BALB/c小鼠全子宮切除模型的建立及機制探討

常鵬環，楊澤妹，林 鈴，陳 霞，林衛瓊，王海燕，林莉香，楊照新

(1.海口市人民醫院婦產科，海口 570208； 2.海南醫學院海南省藥物安評中心，海口 571199)

全子宮切除術是婦科領域常見的手術，但近代研究表明全子宮切除術對卵巢內分泌功能具有一定程度的影響，易造成卵巢功能衰退[1-3]。隨著學者們不斷的深入研究，全子宮切除術實驗動物模型越發受到重視。本實驗以BALB/c雌性小鼠為研究對象，建立全子宮切除術實驗動物模型，并對術后卵巢內分泌功能以及組織形態等指標進行了研究和分析，以探討該模型的優勢及特點，現報道如下。

圖1 全子宮切除術式示例圖Fig.1 Sample pictures of total hysterectomy in the mice

1 材料和方法

1.1 實驗動物

SPF級BALB/c雌性小鼠24只，體重18～20 g，4～6周齡，由湖南斯萊克景達實驗動物有限公司提供[SCXK(湘)2016-0002]；所有動物飼養及無菌手術均在海南省藥物安全性評價研究中心屏障動物實驗設施內進行[SYXK(瓊)2016-0013]。并按實驗動物使用的3R原則給予人道關懷，福利倫理審查證號2017006DE。

1.2 主要試劑及儀器

Estradiol Parameter Assay KIT(KGE014，美國RD公司)；Multiskan FC型全波段酶標儀(Thermo Scientific)；VIP 3000 型氣體麻醉系統(美國Matrx公司)。

1.3 實驗分組及模型建立方法

將BALB/c雌性小鼠隨機分為空白對照組，假手術組和模型組，每組8只；空白對照組不予任何處理，常規飼養；模型組采用MatrxVIP3000型氣體麻醉系統對實驗動物進行持續氣體麻醉，麻醉劑為異氟烷[4-5]。待動物麻醉平穩后，取仰臥位，常規消毒腹部皮膚，于下腹正中橫切約0.5 cm的切口(見圖1 A)，暴露子宮，分離左右側雙角子宮，在子宮角與卵巢連接處剪斷子宮，并完整剝離子宮，切勿損傷卵巢及與子宮伴行的血管(見圖1B)。然后在子宮頸口與陰道連接部位，先用0-1號手術線進行結扎(見圖1C)，在子宮頸結扎部位上方剪下子宮(見圖1D)，關閉腹腔，縫合皮膚并消毒(見圖1E)；假手術組麻醉后僅切開皮膚，暴露子宮，不做任何操作，于5 min后縫合皮膚，關閉腹腔；術前12 h禁食禁飲，術后常規飼養，自由飲食，術前術后記錄動物體重。于術后28 d，摘眼球采血，分離血清，采用ELISA法檢測外周血雌二醇含量；分離左右側卵巢，4%中性甲醛固定，常規HE染色。

1.4 統計學方法

2 結果

2.1 一般癥狀觀察

小鼠術后3～5 h內清醒，少動，步態蹣跚，弓背，輕微顫抖，痛苦狀態，12 h后緩解，并能自由飲食。術后飼養期間各組實驗動物均未見明顯行為及精神狀態等異常表現，腹部切口未見明顯滲出及炎癥等表現，5～7 d切口完全愈合。

2.2 體重變化

各組實驗動物術前體重未見明顯差異，2周末和3周末模型組小鼠體重較對照組和假手術組高(P< 0.05)，至4周末已明顯高于對照組和假手術組(P< 0.01)。(見表1)

2.3 外周血雌二醇變化

術后四周末模型組小鼠外周血雌二醇含量明顯低于對照組和假手術組(P< 0.01)，假手術組與空白對照組比較差異無顯著性(P> 0.05)。(見表2)

表 1 各組實驗動物術前及術后體重變化結果Tab.1 Changes of the preoperative and postoperative body weight in the mouse groups

注：與空白對照組比，*P< 0.05，**P< 0.01；與假手術組相比，#P< 0.05，##P< 0.01。

Note.Compared with the control group,*P< 0.05,**P< 0.01. Compared with the sham-operated group,#P< 0.05,##P< 0.01.

表 2 各組實驗動物外周血雌二醇檢測結果Tab.2 Measurement of estradiol in the mouse groups

注：與空白對照組比，*P< 0.01；與假手術組相比，#P< 0.01。

Note.Compared with the control group,*P< 0.01. Compared with the sham-operated group,#P< 0.01.

2.4 卵巢組織學檢查結果

陰性對照組和假手術組為正常卵巢組織；模型組鏡下多數卵泡形態不規則，可見偏位，顆粒細胞松散、固縮，部分凋亡。

注：(A)陰性對照組；(B)假手術組；(C)模型組。圖2 卵巢組織學檢查結果示例圖(×400)Note.(A)Control group.(B)Sham operation group.(C)Model group.Fig.2 Examples of histological changes of the mouse ovaries

3 討論

全子宮切除術自初創以來已有百余年的歷史，是婦科領域常見的手術，適用于子宮肌瘤、惡性腫瘤等多種婦科疾病。但隨著學者們不斷的研究和發現，子宮不僅是一個受激素作用的靶器官，也是一個功能復雜的內分泌器官，切除子宮術后可影響卵巢的血運及卵巢功能，使卵巢功能衰退[2-3]，而僅僅切除輸卵管，并不引起其功能衰退[6]。隨著研究的深入，該術式動物模型越來越受到學者的重視，本實驗通過建立BALB/C種小鼠全子宮切除術模型，首次在該種小鼠身上模擬出全子宮切除術以及術后卵巢功能衰退、體重增加以及組織形態學等臨床表現。該術式模型可滿足機制和機理相關研究，并且具有模型動物存活率高，宜操作等優點，主要風險來源于麻醉意外和術后感染。

本研究通過檢測外周血清雌二醇含量發現：該造模方法可使模型小鼠外周血雌二醇含量明顯降低，較對照組和假手術組存在明顯差異。目前已有大量研究表明絕經前行全子宮切除術，可使卵巢功能發生衰退[7-8]。子宮除了是胎兒繁育場所，也參與調節局部及全身的生理、病理過程，維持機體精確的動態平衡，切除子宮不僅破壞了這種平衡，也使卵巢功能發生衰退[9]。此外，子宮切除術由于鄰近血管的結扎及術后粘連，也影響卵巢的血運，造成卵巢功能的早衰，使血清雌激素水平下降[10]。這種卵巢功能的衰退和血供受損，在組織形態上主要表現為卵巢內卵泡數量減少及細胞凋亡、間質增生等[11]。本研究中也發現模型組小鼠鏡下多數卵泡形態不規則，可見偏位，顆粒細胞松散、固縮、部分凋亡，與文獻報道基本一致。

雌激素對維持女性體重的穩定起著調節作用，在雌激素不足情況下會導致發熱、情緒波動、肥胖等癥狀[12]。使用雌激素替代治療能夠明顯改善這些癥狀，減輕體重增加并阻止脂肪的重新分配[13]。在本研究中模型組小鼠術后2周末體重已經開始升高，至3、4周末明顯高于對照組和假手術組，與文獻報道相符合。

下丘腦是能量平衡的調節器，在下丘腦中的一些區域，已被證明含有雌激素受體ERα/ERβ。此外，在脂肪等組織也發現雌激素受體，這些受體被認為雌激素可以對脂肪組織有直接的影響作用[14]。有文獻表明：當雌激素受體缺失或雌激素減少時，可導致體重增加[15]。Campello等[16]也證實了雌二醇可通過誘導3T3-L1脂肪細胞轉運載體-4(GLUT-4)的調控，提高胰島素刺激的葡萄糖攝取率，改善胰島素敏感性。在本研究中也發現模型組卵巢功能的衰退，雌激素分泌減少，可通過雌激素代謝調節作用，引起模型小鼠體重增加。

綜上所述，本實驗所采用的BALB/c種小鼠全子宮切除術模型，可在短時間內建立與人體相似癥狀和體征的動物模型，該模型可以很好的模擬人全子宮切除術后卵巢功能衰退、體重增加等發病過程，是研究子宮切除術后并發癥及篩選治療藥物理想的動物模型。

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