大蒜粗提取液對(duì)儲(chǔ)藏期梨黑斑病的抑菌作用研究

[摘要]以蘋(píng)果梨為試驗(yàn)材料，研究大蒜粗提取液對(duì)梨黑斑病室內(nèi)毒力測(cè)定和梨果實(shí)體內(nèi)損傷接種的影響，結(jié)果表明：大蒜粗提取液在200mL/L抑制率高達(dá)90.65%，菌落的普遍生長(zhǎng)量為7mm，毒力最強(qiáng)EC50為6.304mL/L;大蒜粗提取液對(duì)梨黑斑病菌有抑制作用，200mL/L濃度蒜粗提取液抑菌效果最好。

[關(guān)鍵詞]梨黑斑病菌;貯藏期梨;大蒜粗提取液

[中圖分類(lèi)號(hào)]S436.612 ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A

梨黑斑病是由絲孢綱絲孢目鏈格孢屬真菌（Alternaria kikuchiana）引起的梨樹(shù)主要病害之一，每年對(duì)梨生產(chǎn)造成較大危害，同梨黑星病和輪紋病共稱(chēng)為我國(guó)梨樹(shù)的三大病害。采收前果實(shí)體內(nèi)抗病性的存在，因而無(wú)癥狀表現(xiàn)，采收以后，隨著貯藏期的延長(zhǎng)，果實(shí)逐漸衰老，抗性降低，癥狀便逐漸顯現(xiàn)，采前爛果率可達(dá)30%～50%，在貯藏后期該病的發(fā)病率可達(dá)37%。

目前，生產(chǎn)上防治梨黑斑病主要依靠化學(xué)藥劑。由于長(zhǎng)期使用單一殺菌劑會(huì)誘導(dǎo)病，致使原物產(chǎn)生抗藥性而使得菌效果降低，即使再次噴灑高濃度的農(nóng)藥也不能防治梨黑斑病，反而導(dǎo)致大量的農(nóng)藥留在了植株對(duì)人體生命安全沒(méi)有保障。這就迫使我們運(yùn)用生物防治的方法抑制梨黑斑病菌成為目標(biāo)和發(fā)展方向。

大蒜均屬百合科蔥屬，研究表明大蒜都是高效的殺蟲(chóng)、抑菌資源。大蒜提取液中的抑菌活性成分是大蒜在粉碎過(guò)程中產(chǎn)生的，主要為大蒜酶酶解蒜氨酸產(chǎn)生的大蒜素和大蒜素進(jìn)一步分解產(chǎn)生的其他含硫化合物，其成分多達(dá)18種以上，且易揮發(fā)成分抑菌活性最好。目前，采用大蔥、大蒜提取物對(duì)梨黑斑病的抑制尚未見(jiàn)報(bào)道。

本試驗(yàn)選用不同濃度的大蒜粗提取液，分別通過(guò)體內(nèi)提取物選擇對(duì)梨黑斑病抑制的最佳濃度，以期為大蒜提取物防治梨黑斑病提供依據(jù)，為新型生物防腐劑的開(kāi)發(fā)提供理論依據(jù)。

1? ? 材料與方法

1.1? ? 材料

試驗(yàn)所用大蒜均購(gòu)于菜市場(chǎng)。

供試病原菌為梨貯藏期黑斑病，采自衡水舊城村梨園帶病的蘋(píng)果梨果，貯藏 15 d后取病組織分離得到梨黑斑病菌，經(jīng)魏景超真菌鑒定手冊(cè)鑒定為梨黑斑病病菌（Alternaria kikuchiana）。培養(yǎng)基為 PDA 培養(yǎng)基。

1.2? ? 試驗(yàn)方法

蒜研磨液的制備。將從室外購(gòu)回的大蒜（去外表皮）分別在無(wú)菌的環(huán)境中，用75%的酒精棉球擦拭其表面，晾干。用滅菌的解剖刀和鑷子去除表皮（注意不要污染內(nèi)部組織），挑取內(nèi)部組織0.1g，放入滅菌的研缽中加1mL無(wú)菌水充分研磨，靜置。

1.3? ? 對(duì)菌絲生長(zhǎng)的抑制活性測(cè)定（采用菌絲生長(zhǎng)速率法）

在無(wú)菌條件下，用移液槍?zhuān)岊^預(yù)先滅菌）分別吸取4、8、12、16、20ml大蒜粗提取液，分別加入100mL的PDA培養(yǎng)基中（PDA培養(yǎng)基制備參照方中達(dá)方法進(jìn)行），震蕩搖勻后趁熱倒入直徑90mm的培養(yǎng)皿內(nèi)。預(yù)先培養(yǎng)梨黑斑病原菌，病原菌的培養(yǎng)參照方中達(dá)方法進(jìn)行。用滅過(guò)菌的直徑為6mm的打孔器在菌落邊緣鉆取菌餅，接種于含有殺菌劑的PDA培養(yǎng)基的中央，菌絲面向下，每皿接種1個(gè)菌餅，每個(gè)處理3次，25℃光照培養(yǎng)箱培養(yǎng)，每天用十字交叉法測(cè)量供試真菌菌落生長(zhǎng)直徑，共培養(yǎng)觀察6d的結(jié)果。觀測(cè)每天菌落的生長(zhǎng)量曲線和計(jì)算菌絲生長(zhǎng)抑菌率。對(duì)照處理指正常PDA培養(yǎng)基未加入抑菌物質(zhì)，70%乙醇處理指取70%乙醇1mL加入100mL的PDA培養(yǎng)基中。

1.4? ? 處理已經(jīng)記錄的試驗(yàn)數(shù)據(jù)

采用Microsoft Excel2010軟件處理，以藥劑質(zhì)量濃度的對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)、抑制率幾率值為縱坐標(biāo)作圖，得到毒力回歸方程及有效抑制中濃度（EC50）值。

2? ? 結(jié)果與分析

2.1? ? 大蒜提取物對(duì)病原菌菌絲生長(zhǎng)速率的影響

由圖1可知，大蒜提取物對(duì)梨黑斑病菌菌絲生長(zhǎng)均有不同程度地抑制作用，提取物濃度的增大，菌落直徑減小，且同種提取物對(duì)菌落生長(zhǎng)的抑制作用在不同濃度之間存在差異。在不含藥劑的PDA平板上，隨著觀察時(shí)間的延長(zhǎng)，菌絲長(zhǎng)度逐漸增加，在接菌餅24h后菌絲生長(zhǎng)達(dá)到4mm左右。低濃度植物提取物，即小于40mL/L和80mL/L處理不明顯抑制菌絲伸長(zhǎng)，菌絲長(zhǎng)度與對(duì)照變短不明顯。隨著植物提取物濃度升高120mL/L時(shí)，對(duì)菌絲生長(zhǎng)的抑制率增大，達(dá)到30%。結(jié)果表明，大蒜粗提取液對(duì)菌絲生長(zhǎng)速率的影響大，在40mL/L濃度下菌落直徑生長(zhǎng)約20mm，在最大200mL/L濃度下僅生長(zhǎng)約7 mm。

2.2? ? 大蒜提取物對(duì)梨黑斑病菌絲的抑制作用

由表1可知，大蒜粗提取液不同的濃度均對(duì)梨黑斑病菌的生長(zhǎng)有不同的抑制程度。在濃度200 mL/L大蒜粗提取液的抑制率高達(dá)90.65%，同時(shí)在40、80、120、160 mL/L的質(zhì)量濃度下，抑制率均大于70%。

2.3? ? 大蒜粗提取液對(duì)病原菌絲的毒力測(cè)定

由表2可知，大蒜粗提取液對(duì)病原菌的毒力最強(qiáng)EC50為6.304 mL/L。

3? ? 結(jié)論與討論

大蒜粗提取液對(duì)梨黑斑病的菌落生長(zhǎng)、菌絲伸長(zhǎng)和梨果實(shí)病斑擴(kuò)展均具有不同程度的抑制作用，隨著濃度的增加抑制作用越強(qiáng)。其中，對(duì)菌落生長(zhǎng)抑菌效果最好的為200 mL/L大蒜粗提取液的抑制率高達(dá)90.65%，同時(shí)在40、80、120、160 mL/L的質(zhì)量濃度下，抑制率均大于70 %，對(duì)病原菌的毒力最強(qiáng)EC50為6.304 mL/L。大蒜粗提取液體內(nèi)損傷接種實(shí)驗(yàn)抑制率相比離體培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)的抑制率略低，但隨著濃度的增加抑制作用越強(qiáng)，其中200 mL/L的大蒜粗提取液抑菌作用最好，抑菌率為70.97 %，毒力最強(qiáng)EC50為47.319 mL/L。

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