HPLC法測定維吾爾藥養心達瓦伊米西克蜜膏中沒食子酸的含量

司馬義江·阿布都熱西提 黃耀廣

(新疆喀什地區食品藥品檢驗所，新疆 喀什 844000)

養心達瓦依米西克蜜膏俗稱維吾爾醫藥中的速效救心丸， 流傳至今已有 2000 多年的歷史；具有活血化瘀、通絡止痛、鎮靜安神、補腦強心，又能清除異常致病體液，達到標本兼治的功效，臨床廣泛用于心胸作痛、 心悸、 胃虛、 視弱及神經衰弱。處方含麝香、 檀香、 珍珠、 沉香、 西紅花、小檗果、余甘子、紫檀香、 金箔、 銀箔、 琥珀、 香青蘭等 26藥材。以蜜膏服用，方便、快捷、療效充分。養心達瓦依米西克蜜膏治療冠心病穩定性心絞痛[1]，2003 年經國家食品藥品監督管理局批準為國藥準字號產品(國藥準Z65020175，新疆維吾爾藥業有限責任公司)。本文在原標準基礎上[2]建立沒食子酸含量測定標準，報道如下。

1 儀器和試藥

1.1 儀器 Waters-2695型高效液相色譜儀(四元梯度泵、自動進樣器、DAD檢測器)，超聲波溶解儀器(天津超聲波儀器有限公司)，XS-205十萬分之一電子分析天平(Mettler 瑞士)，ME403E電子天平(四川時運成套儀器有限公司)，超純水機(北京格邁科技有限公司)。

1.2 試劑 沒食子酸對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：110831-201204)，甲醇(色譜純美國產)，水為超純水，其余試劑均為分析純，養心達瓦伊米西克蜜膏(新疆維吾爾藥業有限公司批號為0161038，0160622，0161103)。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 Pheomenex Luna C18色譜柱(250×4.6mm×5mm)，柱溫35℃，流動相為甲醇-0.2%磷酸(5:95)為流動相，檢測波長為273nm，流速1.0mL/min[3-4]。分別取樣品溶液和對照品溶液各10μL按上述色譜條件分別進樣測定。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱定沒食子酸對照品11.48mg ， 置 50mL容量瓶中， 加 50 %甲醇溶液使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為沒食子酸對照品儲備液，見圖1。

2.3 供試品溶液的制備 精密稱定供試品1.5g，置具錐形瓶中，密加入50%甲醇溶液50 mL，稱定重量，超聲處理30min，冷卻，再稱定重量，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過，取續濾液，即得，見圖2。

2.4 線性關系的考察 精密量取上述沒食子酸對照品儲備液0mL，2.0mL， 3.0mL， 4.0mL， 6.0mL， 8.0mL，10.0mL置10mL量瓶中，加50%甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，注入液相色譜儀，測定。以進樣濃度為橫坐標、峰面積值為縱坐標繪制標準曲線，得標準曲線方程。沒食子酸：y=3×10-7X+0.0003 R2=0.9998 。

沒食子酸在 0.04592～0.22960 mgL-1范圍內呈良好的線性關系。

2.5 精密度試驗 精密量取對照品溶液(沒食子酸0.13776 mgL-1)，重復進樣5次，每次進樣10μL，求得沒食子酸的RSD 為1.0% ，見表1。

表1 精密度試驗

2.6 重復性試驗 取同一批號的樣品(批號：0161038)精密稱取5份，按樣品含量測定的方法測定沒食子酸的含量，計算RSD，見表2。

表2 重復性試驗

2.7 穩定性試驗 取同一批號(批號0161038)分別在不同時間(0h，2h，12h，24h，36h，48h)用含量測定方法測定，計算沒食子酸的峰面積 ，見表3。

表3 穩定性試驗

2.8 加樣回收率試驗 定回收率。精密稱取已知沒食子酸含量的供試品(批號 0161038，0160622，0161103)每種1.5g，按供試品溶液的制備方法操作，每一批號的制備2份，每1份樣品中精密加入沒食子酸對照品儲備液(0.2296mg/mL)1mL，并進樣10μL測定含量，見表4。

表4 沒食子酸加樣回收率測定

*與對照組相比P>0.05；△與治療前相比P<0.05。

3 樣品的含量測定

取3批不同批號的樣品，按供試品溶液的制備的方法制備供試品溶液，并按色譜條件進行測定，3批樣品含量結果見表5。

表5 沒食子酸含量測定

4 討論

4.1 溶劑及提取方法的選擇 本試驗在制備供試品時曾比較不同提取溶劑 (稀乙醇，70% 乙醇，乙醇，50%甲醇，甲醇) 和不同提取時間 (15，20，30，45，60 min) 對沒食子酸含量的影響，結果以50%甲醇為溶劑，超聲提取 30 min時所得沒食子酸含量高。

4.2 流動相的選擇 甲醇-0.2%磷酸水溶液(5：95)為流動相，樣品色譜中沒食子酸的峰形好，出峰時間比較快，與雜質峰的分離度均大于1.5。

4.3 檢測波長的選擇 取沒食子酸對照品溶液進行190～700nm全波長掃描，在紫外波長273 nm，具有最大吸收峰。

4.4 小結 養心達瓦伊米西克蜜膏中含沒食子酸、槲皮素、蘆丁。本文采用HPLC法測定養心達瓦伊米西克蜜膏中沒食子酸的含量，結果表明，該方法靈敏度高，重現性好，樣品處理簡單，為該制劑質量評價提供了簡捷有效的檢測方法。

[1]熱比古·托乎提. 維藥養心達瓦依米西克蜜膏治療穩定性心絞痛的療效體會[J]. 中國社區醫師, 2011，23:203.

[2]中華人民共和國衛生部藥典委員會編.衛生部藥品標準維吾爾藥分冊[S]．烏魯木齊：新疆科技衛生出版社，1998：177.

[3]國家藥典委員會.中國藥典四部[S].北京：中國醫藥科技出版社，2015：59.

[4]熱孜萬古麗·阿不都熱依木，尼加提·阿不來提.HPLC法測定維吾爾藥依本斯納蜜膏中沒食子酸的含量[J].中國民族醫藥雜志， 2014，20(8):22-24.