬鈴薯塊莖中平均回收率為82.9%～94.7%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.1%～2.3%；土壤中平均回收率為81.6%～91.8%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.3%～5.4%。霜脲氰在濃度為0.05～2.00 mg/L時線性關(guān)系良好（r=0.999 8），最小檢出量為0.06 ng，在馬鈴薯莖葉、塊莖和土壤中的最低檢測濃度均為10 μg/kg。[結(jié)論]該方法簡便、快捷、成本低、精密度好、準(zhǔn)確率高，適用于馬鈴薯及其土壤中霜脲氰的大批量分析檢測，是一種較為實(shí)用的檢測方法。

關(guān)鍵詞馬鈴薯；土壤；霜脲氰；高效液相色譜

中圖分類號S481+.8文獻(xiàn)標(biāo)識碼A文章編號0517-6611（2018）05-0193-03

Abstract[Objective] A rapid determination method was established for the residue of cymoxanil in potato stem leaf， tuber and soil by HPLC. [Method] The samples were extracted with acetonitrile and purified by NH2 solidphase extraction column. Analysis and determination were conducted by Waters 2695 HPLC with C18 column and UV detector at 254 nm， and CH3CNH2O was utilized as the mobile phase. The residues were quantified by area of external standard method. [Result] When the concentration levels were added at different levels of 0.1， 05 and 2.0 mg/kg， the average recoveries of residues were 78.0%-104.4% with RSD of 2.7%-3.4% in potato stem leaves， and 829%-94.7% with RSD of 1.1%-2.3% in potato tubers， and 81.6%-91.8% with RSD of 3.3%-5.4% in soil. The linear relationship was obtained in the concentration that range from 0.05 to 2.00 mg/L for cymoxanil （r=0.999 8）. The minimum detectable amount of cymoxanil was 0.06 ng. The minimum detectable concentrations of cymoxanil was 10 μg/kg in potato stem leaf， tuber and soil. [Conclusion] This method has advantages of simple， rapid， low cost， good precision and high accuracy， which is a practical detection method for the large batch analysis of cymoxanil in potato and soil.

Key wordsPotato；Soil；Cymoxanil；High performance liquid chromatography

霜脲氰（Cymoxanil），化學(xué)名稱為1-（2-氰基-2-甲氧基亞胺基）-3-乙基脲，分子式為C7H10N4O3，是一種具有內(nèi)吸作用的脲類高效殺菌劑，常與其他保護(hù)性殺菌劑混用以提高殘留活性，對番茄、黃瓜、葡萄等作物的霜霉病和馬鈴薯晚疫病有明顯的防治效果[1-4]。目前，霜脲氰單殘留分析檢測方法多以液相色譜法為主[5-9]，但大多前處理復(fù)雜，樣品凈化條件要求苛刻。筆者采用高效液相色譜法，通過簡化樣品提取、凈化及上機(jī)條件，建立了馬鈴薯莖葉、塊莖及其土壤中霜脲氰快速分析方法，旨在為馬鈴薯及其土壤中霜脲氰的大批量分析檢測提供參考。

1材料與方法

1.1材料

Waters 2695高效液相色譜儀及2487紫外吸收檢測器（美國Waters公司）；電子天平（PL202-L和XS205各1臺，瑞士METTLER TOLEDO公司）；恒溫振蕩器（CHA-S，常州國華電器有限公司）；低速臺式離心機(jī)（TDL-40，上海安亭科學(xué)儀器廠）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（R-215，瑞士BUCHI公司）；氮吹儀（N-EVAP-12，美國Organomation公司）；純水機(jī)（美國 Millipore公司）；NH2固相萃取小柱（500 mg/6mL，美國Agilent公司）。

甲醇、乙腈、二氯甲烷為色譜純（美國Fisher公司）；氯化鈉（分析純，天津市光復(fù)科技發(fā)展有限公司）經(jīng)140 ℃烘烤6 h后，置于干燥器中保存；霜脲氰標(biāo)準(zhǔn)品（0.1 g，純度995%，德國Dr.Ehrenstorfer公司）；試驗(yàn)用水為18.2 MΩ·cm的高純水。

1.2方法

1.2.1標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制。

稱取0.010 05 g霜脲氰標(biāo)準(zhǔn)品，用10 mL甲醇配制成1 000 mg/L標(biāo)準(zhǔn)溶液母液，量取1.0 mL標(biāo)準(zhǔn)溶液母液于100 mL容量瓶中，用甲醇定容，配制成10 mg/L 標(biāo)準(zhǔn)儲備液，置于-20 ℃冰箱中保存待用。

1.2.2樣品前處理。

1.2.2.1提取。

稱取10.00 g土壤或勻漿好的馬鈴薯莖葉或塊莖樣品，置于50 mL離心管中，加入20 mL乙腈，振蕩提取30 min后加入3 g氯化鈉，振搖2 min，以4 000 r/min離心5 min。吸取10.0 mL離心后的提取液于250 mL濃縮瓶中，濃縮至近干，加入二氯甲烷+甲醇（95+5）約3 mL，待凈化。

1.2.2.2凈化。

用約 4mL二氯甲烷+甲醇（95+5）預(yù)淋NH2固相萃取小柱，當(dāng)溶劑液面到達(dá)柱吸附層表面時，立即將上述提取所得溶液轉(zhuǎn)移至NH2固相萃取小柱中，用7.5 mL二氯甲烷+甲醇（95+5）將濃縮瓶中的殘余物分3次洗入NH2固相萃取小柱，收集洗脫液于10 mL刻度試管中，氮?dú)獯蹈珊笥眉状级ㄈ葜?.00 mL，過0.22 μm有機(jī)濾膜于進(jìn)樣小瓶中，待測。

1.2.3儀器色譜條件。

色譜柱：CAPCELL PAK C18柱（250 mm×3 mm，5 μm）；流動相：乙腈-水（體積比30∶70）；流速：0.7 mL/min；進(jìn)樣體積：10.0 μL；檢測波長：254 nm；柱溫：40 ℃。

1.2.4方法的線性關(guān)系考察。用霜脲氰標(biāo)準(zhǔn)儲備液配制005、0.10、0.20、0.50、1.00、2.00 mg/L 6個不同系列濃度的標(biāo)樣，在“1.2.3”條件下進(jìn)樣測定，以保留時間定性、峰面積定量，以霜脲氰標(biāo)樣的峰面積為縱坐標(biāo)（Y），質(zhì)量濃度（mg/L）為橫坐標(biāo)（X）進(jìn)行線性回歸。

1.2.5添加回收率試驗(yàn)。在馬鈴薯莖葉、塊莖及土壤試樣中分別添加0.1、0.5、2.0 mg/kg的霜脲氰，并設(shè)空白對照，分別重復(fù)5次，按“1.2.2”樣品前處理方法和“1.2.3”儀器色譜條件進(jìn)行提取檢測，計算方法的回收率及變異系數(shù)。

2結(jié)果與分析

2.1方法的線性關(guān)系和靈敏度

以霜脲氰標(biāo)樣的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖1），得到線性回歸方程為：Y=31 514X-16.723（r=0.999 8）。色譜見圖2。

靈敏度以3倍信噪比（S/N）所對應(yīng)的標(biāo)樣濃度來確定，霜脲氰的最低檢出濃度為6.0 μg/L，最低檢出量為0.06 ng。

2.2方法的準(zhǔn)確度和精密度

由表1可知，霜脲氰在馬鈴薯莖葉中平均回收率為78.0%～104.4%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.7%～3.4%；在馬鈴薯塊莖中平均回收率為82.9%～947%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.1%～2.3%；在土壤中平均回收率為81.6%～91.8%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.3%～5.4%，表明該方法的準(zhǔn)確度較高，精密度良好，符合農(nóng)藥殘留試驗(yàn)準(zhǔn)則所規(guī)定的農(nóng)殘分析的要求[10]。霜脲氰在馬鈴薯莖葉、塊莖和土壤中的最低檢測濃度均為10 μg/kg，HPLC圖譜見圖3。

3結(jié)論

建立了馬鈴薯與土壤中霜脲氰殘留量的快速前處理方

法和液相色譜分析條件，該方法的準(zhǔn)確度、精密度和靈敏度均較高，符合農(nóng)藥殘留分析的要求。該法操作簡便快速，準(zhǔn)確靈敏，有機(jī)溶劑消耗量相對較低，適合大批量樣品的快速處理，是一種較為實(shí)用的檢測方法。

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