不同采收時間廣金錢草藥材產量和質量研究△

陳端妮，唐曉敏*，張春榮，程軒軒，楊全*

(1.廣東藥科大學 中藥學院，廣州 510006；2.國家中醫藥管理局嶺南藥材生產與開發重點研究室，廣州 510006；3.中藥材國家現代農業產業技術體系 廣州綜合試驗站(CARS-21-16)，廣州 510006；4.廣東省南藥規范化種植與綜合開發工程技術研究中心，廣州 510006)

豆科植物廣金錢草Desmodiumstyracifolium(Osbeck)Merr.的干燥地上部位為中藥材廣金錢草，別名為大銅錢、銅錢沙和金錢草等，廣泛分布于廣東、廣西、海南等地。具有利濕退黃、利尿通淋的功效，主要用于治療黃疸尿赤、熱淋、石淋、小便澀痛、水腫尿少等癥[1]。隨著廣金錢草的廣泛應用，年消耗量越來越大，市場流通的廣金錢草以栽培為主，關于栽培廣金錢草的采收時間的研究已有報道[2]，但局限于藥材成分含量的研究，忽略了藥材產量。因此，本文結合了藥材產量和多成分(多糖、總黃酮、夏佛塔苷)含量的變化規律，確立適合廣金錢草的最佳采收時間，為生產中廣金錢草的采收及規范化生產關鍵技術的制定提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

儀器：UV1800紫外分光光度計(上海天美科學儀器)；超聲提取處理器(昆山市超聲儀器有限公司)；島津LC-20A高效液相色譜儀；FA2204B電子分析天平(上海精科美科學儀器有限公司)；HWS26型電熱恒溫水浴鍋。

試劑：夏佛塔苷對照品(批號：PS13071901；99.31%；購自成都普思生物科技有限公司)；蘆丁對照品(上海晶純生化科技股份有限公司)；甲醇(色譜純，美國歐普森公司)；乙醇、葡萄糖、濃硫酸、苯酚、亞硝酸鈉、硝酸鋁和氫氧化鈉均為分析純；超純水。

1.2 試驗材料

試驗布置于廣東省梅州市平遠縣南領藥業廣金錢草種植基地。于2015年1月份育苗，2016年4月中旬選取長勢一致的種苗進行大田移栽，開展常規管理。采用“S”形隨機取樣法，于7、8、9、10月每隔15 d采集樣品1次，每次采集15株。

1.3 測定項目

1.3.1 生物量測定 于地面處割取植株地上部位，用游標卡尺測定直徑、卷尺測定長度，105 ℃殺青0.5 h，55 ℃烘至恒重測定生物量。

1.3.2 總黃酮含量測定 參考程軒軒等[3]的響應面法提取測定總黃酮含量，蘆丁作為對照品，在510 nm處測定吸光度值，以溶液濃度X(μg·mL-1)為橫坐標，吸光度為縱坐標，得線性回歸方程Y=12.165X-0.017 1(r=0.999 0)，線性范圍9.964～69.748 μg·mL-1。

1.3.3 總多糖含量測定 參考程軒軒等[4]的響應面法提取測定多糖含量，葡萄糖作為對照品，在490 nm處測吸光度值，以溶液濃度X(μg·mL-1)為橫坐標，吸光度Y為坐標，得線性回歸方程Y=9.528 3X+0.004 8(r=1.000 0)，線性范圍2.000～11 μg·mL-1。

1.3.4 夏佛塔苷含量測定 參照2015版《中華人民共和國藥典》方法檢測廣金錢草中夏佛塔苷含量。以夏佛塔苷濃度為橫坐標，對應峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，得回歸方程為Y=2 000 000X-22 540(r=0.999 9)，線性范圍75.0～1050 μg·mL-1。見圖1。

1.3.4 數據分析 數據處理用Excel辦公軟件，數據分析使用SPSS19.0統計軟件。

2 結果與分析

2.1 不同采收時間廣金錢草生長變化規律

圖1 夏佛塔苷對照品(A)、廣金錢草樣品(B)HPLC圖

不同采收時間廣金錢草各生長指標變化規律見表1，由表1可以看出，隨著采收時間的推遲，株高和地徑均呈逐漸升高的變化趨勢，10月份增加不顯著。干重呈現逐漸上升而后降低的趨勢，10月初達到最高。說明株高、地徑、生物量受采收期影響顯著，不同采收時間的藥材生長及生物量積累存在較大差異。

表1 不同采收時間對廣金錢草生長的影響

注：表中大寫字母表示P值在0.01水平差異顯著，小寫字母表示P值在0.05水平差異顯著。

2.2 不同采收時間廣金錢草化學成分積累變化規律

不同采收時間廣金錢草化學成分含量差異見表2。由表2可知，隨著采收時間的推遲，多糖含量呈逐漸上升的變化趨勢，9月中旬極顯著升高；總黃酮含量呈先增加后降低的變化趨勢，在9月中旬極顯著升高，而后逐漸降低；夏佛塔苷含量7月初到10月中旬逐漸降低，7月初含量最高。由此可見，廣金錢草化學成分受采收時間影響顯著，不同采收時間藥材的質量存在較大差異。

表2 不同采收時間對廣金錢草化學成分含量的影響

注：表中大寫字母表示P值在0.01水平差異顯著，小寫字母表示P值在0.05水平差異顯著。

2.3 不同采收時間廣金錢草單株化學成分積累變化規律

不同采收時間廣金錢草單株化學成分含量差異見表3。由表3可以看出，隨著采收時間的推遲，單株多糖、總黃酮、夏佛塔苷含量均呈先上升后降低的變化趨勢。其中，單株多糖含量9月中旬～10月中旬極顯著高于其他月份，單株總黃酮和夏佛塔苷含量10月初極顯著高于其他月份。由此可見，廣金錢草單株化學成分受采收時間影響顯著或極顯著，不同采收時間存在較大差異。

表3 不同采收時間對廣金錢草單株化學成分含量的影響 mg·株-1

注：表中大寫字母表示P值在0.01水平差異顯著，小寫字母表示P值在0.05水平差異顯著。

3 結論與討論

3.1 采收時間與廣金錢草藥材產量

廣金錢草株高、地徑均在10月份達到最高值，10月中旬(15日)的株高是7月初(1日)的9.06倍，地徑增加了325%，但干重(生物量)在10月中旬出現降低趨勢，較10月初降低了18.10%，主要原因是采收過程中發現10月中旬采收時出現葉片容易脫落的現象，最終導致產量降低。因此，從藥材產量而言，廣金錢草最佳采收時間為10月初。

3.2 采收時間與廣金錢草化學成分積累

廣金錢草9月初多糖、總黃酮含量極顯著或顯著高于其他月份，與7月初比較多糖含量增加了371.14%，總黃酮含量增加了170.64%；而夏佛塔苷含量7月初極顯著高于其他月份，是10月中旬的6.14倍?；厮阒羻沃戤a量結果出現了變化，表現為10月初的多糖、總黃酮、夏佛塔苷含量均顯著或極顯著高于其他月份，分別是7月初的148.24、96.66、20.36倍。因此，從化學成分積累而言，廣金錢草最佳采收時間為10月初。

3.3 廣金錢草最佳采收時間

通過單株化學成分含量的分析，單純考慮化學成分含量的變化而忽略產量確定采收期欠缺科學性，該地區廣金錢草最佳采收時間為10月初。不同產地的氣候、地理環境等因素對廣金錢草藥材質量有一定的影響[5]，本實驗研究適合廣東梅州地區。

本試驗研究為廣金錢草規范化生產技術標準的制定及藥材采收提供依據。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部[S].北京：中國醫藥科技出版社，2015：44-45.

[2] 陳豐連，張文進，徐鴻華.廣金錢草適宜采收期研究[J].2010，32(2)：178-180.

[3] 程軒軒，郭楚楚，周鳳燕，等.響應面法優化廣金錢草中總黃酮的酶法提取工藝[J].華西藥學雜志，2015，30(1)：70-73.

[4] 程軒軒，郭楚楚，鄒鳳汝，等.響應面法優化廣金錢草多糖的酶法提取工藝[J].中國現代應用藥學，2014，31(5)：544-549.

[5] 王海霞，林萍，周文婷，等.氣候及地理環境對不同采收期的廣金錢草質量的影響[J].醫藥導報，2014，33(8)：1077-1079.