5種食藥兩用藥材不同鑒別方法的研究

劉崢，劉金福，2，*，梁寧

（1.天津農學院食品科學與生物工程學院，天津300384；2.天津市農副產品深加工技術工程中心，天津300384；3.天津市中藥飲片廠有限公司，天津300110）

中國素有“食藥同源、食藥同理、食藥同用”的歷 史，《神農本草經》將補虛強壯、延年益壽、無毒或毒性弱、可以久服的藥材劃為“上品”[1]。近年來，藥食兩用中藥材越來越受到人們的親睞，是進行食品或保健品開發的重要原料之一[2]。本論文選擇龍葵、白花蛇舌草等5種食藥兩用中藥材為研究對象，在現有質量標準的基礎上，進一步探索，通過中藥材性狀外觀、顯微鑒別、薄層鑒別和理化分析等方法對其進行定性定量分析，使其質量標準更加完善，有效控制質量，檢驗其真偽，提高食藥兩用藥材檢驗的準確率，提高企業原料使用的準確性及安全性。

圖1 莖表皮細胞和氣孔圖Fig.1 Stem epidermal cells and stomata

圖2 非腺毛結構Fig.2 Non-glandular hair structure

圖3 莖纖維結構Fig.3 Stem fiber structure

圖4 莖導管結構Fig.4 Stem catheter structure

圖5 種皮石細胞Fig.5 Pelitic cell

1 材料

1.1 材料與試劑

龍葵，蛇莓，北敗醬草，白花蛇舌草，牡蠣等5種食藥兩用藥材；河北安國藥材市場，經鑒定為龍葵、蛇莓、敗醬草，白花蛇舌草，牡蠣；水合氯醛：成都市科龍化工試劑廠；石油醚、甲苯、乙酸乙酯、甲酸、三氯甲烷、甲醇：天津市康科德；聚酰胺：天津市光復精細化工；硫酸、鹽酸：化學試劑五廠；木樨草素對照品、熊果酸對照品、白花蛇舌草對照藥材：中國食品藥品檢定研究院；硅膠G薄層板（20 cm×20 cm）：德國默克公司；硅膠G薄層板（10 cm×10 cm）：青島海洋化工廠；硅膠G薄層板（10 cm×20 cm）：煙臺市化學工業研究所。

1.2 儀器與設備

CX41顯微鏡：奧林巴斯；SP-30E薄層色譜點樣器：上海科哲生化科技；ZF-2三用紫外儀：上海安亭電子儀器廠；RE-52A旋轉蒸發儀：上海亞榮生化儀器廠；HK8200超聲清洗器：美國科導；SX-8-10高溫爐：天津市中環實驗電爐有限公司。

2 方法與結果

2.1 顯微鑒別方法研究與建立

2.1.1 龍葵

龍葵（Solanum nigrum L.）在全國均有分布，黑龍江居多，它為一年生草本茄科植物。全草高30 cm～120 cm；莖直立，多分枝；卵形或心型葉子互生，近全緣：球形漿果，成熟后為黑紫色。又名野葡萄、苦菜[3-5]。龍葵與一些茄科植物，其鮮品尚可通過葉形、柔毛的稀密加以區分，但干品卻極其相似，給使用、分辨帶來一定困難，常造成混用和錯用的現象[6]。

2.1.1.1 方法

參照顯微鑒別法[7]試驗。采用粉末制片法，徒手切片法，以水裝片、水合氯醛裝片后進行觀察制成莖、葉橫切片，進行各項顯微特征的觀察；以撕剝法採取了葉的上、下表皮，以水裝片、水合氯醛裝片后進行觀察：取藥材粉末，水裝片觀察淀粉粒，水合氯醛加熱透化，稀甘油裝片觀察其他組織細胞。

2.1.1.2 結果

結果見圖1～圖6。

由圖1～圖6可見，本品粉末黃或黃綠色。莖表皮細胞黃綠色或淺黃棕色，表面觀多角形或類長方形，排列緊密，氣孔為不定式。纖維甚長，直徑22 μm～40 μm，壁稍增厚或較厚，胞腔寬大。莖導管為螺紋、網紋、孔紋或具緣紋孔。種皮石細胞淡黃色至黃色，表面觀多角形，壁厚，波狀彎曲，層紋清晰。顯著的特點：漿果較大（5 mm～6 mm）。非腺毛長 33 μm～324 μm，由3個～4個細胞組成。極少見腺毛，由2個細胞組成，頭部單細胞。莖薄壁組織有含砂晶細胞，含草酸鈣砂晶眾多。

圖6 砂晶細胞Fig.6 Sand crystal cell

2.1.2 蛇莓

蛇莓（Duchesnea indica（Andr.）Focke），薔薇科，多年生草本，全株有柔毛：匍匐莖長。小葉片倒卵形至菱狀長圓形；花單生于葉腋：瘦果卵形，長約1.5 mm，光滑或具不明顯突起，鮮時有光澤。別名地莓、蠶莓等[8-10]。蛇莓與一些植物，如草莓、樹莓等極其相似，在分辨上帶來了一些困難。

2.1.2.1 方法

同“2.1.1.1”。

2.1.2.2 結果

結果見圖7～圖12。

圖7 非腺毛結構（壁有螺狀紋理）Fig.7 Non-glandular hair structure

圖8 非腺毛結構（壁平直）Fig.8 Non-glandular hair structure

圖9 腺毛結構Fig.9 Glandular hairs structure

圖10 葉下表皮細胞和氣孔Fig.10 Epidermal cells and stomata

圖11 葉上表皮Fig.11 On the leaf epidermis

圖12 草酸鈣簇晶Fig.12 Calcium oxalate cluster crystal

由圖7～圖12可見，本品粉末灰綠色，葉表面觀上表皮細胞類多角形，垂周壁平直，排列緊密。下表皮細胞垂周壁波狀彎曲。顯著特點：非腺毛單細胞，長短不一，長 180 μm～1 300 μm，直徑 20 μm～45 μm，壁平直或表面有螺狀紋理。腺毛長60 μm～125 μm，頭部2個細胞，直徑 25 μm～40 μm：柄 2 個～3 個細胞。下表皮氣孔較多，不定式或不等式，葉肉細胞中含草酸鈣簇晶，直徑 10 μm～38 μm。

2.2 薄層鑒別方法研究與建立

2.2.1 北敗醬草

2.2.1.1 方法

供試品溶液的制備：取本品粉末6 g，加石油醚（60℃～90℃）50 ml加熱回流2次，每次40 min，濾過，濾液棄去，殘渣揮去溶劑，加甲醇50 mL加熱回流40 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10 mL溶解，加在處理好的聚酰胺柱上（柱層析用聚酰胺，100目～200目，濕法裝柱。內經2 cm，高4 cm），用水50 mL洗脫，棄去，用50%甲醇20 mL洗脫，棄去，用甲醇50 mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇2 mL使溶解，即得。

對照品溶液的制備：取木犀草素標準品，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，即得。

薄層色譜條件及結果：照薄層色譜法[7]試驗，吸取上述溶液各2 μL～4 μL，分別點樣于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（8 mL∶2 mL∶0.5 mL）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%三氯化鋁乙醇溶液，在105℃加熱約3 min。置紫外光燈（365 nm）下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上顯相同顏色的熒光斑點。

2.2.1.2 結果

結果見圖13、圖14。

圖13 青島薄層板Fig.13 Qing Daothin layer plate

圖14 默克薄層板Fig.14 Merck thin layer plate

從左至右：木犀草素對照品2 μL、北敗醬樣品-1 4 μL、北敗醬樣品-2 4 μL、北敗醬樣品-3 4 μL。硅膠 G高效薄層板。溫度：22.0℃，相對濕度：55%。試驗室：A-1201。試驗日期：2017-4-16。

北敗醬草選用木犀草素作為對照品是合理的，通過薄層方法的建立有效的提取了木犀草素這一成分，不同廠家薄層板展開效果比較，結果均顯色清晰，背景小，斑點規則，證明了該鑒別方法的可行性，為新版《中國藥典》中北敗醬草質量標準的建立提供了參考資料。

2.2.2 白花蛇舌草

2.2.2.1 方法

供試品溶液的制備：取本品粉末1 g，加三氯甲烷15 mL，超聲處理20 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，即得。

對照品溶液的制備：取熊果酸標準品，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，即得。

對照藥材溶液的制備：取白花蛇舌草對照藥材1 g，同供試品溶液的制備方法，制成對照藥材溶液。

薄層色譜條件及結果：照薄層色譜法[7]試驗，吸取上述溶液各2 μL～4 μL，分別點樣于同一高效硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇（9 mL∶0.9 mL）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。置紫外光燈（365 nm）下檢視,供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上顯相同顏色的熒光斑點。

2.2.2.2 結果

結果見圖15、圖16。

圖15 默克薄層板Fig.5 Merck thin layer plate

圖16 煙臺薄層板Fig.16 Yan Tai thin layer plate

從左至右：白花蛇舌草對照藥材2 μL、白花蛇舌草樣品-1 2 μL、白花蛇舌草樣品-2 2 μL、熊果酸對照品2 μL、白花蛇舌草樣品-3 2 μL。硅膠G高效薄層板。溫度：25.0℃，相對濕度：69%。試驗室：A-1201。

白花蛇舌草中萜類化合物是主要成分，三氯甲烷超聲處理有效地提取了白花蛇舌草中的萜類化合物。不同廠家薄層板展開效果比較，結果在薄層板上均顯色清晰，背景小，斑點規則，說明所用方法耐用，重現性較好。該法操作簡便，并為新版《中國藥典》中白花蛇舌草質量標準的建立提供了參考資料。

2.3 牡蠣酸不溶性灰分測定方法研究

2.3.1 試驗方法和結果

2.3.1.1 不同加酸量的比較

為了更好的測定，加入了蛤殼、珍珠母做對比，照灰分測定法[7]試驗,在坩堝中分別加入稀鹽酸（濃度9.5%）10、15、20、25、30 mL。根據殘渣重量，計算供試品中酸不溶性灰分的含量。結果見表1，圖17～圖19。

2.3.1.2 持續加酸比較

照灰分測定法[7]試驗，在坩堝中分別加入稀鹽酸10 mL，進行試驗。再在已恒重的坩堝中加入稀鹽酸5 mL，觀察氣泡產生情況，依照酸不溶性灰分測定法自“用表面皿覆蓋坩堝”起，依法測定。反復上述操作，至加入稀鹽酸后，無明顯氣泡產生為止。根據各次恒重的殘渣重量，計算供試品中酸不溶性灰分的含量。結果見表2。

表1 不同加酸量對酸不溶性灰分含量測定的影響Table1 Different added amount of acid acid insoluble ash component

圖17 不同加酸量對蛤殼酸灰的影響Fig.17 Effects of different acid content on acid insoluble ash of clamshell

圖18 不同加酸量對牡蠣酸灰的影響Fig.18 Effects of different acid content on acid insoluble ash of ostreagigastnunb

圖19 不同加酸量對珍珠母酸灰的影響Fig.19 Effects of different acid content on acid insoluble ash of mother-of-pearl

表2 持續加酸對酸不溶性灰分含量測定的影響Table 2 Effect of the continue adding acid on acid insoluble ash

3 分析與討論

《中國藥典》對多數中藥材進行了整理澄清和規范，以及制定了檢驗指標和限度，但是對關于龍葵、蛇莓等食藥兩用藥材分析手段很少，不利于對它們的研究以及建立有效的質量控制標準體系。通過對龍葵、蛇莓2個品種中藥材顯微鑒別方法的研究，找到了其具有代表性的非腺毛、草酸鈣砂晶等顯著的組織結構特點，可供鑒別參照；通過對北敗醬草、白花蛇舌草2個品種中藥材薄層鑒別方法的研究，以木犀草素作為北敗醬草的標志物和以熊果酸作為白花蛇舌草的標志物，結合地道藥材在層析中顯示的有效成分的比較，可更好的鑒別2種食藥兩用藥材的道地性：一般中藥材為植物或動物類有機物為主，含酸不溶性灰分較少。貝殼類藥材主體為碳酸鈣為主的無機鹽類。碳酸鈣和稀鹽酸反應，產生可溶性鈣鹽，反應中消耗大量鹽酸。而按藥典方法加入10 mL稀鹽酸不能使貝殼類藥材的碳酸鈣反應完全，剩余碳酸鈣會造成酸灰超標。通過對加酸量的比較試驗研究，取樣量3 g，加入稀鹽酸量在20 mL～25 mL，才能達到測定酸不溶性灰分的目的。

4 結論

通過對龍葵、蛇莓、北敗醬草、白花蛇舌草及牡蠣5種食藥兩用中藥材的調查，以道地藥材做比較，加入特征標志物，研究建立了以非腺毛、草酸鈣砂晶作為顯著的結構特點的龍葵、蛇莓的顯微鑒別方法和敗醬草、白花蛇舌草的薄層鑒別方法；通過不同加酸量和持續加酸的試驗研究發現，加入濃度為9.5%稀鹽酸25 mL可以對牡蠣中碳酸鈣成分進行準確分析。本文為進一步完善藥材標準提供了依據，研究的成果也可以用于分析檢測人員的培訓，為快速準確識別食藥兩用中藥材提供參考。

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