醫用器械絡合氯消毒液性能研究

李長青 高珊 肖瀟 高迪

醫用器械絡合氯消毒液(由北京萬金兆元消毒技術有限公司提供)是以二氯異氰尿酸鈉為主要殺菌成分，輔助成分為增效劑、穩定劑和緩蝕劑。該器械消毒液為淺黃色有氯氣味的液體，原液有效氯含量為4.90 g/L，pH值為12.74。為研究該消毒劑的消毒性能，在實驗室條件下，于2017年1－6月對其殺滅枯草桿菌黑色變種芽孢效果及影響因素、穩定性、腐蝕性和毒性進行了研究。現將結果報道如下。

1 方法［1］

1.1 穩定性試驗 取密封包裝的器械消毒液原液3份，分別置54℃恒溫箱內存放14 d和37℃存放90 d。于存放前、后分別取樣，測定有效氯含量，計算下降率。

1.2 金屬腐蝕性試驗 將不銹鋼、銅、鋁和碳鋼制成直徑(24±0.2)mm、厚1.0 mm、中間有一直徑2.0 mm小孔的圓片。用120號粒度水砂紙磨去表面氧化層，經洗滌劑浸泡10 min，洗凈;用無水乙醇再次脫脂。置50℃干燥1 h，稱重(精確至0.1 mg)后浸泡于該器械消毒液原液中(200 mL/片)。連續浸泡72 h后，取出金屬片，用蒸餾水和軟毛刷反復洗凈，濾紙吸干，置50℃干燥1 h后稱重，計算腐蝕速率(R)。

1.3 染菌載體制備 取枯草桿菌黑色變種(ATCC 9372)芽孢(由軍事醫學科學研消毒檢測中心提供)。按規定程序培養制備芽孢懸液，用胰蛋白胨肉湯(TSB)制備成試驗濃度芽孢懸液。取芽孢懸液10 μL滴染在無菌不銹鋼圓片上(直徑15 mm、厚0.5 mm)，置37℃溫箱烘干，制成染菌載體菌片備用。

1.4 中和劑鑒定試驗 以枯草桿菌黑色變種芽孢為代表，設6組試驗，按載體定量殺菌試驗程序進行。試驗結果，當第1組不長菌或菌數遠少于第2組，第2組菌數≥100 cfu/片，第3、4、5組組間菌數相差≤10%時，第6組不長菌時，表明所用中和劑及其濃度適宜。

1.5 殺菌試驗 ①載體浸泡定量殺菌試驗。按每個菌片5 mL消毒液用量，將盛有消毒液(陽性對照為PBS)的平皿置19～21℃水浴中恒溫，再將菌片浸入消毒液中。作用至預定時間，將菌片移入含5.0 mL中和劑溶液的試管中，中和作用10 min，經充分振蕩洗脫，取洗脫液或其稀釋液作活菌計數，計算殺滅對數值。試驗重復3次。②載體浸泡定性滅菌試驗。試驗條件和過程同載體浸泡定量殺菌試驗。作用至預定時間，將菌片移入含5.0 mL中和劑TSB溶液的試管中，經充分振蕩混合，置于37℃條件下培養7 d觀察結果。試驗重復5次。結果以陽性對照組有菌生長且回收菌數對照組符合要求，陰性對照組無菌生長，5次試驗均無菌生長為滅菌合格。

1.6 有機物影響試驗 在枯草桿菌黑色變種芽孢懸液中加入體積分數25%和50%小牛血清，用其滴染菌片。用有效氯含量2 000 mg/L的該器械消毒液進行載體浸泡定量殺菌試驗，計算殺滅對數值，觀察有機物對殺菌效果的影響。

1.7 醫療器械模擬現場試驗 ①醫療器械消毒模擬現場試驗。載體為截斷的止血鉗關節部位，將枯草桿菌黑色變種芽孢菌懸液滴染在載體朝上的齒部，干燥后進行試驗。將盛有消毒液(陽性對照為PBS)的平皿置19～21℃水浴上恒溫，按每件樣品浸泡10 mL消毒液用量將染菌載體浸沒于消毒液中。作用至規定時間，分別將染菌載體移入含10.0 mL中和劑溶液的塑料管中，中和作用10 min，經充分振蕩洗脫，取洗脫液或其稀釋液作活菌計數，計算殺滅對數值。重復試驗30份。②醫療器械滅菌模擬現場試驗。試驗條件和過程同醫療器械消毒模擬現場試驗。作用至規定時間，分別將染菌載體移入含10.0 mL中和劑肉湯的試管中進行定性培養7 d。試驗重復3次。

1.8 連續使用穩定性試驗 將清潔的醫用止血鉗置于2 000 mL消毒液中，達滿載要求。每日將止血鉗取出、洗滌、瀝干、在空氣中暴露后再放入，連續使用7 d。分次吸取浸泡后的器械消毒液，作定量和定性殺滅枯草桿菌黑色變種試驗，觀察其殺滅效果變化情況。

1.9 毒理學評價 ①小鼠急性經口毒性試驗:選體重18～22 g清潔級昆明種小鼠20只(由斯貝福(北京)實驗動物科技有限公司提供，實驗動物生產許可證號:SCXK(京)2014－0006)，隨機分成2組，每組10只，雌、雄各半，實驗前禁食(只給飲水)過夜。采用一次最大限度試驗法，設10 000 mg/kg(體質量)1個劑量組，按0.1 mL/10 g(體質量)一次性灌胃給藥。給藥后正常飼養，連續觀察14 d，記錄中毒表現及死亡情況，計算LD50。②小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗:選體質量25～30 g清潔級昆明種小鼠50只(來源同1.9①)，隨機分成5組，每組10只，雌、雄各半。共設 5 000、2 500、1 250 mg/kg(體質量)3 個劑量組，另設陽性對照組給予環磷酰胺40 mg/kg(體質量)，陰性對照組以去離子水灌胃給藥。受試物均采用經口灌胃30 h染毒法，在0、24 h各給藥1次。第二次給藥后6 h，常規取胸骨制片固定、染色，于油鏡下對每只動物觀察1 000個嗜多染紅細胞(PEC)，記錄觀察200個PEC同時出現的成熟紅細胞數(NEC)，計算微核細胞率，并采用χ2檢驗進行統計分析。

2 結果

2.1 穩定性試驗結果 經檢測，該器械消毒液原液有效氯含量為4.90 g/L，經54℃恒溫存放14 d后，有效氯含量下降率平均為3.47%;經37℃恒溫存放90 d后，有效氯含量下降率平均為7.76%。

2.2 金屬腐蝕性試驗結果 用該器械消毒液原液浸泡金屬片72 h后，對不銹鋼、碳鋼、銅、鋁片平均腐蝕速率依次為0.000 0、0.004 8、0.001 5 和0.0 046 mm/a;結果表明，該器械消毒液對以上四種金屬基本無腐蝕。

2.3 中和劑試驗結果 用含5 g/L硫代硫酸鈉、10 g/L吐溫－80的PBS作為中和劑，可有效中和含有效氯為4 000 mg/L的該器械消毒液對枯草桿菌黑色變種芽孢的殘留作用，且中和劑、中和產物對試驗菌生長無明顯影響。

2.4 殺菌試驗結果 用有效氯含量為1 000 mg/L該器械消毒液作用10 min，有效氯含量為2 000 mg/L作用5 min，對載體上枯草桿菌黑色變種芽孢的平均殺滅對數值分別為3.31和4.27(表1)。用有效氯含量為2 000 mg/L該器械消毒液作用20 min，有效氯含量為4 000 mg/L作用10 min，對載體上枯草桿菌黑色變種芽孢可達到完全殺滅(表2)。

表1 器械消毒液對枯草桿菌黑色變種芽孢的殺滅效果

表2 器械消毒液載體浸泡定性滅菌試驗結果

2.5 有機物影響試驗結果 在枯草桿菌黑色變種芽孢懸液中加入體積分數25%和50%小牛血清制備染菌載體，經含2 000 mg/L有效氯的器械消毒液作用不同時間，顯示有機物對器械消毒液殺滅枯草桿菌黑色變種芽孢效果有輕度影響(表3)。

表3 有機物對器械消毒液殺滅枯草桿菌黑色變種芽孢的效果影響

2.6 模擬現場試驗結果 結果表明，用有效氯含量為2 000 mg/L該器械消毒液作用10 min，對污染于止血鉗關節部位上枯草桿菌黑色變種芽孢殺滅對數值均＞3.57;有效氯含量為4 000 mg/L作用20 min，對該細菌芽孢可達完全殺滅。

2.7 連續使用穩定性試驗結果 用含有效氯為2 000 mg/L的器械消毒液連續浸泡器械7 d后，取浸泡液進行載體定量殺菌試驗，作用10 min，對污染于止血鉗關節部位上枯草桿菌黑色變種芽孢殺滅對數值均＞3.07。用含有效氯為4 000 mg/L的器械消毒液連續浸泡器械7 d后，取浸泡液進行載體定性殺菌試驗，作用20 min，對該細菌芽孢可達完全殺滅。

2.8 毒性試驗結果 ①小鼠急性經口毒性試驗結果。試驗期內受試動物生長良好、進食正常，無中毒癥狀及死亡，小鼠經口 LD50＞10 000 mg/kg(體質量)，屬實際無毒級。②小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗結果。受試物各劑量組動物微核細胞率均在正常范圍內，陽性對照組微核細胞率與陰性對照組比較，差異有極顯著性(P＜0.01);PCE/NCE均值在正常范圍內;結果表明，微核試驗結果陰性。

3 討論

3.1 以二氯異氰尿酸鈉為主要殺菌成分的該器械消毒液主要采用了增效劑、穩定劑和緩蝕劑復配而成。在堿性條件下(pH＞10)，配方中的某些成分與氯離子形成了絡合物，該絡合物性質比較穩定，與溶液中的次氯酸(HCIO)和次氯酸根(CLO－)保持著動態平衡。配方中的某些成份與氯絡合反應后，在特定條件下，可能在金屬表面形成一種極薄的“鈍化膜”和“氧化膜”物質，使金屬表面的電極電位等于或接近零，這樣金屬表面沒有了電位差，也就停止了電池現象的電子轉移了，從而大大降低了腐蝕性。因而該器械消毒液表現出腐蝕性低、性能穩定、耐儲存，在37℃儲存3個月其有效氯下降率＜10%。

3.2 該器械消毒液屬于含氯消毒劑，由于其pH值比較高，不利于氯的活化［2］，因此殺菌所需有效氯劑量較大。本研究結果表明，該器械消毒液在常規使用濃度下對載體上細菌芽孢具有較好的殺滅效果;經毒性試驗證明屬實際無毒級物質微核試驗結果陰性，毒性低，此可能與產品的配方有關，需進一步研究。

［1］衛生部.消毒技術規范［S］.(2006－02－09).http://www.nhfpc.gov.cn/zhjcj/s9139/200804/86d017920ad84 e64a90806717719624f.shtml.

［2］楊華明，易濱.現代醫院消毒學［M］.北京:人民軍醫出版社，2008:126－130.