Runx3、p27、cyclinD1在食管癌細胞及組織中的表達與意義

季偉 汪曉鶯

食管癌是一種常見的惡性腫瘤，其發病率和死亡率在全球所有惡性腫瘤中分別占第八位和第六位，而在我國其發病率和死亡率均位居第四位。我國以鱗癌為主（歐美以腺癌為主），死亡率高，預后較差，因此研究與食管癌發生、發展和預后相關的生物學標記物，并探索其潛在的機制，對食管癌的早期診斷和預后判斷將有重要意義[1-3]。

1 臨床資料與方法

1.1 臨床資料

選取2015年1月—2016年12月我院診治的100例食管癌患者作為研究對象，所有患者均未采用放療、化療、免疫治療。其中男性患者61例，女性患者39例，年齡32～68歲，平均年齡（59.2±6.3）歲；同時選擇20例同期食管癌旁正常食管上皮細胞組織（距離腫瘤組織≥5 cm，經病理檢查無腫瘤細胞浸潤）作為對照。在體實驗分為兩組：正常癌旁組和食管癌組，分別檢測相應指標。離體實驗分為三組：對照組、空轉組和Runx3高表達組，分別檢測相應指標。

1.2 方法

采用免疫組化和western blot檢測Runx3、p27、cyclinD1在食管癌組織中的表達水平，分析Runx3、p27、cyclinD1三種基因在食管癌組織中表達的相關性[4]。采用人食管癌細胞系Ec-9706構建Runx3高表達穩轉細胞，檢測Runx3高表達對p27及cyclinD1表達的影響，同時觀察Runx3高表達對Ec-9706細胞增殖和凋亡的影響。

1.3 統計學分析

采用GraphPad Prism 5.0分析各組計量資料，計量資料以（x-±s）表示。ANOVA方法進行組間變異度分析，兩兩比較采用t檢驗；相關性分析采用Spearman相關性分析，P＜0.05，為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 Runx3，p27及cyclinD1在食管癌及癌旁組織中的表達

收集100例食管癌患者腫瘤組織及相應癌旁組織，采用免疫組化檢測Runx3，p27及cyclinD1的表達情況。實驗結果顯示，Runx3，p27在食管癌組織中表達水平低于癌旁組織（t=4.172，P=0.014 0），cyclinD1在食管癌組織中表達水平高于癌旁組織（P＜0.05）。見圖1。

2.2 Runx3高表達Ec-9076細胞的增殖和凋亡分析

采用MTT檢測三組細胞的活力，實驗結果顯示，當Runx3高表達時，Ec-9706細胞活力下降（t=4.035，P=0.006 8）。當Runx3高表達時，Ec-9706細胞凋亡增加。因此Runx3高表達能抑制食管癌細胞的增殖，促進細胞凋亡。見圖2。

圖1 免疫組化檢測Runx3，p27及cyclinD1在食管癌及癌旁組織中的表達水平

圖2 Runx3高表達對Ec-9706細胞增殖和凋亡的影響

3 討論

近些年來，食管癌逐漸成為臨床常見的消化道惡性腫瘤之一，其發病率也在逐年升高[1-5]。腫瘤的發生發展離不開腫瘤相關基因的表達，主要包括促癌基因和抑癌基因，這兩種基因表達水平的改變均能夠影響腫瘤的發生和發展。Runx3參與了食管癌的發生發展，與食管癌切除部分的邊緣組織上的或發生良性病變的組織上的普通鱗狀細胞相比，食管癌鱗狀細胞中的Runx3的表達出現下降，并且Runx3 mRNA表達的減少與其啟動子的異常甲基化相關（P＜0.001），而在食管腺癌腺體中也發現了相似的結果[6-9]。更為重要的是，在易發展為食管腺癌的Barrett食管炎患者中也發現了Runx3啟動子的異常甲基化，并且Runx3的這種失活形式在組織未出現癌性病變時就已出現[10]。

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