蠶豆保健品中左旋多巴的測定方法研究

趙愛平 馮德建 許洋 鄒燕 張琦 李懷平

摘要：建立蠶豆保健品中左旋多巴含量的高效液相色譜測定方法。樣品經0.10mol/L鹽酸溶液超聲提取20min，XDB C18色譜柱分離，以甲醇-10mmool/L磷酸二氫鉀溶液（體積比2：98）等度洗脫，280nm下檢測，外標法定量。結果表明：左旋多巴質量濃度在1.656～265.0mg/L范圍內與峰面積呈現良好的線性關系，方法的平均加標回收率為98.4%～100.9%，相對標準偏差為0.83%～2.18%，檢出限為1.9mg/kg，定量限為6.3mg/kg。能夠滿足蠶豆保健品中左旋多巴含量的檢測和質量控制需要。

關鍵詞：蠶豆保健品；左旋多巴；高效液相色譜儀；蠶豆粉；蠶豆茶

0引言 蠶豆（vicia faba L.），豆科植物中的一種，屬于蝶形花亞科，廣泛種植于我國四川、云南、湖南等地，產量位居世界第一。蠶豆含有豐富的蛋白質、維生素和礦物質等營養元素，特別是其中的功效成分左旋多巴（L-Dopa），在臨床上已被證實是治療帕金森病的一線藥物，在蠶豆的花和葉片中含量較高，具有重要的藥用價值，以其為原料制成的保健品具有良好的市場前景。目前，對左旋多巴的測定主要有紫外分光光度法、薄層色譜法、毛細管電泳法、高效液相色譜法等，其中高效液相色譜法具有操作簡單、靈敏度高、穩定性好等特點，本文通過對樣品前處理和色譜條件的優化，建立了蠶豆保健品中左旋多巴含量的高效液相色譜測定方法，能夠滿足蠶豆保健品中左旋多巴含量的檢測和質量控制，期為延伸蠶豆產業鏈和促進蠶豆深加工產業的快速發展提供技術支撐。

1材料與方法

1.1儀器與設備 Agilent 1200型高效液相色譜儀（美國Agilent公司），Sartorius BP 211D型電子天平（德國Sartorius集團），Agilent XDB C18色譜柱（150mmx4.6mm，5μm，美國Agilent公司），KH-500DE型數控超聲波清洗器（昆山禾創超聲儀器有限公司），Millipore Milli-Q型超純水器（美國Miflipore公司），XW-80A型漩渦混合器（上海馳唐實業有限公司）。

1.2材料與試劑 材料與試劑：0.45μm微孔濾膜（水相）；甲醇（美國Sigma-Aldrich公司），色譜純；磷酸二氫鉀（天津市科密歐化學試劑有限公司），優級純；鹽酸（成都市科龍化工試劑廠），分析純；左旋多巴（中國藥品生物制品檢定所，含量≥98%）。 樣品：蠶豆保健品（蠶豆粉）。 左旋多巴標準儲備液：準確稱取左旋多巴132.5mg，用0.10mol/L鹽酸溶液溶解并定容至250mL，配制成質量濃度為530.0 mg/L的左旋多巴標準儲備液，于4℃下保存。使用時根據需要稀釋成適當濃度的標準工作溶液，現配現用。

1.3樣品前處理 準確稱取0.2g（精確到0.000 1g）蠶豆保健品樣品于25mL比色管中，加入20mL 0.10mol/L鹽酸溶液，于60Hz超聲清洗器中超聲提取20min，冷卻至室溫后用0.10 mol/L鹽酸溶液定容至刻度，混勻，過0.45μm水相濾膜，供高效液相色譜儀測定。

1.4液相色譜條件 色{普柱：Agilent XDB C18色譜柱（150mmx4.6mm，5μm）；流動相：甲醇-10mmol/L磷酸二氫鉀溶液（體積比2：98）；流量：0.7mL/min；色譜柱溫度：25℃；進樣量：10μL，檢測波長：280nm。

2結果與討論

2.1樣品前處理條件優化 左旋多巴在水中微溶，在乙醇、三氯甲烷或乙醚中不溶，在稀酸中易溶。本方法考察了不同濃度（0.05，0.10，0.15 mol/L）鹽酸溶液作為提取溶劑的提取效率，結果表明左旋多巴在0.10mol/L鹽酸溶液中提取最為完全。同時，本方法還對超聲提取時間進行了考察，結果表明超聲提取時間超過20min后，樣品中的左旋多巴含量不再增加，因此選定超聲提取時間為20min。

2.2樣品色譜條件優化 本方法利用DAD檢測器對左旋多巴進行全波長掃描，結果表明其在280nm處有最大吸收，因此確定280nm作為本方法的檢測波長。由于左旋多巴在C18色譜柱上保留較弱，本方法考察了不同體積比的甲醇與10mmol/L磷酸二氫鉀溶液作為流動相時樣品的分離情況，結果見表1。由表可知，有機相甲醇的比例越高左旋多巴的出峰時間就越短，且與樣品中其他基質成分的分離效果也越差，當降低甲醇的比例至2時，左旋多巴的出峰時間為5.2min左右，且色譜峰峰形尖銳、對稱性好，能夠與樣品中其他基質成分實現很好地基線分離。因此，本方法確定甲醇與10 mmol/L磷酸二氫鉀溶液的體積比為2：98。同時，本方法還分別考察了不同色譜柱溫度和流量對樣品分離的影響，如表1所示。可以看出，色譜柱溫度的升高和流量的增大均會導致左旋多巴出峰時間前移，且與樣品中其他基質成分的分離度下降，但均對色譜峰峰形影響不大。因此，本方法確定色譜柱溫度為25℃，流量為0.7mL/min。圖1是優化后空白溶液（0.10 mol/L鹽酸溶液）、標準工作溶液、樣品溶液和樣品加標溶液的色譜圖。

2.3線性范圍、相關系數、檢出限與定量限 用0.10 mol/L的鹽酸溶液逐級稀釋左旋多巴標準儲備液，配制成質量濃度分別為1.656，16.563，33.125，66.250，132.500，265.000 mg/L的系列標準工作溶液，按照上述色譜條件進行測定，以峰面積y與對應的質量濃度x（mg/～L）繪制標準曲線如圖2所示。結果表明，左旋多巴質量濃度在1.656～265.0 mg/L范圍內與峰面積呈現良好的線性關系，線性方程為y=23.098 1x+10.7594，相關系數r為0.9999。以3倍信噪比（3S/N）確定本方法中左旋多巴的檢出限為1.9mg/kg，以10倍信噪比（10 S/N）確定本方法中左旋多巴的定量限為6.3 mg/kg，能夠滿足蠶豆保健品中左旋多巴含量檢測和質量控制需要。

2.4方法的準確度與精密度 準確稱取蠶豆保健品樣品24份，等分成4組，其中3組分別添加1.2，2.5，5.0mL的左旋多巴標準工作溶液，加標量分別為636.0，1 325.0，2650.0μg，按照本方法進行測定，計算方法的回收率和精密度。結果表明，3種不同添加濃度下測得蠶豆保健品中左旋多巴的平均回收率在98.4%-100.9%之間，相對標準偏差為0.83%-2.18%，說明本方法具有良好的準確度與精密度。

2.5實際樣品的測定 分別準確稱取購于市場的2種蠶豆保健品（蠶豆粉、蠶豆茶）樣品各12份，等分成2組，其中1組用于測定樣品中左旋多巴的含量，另外1組用于樣品加標實驗，分別按照本方法進行測定，結果如表2所示。可以看出，蠶豆粉的檢測結果為7.52mg/g，樣品加標回收率為97.7%～100.0%：蠶豆茶的檢測結果為39.51 mg/g，樣品加標回收率為98.1%～101.1%，表明本方法適合蠶豆保健品中左旋多巴含量的測定。

3結束語 本文率先優化了蠶豆保健品的前處理條件和色譜條件，建立了蠶豆保健品中左旋多巴含量的高效液相色譜測定方法，可為相關領域提供參考。方法的平均加標回收率為98.4%～100.9%，相對標準偏差為0.83%～2.18%，檢出限為1.9mg/kg，定量限為6.3mg/kg，能夠很好地滿足蠶豆保健品中左旋多巴含量的檢測和質量控制。