刺五加不同部位的乙醇提取物成分分析

胡勇超 符群

摘? 要：目的：對刺五加不同部位的乙醇提取物進行成分測定分析。方法：以刺五加根、莖、葉、果為研究對象，選擇75%乙醇為提取溶劑，用超聲波輔助法提取刺五加的有效成分，采用紫外可見分光光度法對刺五加不同部位的有效成分含量進行測定，并對比分析。結果：刺五加不同部位乙醇提取物的有效成分存在顯著差異，其多酚含量由高到低依次為：葉>果>根>莖;黃酮含量由高到低依次為：葉>根>果>莖;多糖含量由高到低依次為：果>莖>葉>根;總皂苷含量由高到低依次為：根>莖>果>葉。刺五加不同部位醇提物的抗氧化性由高到低依次為：葉>根>果>莖。結論：從實際應用角度分析，刺五加的根、莖、葉、果均具有一定的藥用價值，可根據其含量高低和抗氧化性有針對性的進行開發利用。

關鍵詞：刺五加;乙醇提取物;成分分析

中圖分類號：S567.19;R285.5;TQ464 文獻標識碼：A 文章編號：1006-8023（2018）06- 0001-06

Analysis of the Components in Ethanol Extracts from Different Parts of Acanthopanax Senticosus

HU Yongchao1， FU Qun2*

（1. McCain Foods （Harbin） Co.Ltd， Harbin 150040; 2. College of Forestry， Northeast Forestry University， Harbin 150040）

Abstract： The components of ethanol extract from Acanthopanax senticosus were analyzed. Taking Acanthopanax root， stem， leaf and fruit as research objects， 75% ethanol was used as the extraction solvent， and the effective components of Acanthopanax senticosus were extracted by ultrasonic assisted method. The contents of Acanthopanax senticosus were determined by UV spectrophotometry and the data were compared and analyzed. The effective contents of ethanol extract from Acanthopanax senticosus were significantly different， and the content of polyphenols was from high to low： leaf> fruit> root> stem; flavonoid content from high to low： leaf> root> fruit; the contents of total saponins from high to low were as follows： root> stem> fruit> leaf. The antioxidant properties of the extracts from Acanthopanax senticosus were as follows： leaf> root> fruit> stem. From the application point of view， the roots， stems， leaves and fruits of Acanthopanax senticosus have certain medicinal value， and can be developed and utilized according to their contents and antioxidant.

Keywords： Acanthopanax senticosus; ethanol extract;component analysis

刺五加（Acanthopanax senticosus （ Rupr.et Maxim.）? Harms），又名五加參，為五加科（Araliaceae）五加屬多年生落葉灌木，主要分布在俄羅斯東部邊緣地區、日本的北海道、朝鮮以及我國的東北、河北、山西等地[1-2]。刺五加的藥用價值較高，屬傳統中藥的一種，其具有味辛、微苦、性溫和無毒等特點[3]。研究表明，刺五加具有多種活性成分，不僅具有活血、抗腫瘤、抗癌、抗病毒、補腎、安神、有助于睡眠和益氣健脾的功效[4-6]，而且還可以治療心血管疾病、糖尿病和神經衰弱等癥[7-8]。

近幾年來，隨著刺五加資源在食品、醫藥等行業的應用范圍不斷擴大，其需求量也日益增多，現全國年需求量已達到幾十萬噸以上。但對刺五加應用和研究相對較多的部位多集中于根和果實，對于刺五加其它部位的研究相對較少。例如，目前對于刺五加根中化學成分的研究，見于文獻報道的主要有苷類化合物和黃酮類化合物[9-10]，對刺五加果實中多糖提取的相關研究也較多[11-12]，但對于刺五加不同部位多種有效成分的含量的研究卻未見報道。若能將刺五加不同部位多種有效成分進行測定分析，并有針對性的開發利用，將在一定程度上緩解市場上刺五加資源需求量大，供應緊張的問題。

本研究通過對刺五加根、莖、葉、果中的多酚、黃酮、多糖和總皂苷的含量進行測定分析比較，以其對北方林區刺五加資源有針對性的綜合開發利用、保護刺五加資源以及刺五加新產品的研制提供一定的理論基礎。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

試驗原料：同植株的刺五加果實、葉片、根、莖（樣本采集自黑龍江省蘿北縣）。

主要試劑：蘆丁、乙腈、紫丁香苷、刺五加苷E、沒食子酸、1，10-鄰二氮菲、脂溶性維生素E、水溶性維生素C、鐵氰化鉀、對氨基苯磺酸、鹽酸萘乙二胺、DPPH、鄰苯三酚和乙醇等，試劑均為分析純。

T6型號新世紀紫外可見分光光度計（北京普析通用儀器有限責任公司）;FW100高速萬能粉碎機（天津泰斯特儀器公司）;電子天平YP200IN;DHG9240A電熱恒溫鼓風干燥箱（上海索域設備有限公司）;1204型分析天平（上海卓精電子科技有限公司）;旋轉蒸發儀R-205B（上海申勝儀器公司）;TGL-16G高速離心機（上海安亭科學儀器廠）;Multi N/C 2100S總有機碳;FD-1型真空冷凍干燥機（北京博醫康試驗儀器有限公司）;KQ-500DE臺式數控超聲波清洗器（昆侖市超聲波儀器有限公司）。

1.2 試驗方法

1.2.1 樣品的處理

將刺五加果實、葉片、根和莖去除雜質，洗凈，烘干至恒重，分別粉碎過60目，篩上物重新粉碎，直至全部過60目篩，分別收集全部篩下物備用。

1.2.2 對刺五加不同部位活性成分的提取

分別精密稱取刺五加果、根、莖、葉粉碎物9 g，分別以300 mL的75%乙醇浸泡，過夜，置超聲提取器中提取（T = 30 ℃，W = 100 KHz），超聲時間20 min，在3000 r/min下離心10 min，分別取上清液和沉淀物，重復提取操作3次，合并3次的上清液，上清液進行真空旋轉蒸發去除溶劑后進行冷凍干燥備用。

1.2.3 刺五加不同部位提取物中主要成分的含量測定

1.2.3.1 多酚含量的測定

（1）多酚標準曲線的繪制

精密稱取對照品沒食子酸4.0 mg，用甲醇溶解于100 mL容量瓶，制成濃度為0.04 mg/mL的標準品溶液，備用。分別取0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 mL標準品溶液置于25 mL容量瓶中。采用福林酚法測定多酚并繪制標準曲線。以對照品的質量（m）為橫坐標，吸光度（A）為縱坐標進行標準曲線的繪制，由標準曲線可知，沒食子酸含量與吸光度之間的線性回歸方程為y = 8.306 3 x - 0.070 31，其相關性系數R2為0.998 37，線性關系較好。

（2）樣品多酚的測定方法

分別取刺五加根、莖、葉、果的醇提物凍干粉20 mg用甲醇定容至10 mL，即配制成2 mg/mL的刺五加提取物溶液。精密吸取刺五加根、莖、葉、果的提取物溶液0.5 mL，按照上述標準曲線的制備方法進行試驗操作測定其含量，并進行3組平行試驗。

1.2.3.2 黃酮含量的測定

（1）黃酮標準曲線的繪制

分別精密量取蘆丁對照品溶液0.0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，將其移入25 mL容量瓶中，采用硝酸鋁顯色發法，分別以濃度（mg/ml）為橫坐標，吸光度值（A）為縱坐標進行標準曲線的繪制，由所得標準曲線可知，濃度與吸光度之間的線性回歸方程為y = 9.842 2 x - 0.001 46，其相關性系數R2為0.998 69，線性關系較好。

（2）樣品黃酮的測定方法

分別取刺五加根、莖、葉、果的醇提物凍干粉20 mg加入10 mL容量瓶中，以80%乙醇定容，即配制成2 mg/mL的刺五加提取物溶液。各取1 mL刺五加根、莖、葉、果的提取物溶液進行黃酮含量的測定，按照黃酮標準曲線的制作方法進行試驗，并進行3組平行試驗。

1.2.3.3 多糖含量的測定

采用苯酚-硫酸法測定。

（1）多糖標準曲線的繪制

精確稱取105 ℃干燥后的葡萄糖103.8 mg，加蒸餾水溶解，定容至100 mL。得質量濃度為1.038 mg/mL 的葡萄糖標準溶液。分別精確量取0、1.0、3.0、5.0、7.0、9.0和11.0 mL 的葡萄糖標準液，置于100 mL的容量瓶，加水定容至100 mL，搖勻。采用苯酚-硫酸法繪制標準曲線。以吸光度（A）為縱坐標，質量濃度C（mg/mL）為橫坐標進行標準曲線的繪制，由所得標準曲線可知，葡萄糖濃度與吸光度之間的線性關系為y = 13.045 x - 0.023 54，其相關性系數R2為0.998 13，線性關系較好。

（2）樣品多糖的測定方法

分別取刺五加根、莖、葉、果的醇提物凍干粉10 mg用蒸餾水定容至100 mL，即配制成0.1 mg/mL的刺五加提取物溶液。精密吸取刺五加根、莖、葉、果的提取物溶液2 mL，按照上述標準曲線的制備方法進行試驗操作測定其含量，并進行3組平行試驗。

1.2.3.4 總皂苷含量的測定

按照趙萍的方法加以改動進行試驗[13]，有研究發現，齊墩果酸型的皂苷在刺五加中含量較多，而且皂苷類這些主要是以齊墩果酸為配基的三萜皂苷的化合物形式存在。因此，試驗采用齊墩果酸為對照品。

（1）標準曲線的繪制

精確稱取齊墩果酸對照品10 mg，用乙醇溶解，制得1 mg/mL的標準溶液。分別移取0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mL，用乙醇定容至0.5 mL，然后再加入0.5 mL 的8%香草醛-乙醇溶液、0.5 mL 的77%硫酸溶液，搖勻，于60 ℃恒溫水浴10 min，冷卻，于538 nm處測定吸光度，同時，以乙醇溶液作為空白對照。以對照品濃度為橫坐標，吸光度（A） 為縱坐標，進行標準曲線的繪制，由所得標準曲線可知，齊墩果酸濃度（μg/mL）與吸光度之間的線性回歸方程為y = 40.56 x + 0.003，其相關性系數R2為0.999 0，線性關系較好。

（2）樣品總皂苷的測定方法

用分析天平稱經過醇提物凍干粉50 mg加入500 mL容量瓶中用80%乙醇定容至刻度，即配制成0.1 mg/mL的樣液。量取樣品溶液2 mL，按照上述標準曲線的制備方法進行試驗操作測定其含量，并進行3組平行試驗。

1.2.4 刺五加不同部位提取物對DPPH自由基清除能力的測定

首先用無水乙醇將DPPH配制成0.3 mmol/L的溶液。用分析天平稱經過醇提物凍干粉50 mg加入500 mL容量瓶中用80%乙醇定容至刻度，即配制成0.1 mg/mL的樣液。用移液管從提取物溶液中分別移取體積為0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2、6.4 mL于10 mL容量瓶內，用80%乙醇配制成濃度分別為 0.005、0.01、0.02、0.04、0.08、0.16、0.32、0.64 mg/mL的刺五加提取物溶液，待用。將配制好的的刺五加葉總提液按ABC加入反應溶液（取3組做平行試驗），在整個操作過程需避光，加入反應液后搖勻，需密封避光反應30 min，釆用無水乙醇作為空白對照，利用紫外分光光度計在波長515 nm處測定吸光度值。以VC為參照。

DPPH清除率% =[A -（B-C）]/A×100%。

式中：A為3 mL無水乙醇+3 mLDPPH溶液;B為3 mL樣品溶液+3 mLDPPH溶液;C為3 mL樣品溶液+3 mL無水乙醇。

1.3 統計分析

應用Origin 7.5軟件;Microsoft Excel 2003處理數據。

2 結果與分析

2.1 刺五加不同部位主要活性物質含量的測定結果分析

2.1.1 刺五加不同部位的多酚含量分析

按照1.2.3.1的方法，分別測定刺五加根、莖、葉、果中的多酚含量，結果見表1。

植物多酚是一類廣泛存在于植物皮、木、根、葉及果實中的多羥基酚類化合物，大量研究表明，植物多酚具有抗菌、抗氧化、抗癌和抗心血管疾病等療效，目前在食品、藥品和化妝品等行業普遍應用[14-15]。由表1可以看出，在相同的提取條件下，刺五加不同部位中多酚含量存在顯著差異，其中刺五加葉中多酚含量最高，可達到160.2 mg，刺五加莖中多酚含量最低，僅為15.3 mg。刺五加果中多酚含量雖然僅次于刺五加葉，但是其含量僅為刺五加葉的三分之一。因此，今后在對刺五加中多酚物質進行提取應用時可有針對性的選用刺五加葉作為提取原料，這在一定程度上可以起到保護刺五加資源、提高提取率的作用。

2.1.2 刺五加不同部位的黃酮含量分析

按照1.2.3.2的方法，分別測定刺五加根、莖、葉、果中的黃酮含量，結果見表2。

由表2可以看出，黃酮類物質在刺五加的根、莖、葉、果中均有存在，但在不同部位其含量和分布存在不同，這與Hu HB的研究結果相一致[16]。本試驗結果表明，在相同的提取條件下，刺五加不同部位中黃酮含量存在顯著差異。其含量由高到低依次為：葉>根>果>莖;黃酮得率由高到低依次為：葉>根>果>莖。這與劉江亭[17]、屈躍剛[18]等人的研究結果相一致，刺五加黃酮類活性物質主要存在于刺五加葉和根系統中，其中刺五加葉中黃酮含量最高。由于黃酮類活性物質具有抗氧化、抗自由基等藥理作用以及預防和治療人類的心血管疾病的功效，因此，在生產制造黃酮類藥物時可有針對性的選取刺五加葉和根作為提取原料。

2.1.3 刺五加不同部位的多糖含量分析

按照1.2.3.3的方法，分別測定刺五加根、莖、葉、果中的多糖含量，結果見表3。

由表3可以看出，刺五加中多糖是刺五加眾多活性成分中含量較多、分布較廣的物質之一，其廣泛的存在于刺五加的不同部位中。試驗結果表明，在相同的提取條件下，刺五加不同部位中多糖含量存在顯著差異。其含量由高到低依次為：果>莖>葉>根;多糖得率由高到低依次為：果>莖>葉>根。這與Li Z F等人的研究結果一致[19]，刺五加多糖類物質與黃酮類物質的分布類似，在整株植株中都有分布，且在刺五加果實中含量最高，可達到刺五加莖中多糖的2倍，刺五加根中多糖的4倍之多。因此，在制備刺五加多糖類藥物制劑時，可優先挑選刺五加果實作為多糖提取原料。

2.1.4 刺五加不同部位的總皂苷含量分析

按照1.2.3.4的方法，分別測定刺五加根、莖、葉、果中的總皂苷含量，結果見表4。

由表4可以看出，雖然刺五加中總皂苷類物質是刺五加最重要的活性物質之一，具有抗氧化、抗衰老、提高記憶力、治療高血壓、預防心腦血管疾病的功效，但刺五加中總皂苷含量與多糖類物質和黃酮類物質相比，相對較少，在總皂苷含量最高的刺五加根中其含量僅為21.306 mg。這與郭冷秋等人的研究結果相一致[20]。試驗結果表明，在相同的提取條件下，刺五加不同部位中總皂苷含量存在顯著差異。其含量由高到低依次為：根>莖>果>葉;多糖得率由高到低依次為：根>莖>果>葉。這與王一涵等人的研究結果相一致[21]，刺五加總皂苷含量在刺五加根和刺五加莖中相對較高，分別占干藥材重量的0.6% ～ 0.9%和0.6% ～ 1.5%。因此，在刺五加總皂苷提取以及制備相關藥物時，可優先選擇刺五加根和莖作為原料，這在一定程度上可提高刺五加總皂苷的產出率。

2.1.5 刺五加不同部位的提取物抗氧化活性研究

按照1.2.4的方法，分別測定刺五加根、莖、葉、果乙醇提取物的DPPH清除率，結果如圖1 所示。

由圖1可以看出，刺五加不同部位的乙醇提取物對DPPH自由基都有一定的清除能力，而且清除能力均先隨著樣液濃度的增加而逐漸增強，達到一定濃度后，隨著樣液濃度的增加而趨于平緩。但不同部位提取物之間的清除能力存在顯著差異。這表明刺五加不同部位的醇提物都具有一定的抗氧化性，但抗氧化能力大小存在差異。根據試驗結果可知，刺五加不同部位的醇提物抗氧化性由高到低依次為：葉>根>果>莖。這可能是因為刺五加葉和根的醇提物中黃酮含量相對較高，而黃酮類物質具有較高的抗氧化性[22]，所以表現為對DPPH清除效果較好，這與前文中的研究結果相一致。

3 結論

本研究采用超聲輔助乙醇提取法對刺五加不同部位的有效成分進行提取制備，采用紫外可見分光光度法對刺五加不同部位有效成分中的多酚、黃酮、多糖和總皂苷含量進行測定分析，并比較了刺五加不同部位的提取物抗氧化活性。試驗結果表明，刺五加中多糖含量遠遠高于其它3種物質，而多酚和黃酮含量相近，總皂苷含量最低。刺五加不同部位乙醇提取物的有效成分間存在顯著差異，具體表現為：刺五加不同部位中多酚含量由高到低依次為：葉>果>根>莖;黃酮含量由高到低依次為：葉>根>果>莖;多糖含量由高到低依次為：果>莖>葉>根;總皂苷含量由高到低依次為：根>莖>果>葉。刺五加不同部位醇提物的抗氧化性由高到低依次為：葉>根>果>莖。從實際應用角度分析，在刺五加類藥品和保健食品制備過程中，可根據不同部位不同物質含量的高低及抗氧化性大小有針對性的選擇利用，這對提高刺五加資源的利用率具有重要的意義。

【參 考 文 獻】

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