聚多曲霉Snef210對南方根結(jié)線蟲毒性的研究

王帥 郭龍玉 朱曉峰

摘要 蔬菜根結(jié)線蟲病在我國乃至世界危害日益嚴(yán)重，安全防控該病害成為目前急需解決的農(nóng)業(yè)生產(chǎn)問題。本研究篩選到一株可毒殺南方根結(jié)線蟲Meloidogyne incognita的生防真菌Snef210，經(jīng)形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)鑒定為聚多曲霉Aspergillus sydowii （Bain.et Sart.） Thomet Church。該菌株發(fā)酵液對南方根結(jié)線蟲2齡幼蟲（J2）具有很強(qiáng)的毒殺作用，原液處理24 h后校正死亡率達(dá)90.1%，處理3 d后對卵孵化的抑制率達(dá)92.8%。盆栽試驗(yàn)中，與對照相比，菌株發(fā)酵液10倍稀釋液土壤處理對番茄根部的根結(jié)減退率為66.7%。聚多曲霉代謝產(chǎn)物豐富，多用于抗菌和抗腫瘤的研究，本文首次發(fā)現(xiàn)其對南方根結(jié)線蟲有效，是一類潛在的控制植物線蟲病害的新型生防因子。

關(guān)鍵詞 聚多曲霉； 南方根結(jié)線蟲； 番茄； 毒性

中圖分類號： S 476

文獻(xiàn)標(biāo)識碼： A

DOI： 10.16688/j.zwbh.2018045

Abstract Disease of root-knot nematode （RKN） is becoming more serious in China and other countries. It is an urgent problem to control this nematode in agricultural production. Snef210 was screened with high efficacy againstMeloidogyne incognitaand identified asAspergillus sydowii with morphological and molecular analysis. Second stage juveniles （J2） and egg capsules were immersed in Snef210 with in vitro methods. The results showed the corrected mortality of J2was 90.1% at 24 h. Moreover， Snef210 exhibited high ovicidal effect with the efficacy of 92.8% at 3 d. Root-knot index treated with diluted ten-fold Snef210 fermentation broth was decreased by 66.7% in pot experiment.A. sydowii is rich in metabolic products， mostly used in antibacterial and anti-tumor studies. Snef210 had strongly toxicity toM. incognita and could be regarded as a novel potential biocontrol agent against RKNs.

Key words Aspergillus sydowii； Meloidogyne incognita； tomato； toxicity

近年來，隨著日光溫室等設(shè)施園藝種植模式在北方的大面積推廣應(yīng)用，南方根結(jié)線蟲Meloidogyne incognita 得以越冬存活，致使根結(jié)線蟲病發(fā)展成為東北地區(qū)危害設(shè)施蔬菜生產(chǎn)的重要土傳病害之一，制約了設(shè)施蔬菜產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。根結(jié)線蟲是在植物根系內(nèi)定殖的專性內(nèi)寄生病原物，因其分布范圍廣和寄主種類多的特點(diǎn)，給許多國家的農(nóng)林產(chǎn)業(yè)造成巨大損失，已成為世界上威脅農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的主要病原物之一[1]。

隨著科技的進(jìn)步和人們環(huán)保意識的加強(qiáng)，從生態(tài)角度尋求控制根結(jié)線蟲的生物防治新方法成為研究熱點(diǎn)[2-3]。生防真菌因種類繁多且代謝產(chǎn)物豐富多樣，在植物線蟲病害的生物防治研究中最早被發(fā)現(xiàn)和應(yīng)用[4]。我國研究人員陸續(xù)報(bào)道不同種類真菌在根結(jié)線蟲病中的研究，如哈茨木霉對黃瓜根結(jié)線蟲的防治效果顯著[5]，青霉菌的代謝產(chǎn)物對多種植物線蟲有強(qiáng)烈的毒殺作用且對環(huán)境影響小[6]，李頌等施用黑曲霉次生代謝產(chǎn)物的處理降低了番茄的根結(jié)指數(shù)和根結(jié)線蟲種群數(shù)量，促進(jìn)了番茄植株的生長[7]。

聚多曲霉Aspergillus sydowii亦稱為喜多氏曲霉，是自然界重要的生物資源。屬于絲孢菌目叢梗孢科曲霉屬的一個種，可生長在土壤、糞便、酒曲等多種材料的基物上[8]。聚多曲霉代謝產(chǎn)物非常豐富，目前研究主要集中于抗菌、抗病毒[9-10]以及抗癌活性[11]，但是尚未見到應(yīng)用其防治根結(jié)線蟲病的研究。本文在研究根結(jié)線蟲生防菌的活性篩選過程中，分離獲得一株高效的生防真菌Snef210，經(jīng)鑒定為聚多曲霉A.sydowii，并進(jìn)行了室內(nèi)毒力測定和盆栽防效試驗(yàn)，以驗(yàn)證其生防潛力，為植物線蟲病害的生物防治提供新的生防資源。

1 材料與方法

1.1 真菌Snef210菌株的鑒定

1.1.1 供試菌株與菌株發(fā)酵液

供試真菌Snef210菌株，由本實(shí)驗(yàn)室從遼寧省沈陽市康平試驗(yàn)基地大豆田土壤中分離獲得。菌株培養(yǎng)采用馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（potato dextrose agar， PDA），菌株純化和鑒定采用查氏瓊脂培養(yǎng)基（Czapek-Dox agar， CDA），菌株保存采用10%的甘油放置于-80℃冰箱中。選取平板上生長良好的菌落，取直徑1 cm的菌餅接種于含有150 mL馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)液的三角瓶中，120 r/min，27℃條件下?lián)u床中振蕩培養(yǎng)5 d，獲得真菌發(fā)酵液原液。發(fā)酵液原液5 000 r/min離心15 min，獲得發(fā)酵液上清液，作為菌株發(fā)酵液保存到4℃冷庫中備用。

1.1.2 菌株Snef210的鑒定

主要依據(jù)形態(tài)學(xué)鑒定以及ITS、β-tubulin序列分析方法對Snef210菌株進(jìn)行鑒定。將菌株Snef210進(jìn)行單孢分離，接種到PDA、CDA平板上培養(yǎng)，采用光學(xué)顯微鏡及掃描電鏡對菌落、菌絲和孢子等結(jié)構(gòu)進(jìn)行觀察，參照《中國真菌志》[8]進(jìn)行鑒定。

利用TIANGEN公司的DNA提取試劑盒提取菌株Snef210總DNA，然后進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增引物為ITS1：TCCGTAGGTGAACCTGCGG 和ITS4： TCCTCCGCTTATTGATATGC[12]，以及β-tubulin基因間隔區(qū)通用引物Bt2a：GGTAACCAAATCGGTGCTGCTT 和 Bt2b：ACCCTCAGTGTAGTG-ACCCTTGGC[13]。ITS擴(kuò)增程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性5 min；94℃變性1 min，56℃復(fù)性1 min，72℃延伸2 min，30次循環(huán)；72℃延伸5 min，4℃下保存。β-tubulin擴(kuò)增程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性3 min；94℃變性50 s，53℃復(fù)性1 min，72℃延伸2 min，35個循環(huán)；最后72℃延伸10 min。PCR產(chǎn)物采用1.2%的瓊脂糖凝膠電泳檢測。經(jīng)過PCR擴(kuò)增后的產(chǎn)物由上海生物工程有限公司純化測序，并將測序獲得的序列結(jié)果提交NCBI（http：∥blast.ncbi.nlm.nih.gov）， 進(jìn)行BLAST 序列比對，然后通過MEGA 6.0 軟件采用Neighbor-joining法繪制系統(tǒng)發(fā)育樹，在分子水平鑒定菌株的種類。

1.2 供試南方根結(jié)線蟲卵與2齡幼蟲J2

采集鐵嶺市李千戶鎮(zhèn)營盤村溫室大棚中南方根結(jié)線蟲侵染的番茄根系，用水輕輕沖掉根上泥土，取下卵囊放在自制的孵化池中，0.5%的NaClO消毒3 min，之后用無菌水沖洗5次，將處理后的卵囊懸液置于25℃恒溫箱中培養(yǎng)，每隔24 h收集一次新孵化的南方根結(jié)線蟲J2置于4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 真菌Snef210發(fā)酵液對南方根結(jié)線蟲的毒力測定

1.3.1 發(fā)酵液對南方根結(jié)線蟲J2活性的影響

取直徑6 cm一次性培養(yǎng)皿，加6 mL離心處理后的發(fā)酵液上清液，并挑取100條J2置于其中，分別在處理6、12、24、36、48、60 h后，統(tǒng)計(jì)死亡根結(jié)線蟲J2數(shù)量，試驗(yàn)前期線蟲死亡通過線蟲彎曲程度或用挑針刺激法判斷[14-15]。最后一次檢驗(yàn)時，線蟲死亡通過亞甲基藍(lán)水溶液判斷，每個皿中加入2滴0.05%亞甲基藍(lán)水溶液10 min時鏡檢，蟲體藍(lán)色為死蟲，不著色為活蟲[16]。1.8%阿維菌素乳油稀釋1 000倍為藥劑處理對照，以無菌水處理為空白對照，每個處理重復(fù)3次，根據(jù)下列公式計(jì)算死亡率和校正死亡率：

死亡率= 死亡線蟲總數(shù)/處理線蟲總數(shù)×100%；

校正死亡率=（處理線蟲死亡率-對照線蟲死亡率）/（1-對照線蟲死亡率）×100%。

1.3.2 發(fā)酵液對南方根結(jié)線蟲卵孵化的抑制作用

分別取10個卵囊經(jīng)表面消毒放入自制的孵化池中，孵化池放入直徑為6 cm的一次性培養(yǎng)皿中，皿中分別裝有10 mL發(fā)酵液和1.8%阿維菌素乳油1 000倍稀釋液為處理1和處理2，設(shè)置10 mL無菌水為對照處理。每個處理設(shè)置3次重復(fù)，25℃條件下培養(yǎng)箱中孵化，3、5、7 d后在解剖鏡下統(tǒng)計(jì)孵化出的線蟲數(shù)量，并依照公式計(jì)算出卵孵化的相對抑制率：

相對抑制率=（對照孵化線蟲數(shù)-處理孵化線蟲數(shù)）/對照孵化線蟲數(shù)×100%。

1.4 盆栽試驗(yàn)驗(yàn)證真菌Snef210發(fā)酵液對番茄根結(jié)線蟲的防效

Snef210發(fā)酵液稀釋10倍后用于盆栽試驗(yàn)。將番茄‘L402的種子用1.0%的NaClO消毒5 min，用無菌水沖洗5次，播種于72孔蛭石穴盤中，溫室中培養(yǎng)（白天26℃，晚上16℃）。當(dāng)番茄苗長到2葉1心期時將苗移到塑料盆缽中（直徑25 cm，高30 cm），每缽使用高溫滅菌處理的混合培養(yǎng)基質(zhì)1 000 g（基質(zhì)∶沙∶土=1∶1∶1）。混合基質(zhì)中加200 mL稀釋10倍的發(fā)酵液充分混勻作為處理1，加100 mL稀釋10倍的發(fā)酵液和100 mL 1.8%阿維菌素乳油稀釋1 000倍液為處理2，加200 mL無菌水為空白對照，加200 mL 1.8%阿維菌素乳油稀釋1 000倍液為藥劑對照，每個處理10盆，每盆一株番茄苗。番茄移栽5 d后接種1 500條南方根結(jié)線蟲J2，接種45 d后調(diào)查根結(jié)指數(shù)。采用肖炎農(nóng)等[17]的分級標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)計(jì)病情級數(shù)，并分別稱量不同處理下每株番茄根冠質(zhì)量，按照下列公式計(jì)算根結(jié)指數(shù)和根結(jié)減退率：

根結(jié)指數(shù)=Σ（各級病株數(shù)×相應(yīng)級別數(shù)）/（調(diào)查總株數(shù)×最高級別數(shù)）×100；

根結(jié)減退率=（對照根結(jié)指數(shù)-處理根結(jié)指數(shù)）/對照根結(jié)指數(shù)×100%。

1.5 數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)所獲數(shù)據(jù)由SPSS Statistics18軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)與Duncan氏新復(fù)極差法進(jìn)行多重比較來分析數(shù)據(jù)（P<0.05）。

2 結(jié)果與分析

2.1 菌株Snef210的鑒定

菌株Snef210在查氏瓊脂培養(yǎng)基上25℃條件下7 d時直徑達(dá)到24.0 mm，菌絲絨狀至絮狀，致密；菌落顏色灰藍(lán)色（圖1a）；14 d時菌落直徑達(dá)到51.4 mm，菌落逐漸變?yōu)榘邓{(lán)色，有淡褐色區(qū)域。7 d時已具大量滲出液，褐色或黃褐色（圖1a）；基本無氣味或具輕微霉味。菌落反面暗褐色，近于栗黑色，色素?cái)U(kuò)散于基質(zhì)中（圖1b）。分生孢子頭球形至輻射形，直徑平均約為75.4 μm，小分生孢子頭似青霉?fàn)睿适杷芍位蛏y（1c）；分生孢子梗直接生于基質(zhì)，有的生于氣生菌絲，孢梗莖長大多在140.7～210.5 μm，直徑4.7～8.1 μm，壁較厚，光滑。頂囊較小，近球形或稍呈橢圓形，直徑8.3～15.2 μm，幾乎全部表面可育（圖1c，d）；產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)雙層：梗基（4.3～10.4）μm×（2.0～4.0）μm，有的小分生孢子頭僅分生孢梗莖頂端稍膨大后生出產(chǎn)孢細(xì)胞（圖1c，d）；分生孢子為球形或近球形，直徑2.5～5.2 μm，壁明顯粗糙，具小刺（圖1d）。

將測序獲得的序列結(jié)果提交NCBI，獲得ITS和β-tubulin序列號分別為KY908307和MG831183。通過ITS和β-tubulin序列分析，與GenBank數(shù)據(jù)庫中相關(guān)真菌的序列進(jìn)行比對，結(jié)果表明該菌株與已知真菌聚多曲霉KJ463376.1和LN898876.1在ITS序列同源性上達(dá)到99%，在β-tubulin序列同源性上為100%。綜合考慮菌株Snef210的形態(tài)特征與基因測序結(jié)果，表明該菌株屬于聚多曲霉Aspergillus sydowii （Bain.et Sart.） Thomet Church。

2.2 真菌Snef210菌株發(fā)酵液對南方根結(jié)線蟲J2的毒性

為了驗(yàn)證真菌Snef210發(fā)酵液對南方根結(jié)線蟲J2的毒性，本研究利用1.8%阿維菌素乳油1 000倍稀釋液為藥劑對照，結(jié)果發(fā)現(xiàn)除處理36 h外，其余時間兩者處理間J2校正死亡率無顯著性差異（圖4）。Snef210發(fā)酵液處理南方根結(jié)線蟲J2后6 h時其校正死亡率達(dá)81.1%，而1.8%阿維菌素稀釋液處理線蟲6 h時其校正死亡率稍低，校正死亡率為78.1%；隨著時間延長，兩種處理的線蟲死亡數(shù)都持續(xù)增加，24 h時兩種處理的校正死亡率都超過90%，且24 h以后 1.8%阿維菌素稀釋液處理線蟲校正死亡率稍高于發(fā)酵液處理南方根結(jié)線蟲校正死亡率，但兩者無顯著差異（圖4）。綜上可知真菌Snef210發(fā)酵液對南方根結(jié)線蟲J2的毒性與稀釋1 000倍的1.8%阿維菌素基本一致（36 h除外）。

2.3 真菌Snef210發(fā)酵液對南方根結(jié)線蟲卵孵化的抑制作用

真菌Snef210發(fā)酵液處理南方根結(jié)線蟲卵囊后，3 d時Snef210發(fā)酵液和1.8%阿維菌素乳油稀釋液對卵的孵化都起到很好的抑制效果，Snef210發(fā)酵液對卵囊孵化的相對抑制率達(dá)到92.8%，且0.05水平差異不顯著；處理5 d和7 d時，Snef210發(fā)酵液雖然也能夠顯著抑制卵孵化，但相對抑制率顯著低于阿維菌素，分別為44.1%與50.6%，說明Snef210發(fā)酵液前期對卵囊孵化抑制效果較好（圖5）。

2.4 溫室盆栽試驗(yàn)效果

在接種線蟲45 d后調(diào)查盆栽番茄根結(jié)指數(shù)，發(fā)現(xiàn)菌株Snef210發(fā)酵液處理番茄后根結(jié)指數(shù)為17.5，明顯低于對照根結(jié)指數(shù)52.5，根結(jié)減退率達(dá)到66.7%（表1）。Snef210發(fā)酵液與1.8%阿維菌素乳油混用的防治效果好于單獨(dú)使用阿維菌素處理，但是差異不顯著。Snef210發(fā)酵液與1.8%阿維菌素混用處理番茄后植株生物量有顯著提高，根結(jié)減退率也最高，防效最好（表1），處理后的番茄須根比空白對照發(fā)達(dá)，而對照僅有少量須根。可以看出Snef210發(fā)酵液不僅可以控制線蟲的侵染，促進(jìn)番茄的生長，還可以與阿維菌素混合使用增強(qiáng)效果。

3 討論

Snef210菌株經(jīng)鑒定為聚多曲霉，其發(fā)酵液對南方根結(jié)線蟲J2有較強(qiáng)的毒性作用，也能顯著抑制南方根結(jié)線蟲卵孵化，與1.8%阿維菌素乳油作用效果相當(dāng)。盆栽試驗(yàn)顯示該菌發(fā)酵液能顯著減少根結(jié)數(shù)量，并可以和阿維菌素混配增強(qiáng)防效。研究結(jié)果顯示該菌發(fā)酵液中存在對南方根結(jié)線蟲有較強(qiáng)毒殺作用的代謝物質(zhì)，但具體是哪些物質(zhì)起作用，是單一物質(zhì)還是多種物質(zhì)共同作用，有待進(jìn)一步的研究。

曲霉是自然界重要的微生物資源，在線蟲的生物防治中很早就被發(fā)現(xiàn)和利用，其中曲霉屬、木霉屬、青霉屬和擬青霉屬在線蟲的生物防治中研究較多[18-20]，本實(shí)驗(yàn)室也曾篩選到一些曲霉菌屬和青霉菌屬的生防菌[7，15]。青霉菌在根結(jié)線蟲的防治中還處于簡單的篩選和應(yīng)用，在抗根結(jié)線蟲的機(jī)理方面沒有木霉菌屬和擬青霉菌屬研究深入。相關(guān)研究認(rèn)為曲霉中的檸檬酸、草酸、曲酸等酸性物質(zhì)是抑制根結(jié)線蟲的重要原因[21-23]。與報(bào)道的曲霉產(chǎn)生酸性物質(zhì)不同，木霉菌屬和擬青霉菌屬生防菌株可以通過產(chǎn)生細(xì)胞壁降解酶如幾丁質(zhì)酶等寄生于線蟲的卵塊和2齡幼蟲來拮抗南方根結(jié)線蟲[24-25]，也可以產(chǎn)生一些絲氨酸蛋白酶等毒性物質(zhì)殺死線蟲J2，并且抑制卵孵化[26-27]。本研究鑒定到聚多曲霉Snef210菌株對番茄南方根結(jié)線蟲有很好的防治效果，但其是否同其他曲霉一樣是代謝物中的酸類物質(zhì)在起作用，還有待進(jìn)一步的試驗(yàn)驗(yàn)證。

人們研究發(fā)現(xiàn)聚多曲霉能夠產(chǎn)生多種抗真菌物質(zhì)如棘球白素[28]、抗病毒的活性物質(zhì)[9]，同時也能夠產(chǎn)生一些對人類細(xì)胞瘤有較高毒性的物質(zhì)[29]，其中一種二酮哌嗪類新化合物對黑素瘤細(xì)胞具有較強(qiáng)的毒性[30]。Trisuwan研究得到3種新倍半萜烯類與2種新氧雜蒽酮類物質(zhì)，并評估了這些物質(zhì)的抗氧化能力[31]。因此，該菌產(chǎn)生的這些毒性產(chǎn)物和抗氧化物質(zhì)在引起根結(jié)線蟲J2的死亡及抑制卵孵化起到多少作用也需要驗(yàn)證。此外，人們陸續(xù)發(fā)現(xiàn)其在降解農(nóng)藥中的作用，如可以降解甲基對硫磷[32]、敵草隆[33]、S-氰戊菊酯[34]和敵百蟲[35]等農(nóng)藥。除了能降解多種農(nóng)藥，該菌能降解甲醛等有毒物質(zhì)[35]。可見聚多曲霉具有多樣化功能，是重要的環(huán)境用真菌，其具有的特性必將為聚多曲霉的應(yīng)用添加優(yōu)勢。

參考文獻(xiàn)

[1] 段玉璽.植物線蟲學(xué)[M].北京：科學(xué)出版社，2011：135-144.

[2] 梁建根，鄭經(jīng)武.設(shè)施栽培中蔬菜根結(jié)線蟲生物防治研究進(jìn)展[J].中國農(nóng)學(xué)通報(bào)，2010，26（19）：290-293.

[3] JIN Na， XUE Hui， LI Wenjing， et al. Field evaluation ofStreptomyces rubrogriseus HDZ-9-47 for biocontrol ofMeloidogyne incognita on tomato [J]. Journal of Integrative Agriculture， 2017， 16（6）： 1347-1357.

[4] 錢振官，張大業(yè)，馬承鑄，等.寡孢節(jié)叢孢菌和褶生輪枝菌對根結(jié)線蟲的致病力[J].生物防治通報(bào)，1993，9（2）：91-92.

[5] 馬金慧，朱萍萍，茆振川，等.哈茨木霉菌株TRI2的鑒定及其對黃瓜根結(jié)線蟲的防治作用[J].中國農(nóng)學(xué)通報(bào)，2014，30（22）：263-269.

[6] 馬希斌，段玉璽，陳立杰，等.青霉菌snf44-1代謝產(chǎn)物不同植物線蟲的影響[J].農(nóng)藥，2007，46（8）：563-565.

[7] 李頌，段玉璽，朱曉峰，等.黑曲霉次生代謝產(chǎn)物對番茄抗根結(jié)線蟲病效果的影響[J].中國蔬菜，2011，1（4）：44-49.

[8] 齊祖同.中國真菌志[M].北京：科學(xué)出版社，1997：50-51.

[9] WANG Junfeng， LIN Xiuping， QIN Chun， et al. Antimicrobial and antiviral sesquiterpenoids from sponge-associated fungus，Aspergillus sydowii ZSDS1-F6[J]. Journal of Antibiotics， 2014， 67（8）： 581-583.

[10]GASHGARI R， GHERBAWY Y， AMEEN F， et al. Molecular characterization and analysis of antimicrobial activity of endophytic fungi from medicinal plants in Saudi Arabia[J/OL]. Jundishapur Journal of Microbiology， 2016， 9（1）： e26157.

[11]GODINHO V M， GONALVES V N， SANTIAGO I F， et al. Diversity and bioprospection of fungal community present in oligotrophic soil of continental Antarctica[J]. Extremophiles， 2015， 19（3）： 585-596.

[12]WHITE T J，BRUNS T，LEE S，et al.Amplification and direct sequencing of fungal ribosomal RNA genes for phylogenetics[M]∥PCR protocols： a guide to methods and applications. New York： Academic Press， 1990：315-322.

[13]GLASS N L， DONALDSON G C. Development of primer sets designed for use with the PCR to amplify conserved genes from filamentous ascomycetes[J]. Applied and Environmental Microbiology， 1995， 61（4）： 1323-1330.

[14]CHEN S Y， DICKSON D W. A technique for determining live second-stage juveniles of Heterodera glycines[J]. Journal of Nematology，2000，32（1）：117-121.

[15]段玉璽， 靳瑩瑩， 王勝君， 等. 生防菌株Snef85的鑒定及其發(fā)酵液對不同種類線蟲的毒力[J]. 植物保護(hù)學(xué)報(bào)，2008，35（2）：132-136.

[16]梁建根， 鄭經(jīng)武， 郝中娜， 等. 生防菌K-8對南方根結(jié)線蟲的防治及其鑒定[J]. 中國農(nóng)學(xué)通報(bào)，2011，27（21）：282-286.

[17]肖炎農(nóng)， 王明祖， 付艷平， 等. 蔬菜根結(jié)線蟲病情分級方法比較[J].華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2000，19（4）：336-338.

[18]SIDDIQUI Z A， AKHTAR M S. Effects of antagonistic fungi， plant growth-promoting rhizobacteria， and arbuscular mycorrhizal fungi alone and in combination on the reproduction ofMeloidogyne incognita， and growth of tomato [J]. Journal of General Plant Pathology， 2009， 75（2）：144.

[19]AFFOKPON A， COYNE D L， HTAY C C， et al. Biocontrol potential of nativeTrichoderma isolates against root-knot nematodes in West African vegetable production systems [J]. Soil Biology & Biochemistry， 2011， 43（3）：600-608.

[20]HASHEM M， ABO-ELYOUSR K A. Management of the root-knot nematodeMeloidogyne incognita， on tomato with combinations of different biocontrol organisms [J]. Crop Protection， 2011， 30（3）：285-292.

[21]ZUCKERMAN B M， MATHENY M， ACOSTA N. Control of plant-parasitic nematodes by a nematicidal strain ofAspergillus niger[J]. Journal of Chemical Ecology， 1994， 20（1）：33-43.

[22]JANG J Y， YONG H C， SHIN T S， et al. Biological Control ofMeloidogyne incognita byAspergillus nigerF22 producing oxalic acid [J/OL]. PLoS ONE， 2016， 11（6）：e0156230.

[23]KIM T Y， JANG J Y， JEON S J， et al. Nematicidal activity of kojic acid produced by Aspergillus oryzae againstMeloidogyne incognita[J]. Journal of Microbiology & Biotechnology， 2016， 26（8）：1383-1391.

[24]LIANG Lianming， MENG Zhaohui， YE Fengping， et al. The crystal structures of two cuticle-degrading proteases from nematophagous fungi and their contribution to infection against nematodes [J]. FASEB Journal： Official Publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology， 2010， 24（5）：1391-1400.

[25]SZAB M， CSEPREGI K， GLBER M， et al. Control plant-parasitic nematodes withTrichoderma species and nematode-trapping fungi： The role of chi18-5， and chi18-12， genes in nematode egg-parasitism [J].Biological Control，2012，63（2）：121-128.

[26]CHEN Leilei， LIU Lijun， SHI Mei， et al. Characterization and gene cloning of a novel serine protease with nematicidal activity fromTrichoderma pseudokoningii SMF2 [J]. FEMS Microbiology Letters， 2009， 299（2）：135-142.

[27]WANG Jieping， WANG Jiaxu， LIU Fan， et al. Enhancing the virulence ofPaecilomyces lilacinus againstMeloidogyne incognita eggs by overexpression of a serine protease [J]. Biotechnology Letters， 2010， 32（8）：1159-1166.

[28]BILLS G F， YUE Q， CHEN L， et al.Aspergillus mulundensis sp.nov.， a new species for the fungus producing the antifungal echinocandin lipopeptides， mulundocandins[J]. The Journal of Antibiotics， 2016， 69（3）： 141-148.

[29]HE Fei， SUN Yulin， LIU Kaisheng， et al. Indole alkaloids from marine-derived fungus Aspergillus sydowiiSCSIO 00305[J]. Journal of Antibiotics， 2012， 65（2）： 109-111.

[30]KAUR A， RAJA H A， DARVEAUXB A， et al. New diketopiperazine dimer from a filamentous fungal isolate ofAspergillus sydowii[J].Magnetic Resonance in Chemistry，2015，53（8）： 616-619.

[31]TRISUWAN K， RUKACHAISIRIKULV， KAEWPETM， et al. Sesquiterpene and xanthone derivatives from the sea fan-derived fungus Aspergillus sydowii PSU-F154[J]. Journal of Natural Products， 2011， 74（7）： 1663-1667.

[32]ALVARENGAN， BIROLLIW G， SELEGHIMM H R， et al. Biodegradation of methyl parathion by whole cells of marine-derived fungiAspergillus sydowiiandPenicillium decaturense[J]. Chemosphere， 2014， 117（1）： 47-52.

[33]LOPES B P， EGEA T C， MONTEIROD A， et al. Evaluation of diuron tolerance and biotransformation by fungi from a sugarcane plantation sandy-loam soil[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry， 2016， 64（49）： 9268-9275.

[34]BIROLLI W G， ALVARENGAN， SELEGHIMM H R， et al. Biodegradation of the pyrethroid pesticide esfenvalerate by marine-derived fungi [J]. Marine Biotechnology， 2016， 18（4）： 511-520.

[35]TIAN Jiang， DONG Qiaofeng， YU Chenlei， et al. Biodegradation of the organophosphate trichlorfon and its major degradation products by a novelAspergillus sydowii PA F-2 [J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry， 2016，64（21）：4280-4287.

[36]YU D S，SONG G，SONG L L，et al.Formaldehyde degradation by a newly isolated fungusAspergillus sp.HUA [J].International Journal of Environmental Science and Technology，2015，12（1）： 247-254.

（責(zé)任編輯：田 喆）