靈景口服液的制備工藝研究

李書貞，吳偉東，李遠(yuǎn)文，莫全毅

(深圳技師學(xué)院 應(yīng)用生物系，廣東 深圳 518116)

靈景口服液是以紅景天、靈芝為主要原料生產(chǎn)的口服制劑，具有抗疲勞，提高機(jī)體免疫力等功效。其中紅景天主要有抗疲勞、抗輻射和抗缺氧等功效，紅景天的主要成分為紅景天苷和酚醇等化合物，還含有18種氨基酸(包含了人體必需的8種氨基酸)，35種無機(jī)元素以及15種人體必需的宏量和微量元素，其根莖中還含有維生素A、C、D、E、B1、B2、B6，其中維C的含量比蘋果高15倍，比柑桔多2.7倍，并蘊(yùn)含大量具有抗衰老作用的活性物質(zhì)及豐富的營養(yǎng)物質(zhì)[1]。靈芝化學(xué)成分主要含麥角甾醇0.3%～0.4%，真菌溶菌酶及酸性蛋白酶、L-甘露醇、浠醇。在水溶性提取液中含有水溶性蛋白質(zhì)，天門冬氨酸、谷氨酸、精氨酸、賴氨酸、亮氨酸、丙氨酸、色氨酸、蘇氨酸、脯氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、絲氨酸等多種氨基酸，多肽及多糖類。尚含樹脂、內(nèi)酯、香豆精等。經(jīng)過科研機(jī)構(gòu)數(shù)十年的現(xiàn)代藥理學(xué)研究證實(shí)，靈芝對于增強(qiáng)人體免疫力，調(diào)節(jié)血糖，控制血壓，輔助腫瘤放化療，保肝護(hù)肝，促進(jìn)睡眠等方面均具有顯著療效[2]。在傳統(tǒng)中藥劑型中，中藥口服液具有療效好、起效快、作用強(qiáng)、使用方便、安全可靠的特點(diǎn)。本文采用正交試驗(yàn)設(shè)計方法，以功效成分紅景天苷[3]含量為測定指標(biāo)，重點(diǎn)對靈景口服液的制備工藝進(jìn)行研究，以尋找最佳的產(chǎn)品制備方法。

1 儀器與試藥

口服液灌裝機(jī)(楚天-YGZ16/25型)；超聲波振蕩器(寧波金達(dá)超聲波儀器廠JD-600R型)；高效液相色譜儀(安捷倫-1260型)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海愛朗儀器有限公司SB-1100型)；真空泵(鞏義市予華儀器有限公司SHZ-D型)；離心機(jī)(常州國華有限公司800型)；電子分析天平(梅特勒-托利多儀器有限公司AB-S/A型)；電爐；恒溫恒濕實(shí)驗(yàn)儀(臺灣楊程儀器工業(yè)公司)；pH計(梅特勒-托利多國際貿(mào)易(上海)有限公司 PHS-3C型)；中藥材紅景天、靈芝均由深圳市前海千金方有限公司購進(jìn)，甲醇(廣東廣試試劑科技有限公司)；紅景天苷對照品(上海金穗生物科技有限公司，含量99.9%)。

2 實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果

2.1 有效成分紅景天苷含量的測定

2.1.1 照高效液相色譜法(通則0512)測定[4]

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以V(甲醇)∶V(水)=15∶85為流動相;檢測波長為275nm。理論板數(shù)按紅景天苷峰計算應(yīng)不低于2000。

2.1.2 對照品溶液的制備

取紅景天苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每lmL含0.5mg的溶液，即得。

2.1.3 供試品溶液的制備:

取本品10mL，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇10mL，密塞，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.1.4 測定法

分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μL，注人液相色譜儀，測定，即得。

2.2 方法

2.2.1 正交試驗(yàn)法優(yōu)選中藥材提取工藝

中藥材提取工藝的正交試驗(yàn)篩選[5]，選擇影響提取效果的主要因素：加水量(A)、提取時間(B)、提取次數(shù)(c)作為考察對象，以紅景天苷含量為評價指標(biāo)，每個因素確定不同的水平進(jìn)行試驗(yàn)，確定考察因素和范圍如表1。

表1 中藥材提取工藝因素水平表

選擇 L9(34)表，分別稱取處方量的中藥材，按照實(shí)驗(yàn)設(shè)計所定條件，平行操作條件下，進(jìn)行中藥材提取，按紅景天苷含量測定方法分別測定樣品中紅景天苷的含量。每實(shí)驗(yàn)號的實(shí)驗(yàn)按試驗(yàn)方法重復(fù)測定3次，3次重復(fù)所得結(jié)果取平均值作為該實(shí)驗(yàn)號的結(jié)果，結(jié)果見表2。

表2 中藥材提取工藝實(shí)驗(yàn)設(shè)計及實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表2(續(xù))

K1、K2、K3分別為各因素1、2、3水平的平均紅景天苷含量；R為平均紅景天苷含量的極差。

圖1 靈景口服液樣品高效液相色譜圖

結(jié)果分析：從表2數(shù)值進(jìn)行直觀分析，以最大紅景天苷含量為判斷標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)選擇A2B2C3，不同因素對結(jié)果影響強(qiáng)弱順序?yàn)椋篈2>A3>A1,B3>B2>B1,C3>C2>C1。同時，從R值可以看出，A、C因素較為重要，應(yīng)選A因素的2水平和C因素的3水平，B因素不同水平之間的影響不太明顯，從實(shí)際生產(chǎn)考慮，應(yīng)選B因素的1水平，從而初步認(rèn)為中藥材提取最佳工藝條件為A2B1C3。即加10倍量水，提取4次，40min/次。以表2數(shù)據(jù)繼續(xù)進(jìn)行提取工藝對紅景天苷含量影響的顯著性分析，結(jié)果見表3。

表3 中藥材提取工藝實(shí)驗(yàn)顯著性分析表

注：*表示差異顯著(P<0.05)

從表3中結(jié)果可見：影響因素強(qiáng)弱順序?yàn)镃>A>B,因素A和C的水平變化對實(shí)驗(yàn)結(jié)果有高度顯著影響，因素B的水平變化對實(shí)驗(yàn)結(jié)果無影響。確認(rèn)靈景口服液中藥材的最佳提取工藝條件應(yīng)為A2B1C3，即加10倍量水，提取4次，40min/次。這與直觀分析法所得的結(jié)果一致。

2.2 靈景口服液制備工藝

根據(jù)選取的中藥材提取工藝，設(shè)計靈景口服液制備工藝如下：

紅景天、靈芝兩味中藥揀除雜質(zhì)后，粉碎成粗粉，加水浸潤30分鐘min后超聲波提取，加水10倍量超聲提取4次，每次40min。合并提取液，用80目篩網(wǎng)粗濾，離心(4000 r/min)15min，取上清液減壓濃縮，濃縮液再次離心(4000r/min)15min，取上清液配液，用純化水定容至規(guī)定量，灌裝、滅菌即得成品。

2.3 工藝驗(yàn)證

(1) 按照靈景口服液制備工藝進(jìn)行驗(yàn)證，重復(fù)制備3批產(chǎn)品，直觀觀察產(chǎn)品為紅棕色液體且無沉淀生成，按紅景天苷含量測定方法測定功效成分紅景天苷含量為(5.2±0.05)mg/10mL,均符合產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，且重現(xiàn)性良好。

(2) 穩(wěn)定性[6]實(shí)驗(yàn) 通過加速實(shí)驗(yàn)依法考察其密度、pH值、含量的變化情況，以確定產(chǎn)品的穩(wěn)定性。將本品按上市包裝，在40℃及75%的相對濕度的條件下進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，放置6個月，在0，1，2，3，6月末分別取樣，按質(zhì)量檢測方法進(jìn)行檢測，均符合標(biāo)準(zhǔn)。檢測結(jié)果見(表4)。

表4 樣品加速實(shí)驗(yàn)考察結(jié)果

3 討論

如何保證其功效成分紅景天苷的含量及其它多糖類有效成分不被分解，是本產(chǎn)品生產(chǎn)工藝的關(guān)鍵點(diǎn)。本文首選了超聲提取的工藝，采用正交試驗(yàn)設(shè)計方法，以紅景天苷含量為測定指標(biāo)，來確定靈景口服液制備工藝。超聲波輔助提取法作為一種天然產(chǎn)物活性成分分離提取的新技術(shù)，其原理是利用超聲波的空化作用加速植物有效成分的溶出，從而達(dá)到提取目的，具有提取溫度低、高效、方便的特點(diǎn)，并且具有較高的實(shí)用價值 。在制備工藝濃縮方面選擇了減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，滅菌工藝選擇微波隧道式滅菌，可以最大限度保護(hù)多糖類成分不被高溫分解。按照實(shí)驗(yàn)篩選出來的制備工藝對成品進(jìn)行了工藝驗(yàn)證和穩(wěn)定性試驗(yàn)，試驗(yàn)數(shù)據(jù)證明該工藝條件穩(wěn)定可行。

[1] 李鳳林，呂艷榮，宮敬利，等.高山紅景天提取抗疲勞作用研究[J].江蘇調(diào)味副食品，2013(4):34-37.

[2] 毛 健，馬海樂.靈芝多糖的研究進(jìn)展[J].食品科學(xué),2010,31(1):295-299.

[3] 韓雪嬌，郭 娜，朱美宣，等.紅景天苷藥理作用及其作用機(jī)理研究進(jìn)展[J].中國生化藥物，2015(1)：171-175.

[4] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(四部)[M].北京；中國醫(yī)藥出版社,2015.

[5] 劉佩沂,賴岳曉,田素英,等. 正交試驗(yàn)法優(yōu)選肺熱清解口服液的提取工藝[J].中國民族民間醫(yī)藥，2010(08)：54-58.

[6] 徐曉梅，譚本仁，卞益民.中藥口服制劑穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)研究[J].中國藥事，1998(2).