兩種微量肉湯稀釋法藥敏板用于沙門菌藥敏檢測結果比較

張曉嬡 崔霞 王迪 陸崢 陳倩

沙門菌是一種重要的腸道致病菌，廣泛存在于自然環境中，通過糞－口途徑傳播，可引起腸胃炎癥狀，嚴重者導致死亡［1］。沙門菌可引起食物中毒散發甚至暴發流行，也能引起院內交叉感染［1］。據WHO統計數據，全球每年有約1 600萬例沙門菌感染病例，其中60萬例死亡［2］。對沙門菌開展耐藥性監測，可以掌握其耐藥性現狀和變化趨勢，進而為臨床用藥策略的調整提供科學依據［3－4］。沙門菌耐藥性監測要求長期監測數據具有穩定性和可比較性，因此，對檢測方法和實驗試劑的重復性、不同品牌試劑檢測結果的一致性要求高，但是目前還沒有關于不同品牌的微量肉湯稀釋藥敏板重復性和一致性的報道。2016年，針對目前我國沙門菌耐藥性監測中使用最廣泛的2種微量肉湯檢測藥敏板，進行結果評價和比較。

1 材料與方法

1.1 實驗菌株 選擇6株不同血清型的沙門菌作為測試菌株進行耐藥性檢測，質控菌株使用大腸桿菌ATCCTM25922。所有菌株均經過生化和血清鑒定，6株沙門菌編號和血清型分別為1阿貢納沙門菌、2山夫登保沙門菌、3腸炎沙門菌、4鼠傷寒沙門菌、5黃金海岸沙門菌、6豬霍亂沙門菌。

1.2 藥敏檢測方法 藥敏試驗采用微量肉湯法(依據2016食源性疾病監測工作手冊)，2種微量肉湯藥敏板分別為上海星佰生物技術有限公司和美國賽默飛世爾科技公司(以下簡稱Thermo)產品，均為革蘭陰性需氧菌藥敏檢測板，檢測藥物包括氨芐西林(ampicillin，AMP)、氨芐西林/舒巴坦(ampicillin/sulbactam，AMS)、四環素(tetracycline，TET)、氯霉素(chloramphenicol，CHL)、頭孢唑啉(cefazlin，CFZ)、甲氧芐胺嘧啶/磺胺甲噁唑(trimethoprim/sulfamethoxazole，SXT)、環丙沙星(ciprofloxacin，CIP)、頭孢他啶 (ceftazidime，TAZ)、亞胺培南(lmipenem，IMP)、萘啶酸(nalidixic acid，NAL)、頭孢西丁(cefoxitin，CFX)、頭孢噻肟(cefotaxime，CTX)和慶大霉素(gentamicin，GEN)，其結果與美國臨床實驗室標準化協會(CLSI)2015年標準比較［5］，以大腸桿菌ATCCTM25922做為質控菌株。

2 結果

2.1 上海星佰藥敏板MIC定量結果和藥物敏感性結果可重復性評價 質控菌株ATCCTM25922除在TET上2次結果存在一個濃度梯度的差異外，其他抗生素2次實驗結果的MIC值完全一致。質控菌株ATCCTM25922的MIC值都在質控范圍內。6株菌的2次實驗結果比較發現有14個孔［14/(13×6)=17.95%］MIC值不一致，均只相差一個濃度梯度。7種抗生素出現了兩次實驗MIC值不相同的現象。這7種抗生素是 TET、TET、CFZ、CIP、CFX、CTX、GEN，分別有 4、3、2、2、1、1、1 株菌出現差異。在藥物敏感性判斷上，菌株1和2的CFZ藥敏性分別出現不一致結果，2次實驗結果分別判斷為耐藥和中介;其余MIC出現差異的實驗孔在藥敏判斷上沒有差異。

2.2 Thermo藥敏板MIC定量結果和藥物敏感性定性結果可重復性評價 質控菌株ATCCTM25922除在TET上2次結果存在一個濃度梯度的差異外，其他抗生素2次實驗結果的MIC值完全一致。質控菌株ATCCTM25922的MIC值都在質控允許范圍內。6株菌的2次實驗結果比較發現有4孔的［4/(13×6)=5.12%］MIC值不一致，均只相差一個濃度梯度。13種抗生素中，有3種出現了2次實驗MIC不相同的現象。這3 種抗生素是 AMS、NAL、CFX，分別有 1、2、1株菌出現差異。MIC出現差異的實驗孔在定性判斷上沒有差異。

2.3 兩種藥敏板檢測結果一致性評價 2種藥敏板對6株沙門菌和質控菌株大腸埃希菌ATCCTM25 922分別開展2次重復實驗，AMP、SXT、CIP、TAZ的2次實驗結果均一致，其余9種抗生素的實驗結果存在差異。質控菌株ATCCTM25 922的AMS MIC值在2種藥敏板的2次重復結果中存在差異。6株沙門菌2種藥敏板的MIC值結果存在差異的孔有26個［26/(13×6×2)=16.67%］，其中2次重復實驗結果均存在差異的實驗孔有15個，一次實驗結果存在差異的實驗孔有11個(表1)。

表1 2種藥敏板MIC值存在差異的抗生素

15個2次重復實驗結果均存在差異的實驗孔一共涉及5種抗生素:AMS(3株)、CHL(5株)、IMP(2株)、NAL(3株)、CFX(2株)。11個一次結果存在差異的實驗孔涉及7種抗生素:AMS、TET、CFZ、NAL、CFX、CTX、GEN。氨芐西林/舒巴坦AMS、NAL 的差異結果中，上海星佰藥敏板比Thermo藥敏板均高1個梯度值;TET、CHL、IMP、CFX、CTX、GEN 的差異結果中，星佰藥敏板比Thermo藥敏板均低1個或者2個梯度值(表1)。在定性判斷上，菌株2的CHL用上海星佰藥敏板兩次實驗均判斷為敏感，用Thermo藥敏板兩次實驗均判斷為中介;菌株2的CFX用上海星佰藥敏板兩次實驗均判斷為中介，用Thermo藥敏板兩次實驗均判斷為敏感(表1)。

3 討論

3.1 國內相關報道顯示，近年沙門菌已成為嬰幼兒細菌性腹瀉的首要病原菌［6，7］。同時，沙門菌耐藥現狀嚴峻，有報道顯示，腹瀉患者分離的沙門菌對氨芐西林、萘啶酸、四環素、哌拉西林三代頭孢類抗生素廣泛耐藥［3-4，8］，而且還出現了耐氨基糖苷類和耐碳青霉烯類抗生素的沙門菌［9，10］。所以，有必要長期連續地開展沙門菌的耐藥監測，一是為臨床檢驗性用藥提供數據支持，其次是可以監測耐藥菌的流行傳播現狀和新耐藥菌的出現。

3.2 紙片擴散法、自動化商業儀器藥敏檢測法、微量肉湯稀釋法是目前廣泛用于耐藥性檢測和監測的藥敏檢測方法。紙片擴散法檢測成本低，但是其檢測結果受到瓊脂、紙片的質量影響較大，結果穩定性和重復性差，準確性低［11］。VITEK 2 Compact儀器藥敏檢測法操作簡單，適用于臨床批量檢測，快速獲得藥敏結果，但是其配套的商業藥敏卡中的藥物濃度梯度范圍小，不利于長期監測耐藥性變化狀況。與其他方法相比，微量肉湯稀釋法檢測結果準確［12］。商業化的微量肉湯稀釋藥敏板實驗操作簡單，既能夠應用于臨床一線檢測，又適用于監測機構開展長期耐藥監測。

3.3 在本研究中，評價了2種常見的微量肉湯稀釋藥敏板。上海星佰藥敏板和Thermo藥敏板的重復性好，但在檢測和監測中應該考慮MIC測定結果存在一個梯度的實驗誤差。2種藥敏板的結果可以綜合在一起分析，但需考慮MIC測定結果一個梯度的實驗誤差。綜上所述，使用這2種藥敏板開展藥敏檢測和監測重復性好，不同批次實驗結果可以進行綜合分析。

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