東莞地區831例地中海貧血基因檢測結果分析

華仙麗 ，李敬河 ，梁愛芬 ，雷亞麗 ，隋洪

(1、東莞康華醫院，廣東 東莞 523080；2、東莞市石碣醫院，廣東 東莞 523290)

地中海貧血（Thalassemia）是一組溶血性貧血病，呈現常染色體隱性遺傳規律，是由于人體珠蛋白基因突變或者缺失而導致某種珠蛋白鏈合成障礙，造成α，β-珠蛋白肽鏈合成速率的不平衡而導致的溶血性貧血。地貧為世界上發病率最高、危害性最大的單基因遺傳性疾病之一。據統計，廣東省人群中α，β地貧基因的攜帶率高達11.07%，是地貧的高發區[1]，地中海貧血被列為廣東省出生缺陷重點干預病種。東莞市地處珠三角，人口結構復雜，聚居了南方各省務工人員，有較復雜的基因背景。為此，作者對本地區疑似地貧的831名患者進行了α與β地貧的基因診斷，檢測外周血，以期獲得本地區地中海貧血病分布特征，為地貧的防控和降低出生缺陷積累資料。現報告如下：

1 資料與方法

1.1 標本來源 2016年1月至2017年7月，在東莞康華醫院就診的門診和住院患者。平均紅細胞體積 （MCV）＜82fL和 （或）平均血紅蛋白含量（MCH）＜27pg做為初篩陽性指標[2]，共 831例標本。其中男259例，女572例，年齡1月～84歲，平均年齡28.59歲。其中368例進行血紅蛋白電泳檢測，HBA2＜3.5，HBF＜3.0(孕婦＜5.0) 檢測 α 地貧基因，HBA2＞3.5同時檢測α和β地貧基因[3]。463例患者未做血紅蛋白電泳檢測，血常規初篩陽性，同時檢測α和β地貧基因。

1.2 樣本采集和處理 抽取患者外周血2ml，EDTA-K2抗凝全血，及時送檢，置于2～8℃冰箱中保存并于一周內檢測。

1.3 儀器 ABI 2720基因擴增儀、DYY-8電泳儀、SHA恒溫水浴搖床等。

1.4 試劑 采用深圳益生堂公司生產的地中海貧血基因檢測試劑盒。嚴格按照試劑說明書進行操作與結果判讀。

1.5 檢測方法

1.5.1 缺失型α-地中海貧血基因檢測采用跨越斷裂點的PCR技術(也稱裂口PCR，Gap-PCR)結合瓊脂糖電泳技術，檢測東南亞型缺失(--SEA)、右側缺失 (-α3.7)、左側缺失 (-α4.2)和泰國型缺失(--THAI)。

1.5.2 非缺失型α-地中海貧血基因采用PCR-膜反向點雜交技術(PCR-RDB)檢測3種非缺失型α地中海貧血突變（Hb WS、Hb CS與Hb QS）

1.5.3 β地中海貧血基因檢測采用PCR-膜反向點雜交技術(PCR-RDB)檢測17種基因位點突變，分別是 CD41-42、IVS-2-654、-28、CD7l-72、CD17、βE、CD31、CD27/28、IVSI-1、CD43、-32、-29、-30、CD14-15、CAP、Int、IVS-1-5。

2 結果

831例受檢標本中，檢測到有基因改變（α及β地貧）的有625例，占總檢測對象的75.21%，⑴α-地貧基因檢測結果檢出α地中海貧血基因攜帶者412例；檢出率為 49.58%，其中--SEA/αα 302例，占α地中海貧血所有突變類型的73.30%，是東莞地區α地中海貧血主要類型，檢出α雜合子391例，HbH 21例。α雙重雜合子21例。α基因型分布見表1；⑵β-地貧基因檢測結果 檢出β-地中海貧血基因攜帶者243例，檢出率為29.24%。檢出10種β-地中海貧血基因突變類型，其中CD41-42/N 90例、βIVS-2-654/N 68例、CD17/N 35例、-28/N 30例，4種β-地中海貧血基因突變共217例，占所有β-地中海貧血突變類型的91.77%。檢出2例復合型β-地中海貧血，1例IVS-2-654純合子。β基因型分布見表2；⑶檢測到αβ復合地貧30例，基因型分布見表3。

3 討論

地中海貧血是一種常染色體隱性遺傳病，只在純合子（aa）時才發病，基因攜帶者（Aa）通常為正常表型，不需要進行治療。部分地貧基因攜帶者并不知道自己是攜帶者，易被忽略。同型攜帶者婚配的下一代有1/4的機會患重癥地中海貧血，出現嚴重貧血癥狀。α地中海貧血的HbBarts水腫胎多在妊娠晚期或出生后數小時內死亡，嚴重影響母親的身心健康；HdH病終身輕度或重度貧血和肝脾腫大，但個體差異較大，嚴重者類似重型β地中海貧血癥[4]，嚴重影響患者的生存質量。重型β地中海貧血由于幾乎不能合成正常的珠蛋白，貧血嚴重，需要靠輸血結合除鐵劑治療維持生命，不接受治療的重癥患兒常常因發育遲緩而呈典型的“地貧面容”，常在五歲以前因嚴重貧血或繼發感染在兒童期死亡[5]，為家庭和社會帶來沉重的精神和經濟負擔。目前對攜帶者檢查及產前基因診斷是唯一防止重癥患兒出生有效措施。所以應用DNA分析技術對該病進行早期產前診斷并選擇性終止妊娠防止重型地中海貧血患兒的出生，是目前國際上公認的首選辦法，有著重要的優生學意義[6]。

表1 α-地中海貧血各基因突變類型及比例(n，%)

表2 β-地中海貧血各基因突變類型及比例(n，%)

表3 αβ復合型地中海貧血檢測結果

本實驗以MCV<82fL和 （或）MCH<27pg做為初篩陽性指標，初篩陽性的831例標本，檢測到有基因改變（α及β基因）的有625例，占總檢測對象的75.21%，檢出α-地中海貧血基因攜帶者412例，占基因陽性者65.92%；檢出β-地中海貧血基因攜帶者243例，占基因陽性者38.88%；其中α及β復合地貧30例，占基因陽性者4.8%。

在831例受檢人群中，共檢出標準型--SEA/αα302例，占檢出α-地中海貧血的73.30%，是東莞地區α-地中海貧血的主要類型。檢出靜止型62例， 其中-α3.7/αα 42 例，-α4.2/αα20 例， 分別占α-地中海貧血突變類型的10.19%及4.85%。與何怡等[7]的報道相似。 數據顯示，--SEA/、-α3.7/和-α4.2/最常見的3種基因缺失類型，占α地貧的91.99%（379/412）。另外本數據還檢出--THAI攜帶者 5 例，α 點突變（WS、CS、QS）攜帶者 28 例，檢出HbH 21例。雖然α地貧大部分的患者可以用Gap-PCR方法進行診斷，但也不能忽視點突變型α地貧，因為點突變型血紅蛋白H病 （如--SEA/αCSα，--SEA/αQSα） 的貧血癥狀比缺失引起的血紅蛋白H病更嚴重。

不同地區、不同種族的人群常見β基因突變類型存在差別[6，7]。本實驗檢出10種β-地中海貧血基因突變類型，CD41-42/N(90 例，37.04%)、IVS-2-654/N(68 例，27.98%)、CD17/N(35 例，14.40%)、-28/N(30 例，12.35%)共占 91.77%(223/243)，說明這 4種突變類型是東莞地區最常見的β基因突變類型，與廣東廣州、深圳地區同類研究結果相似[9-11]。與廣東中山、梅州、汕頭地區[12-14]的β地貧的攜帶類型有區域性差別。迄今為止，中國人群已發現30余種β珠蛋白基因的點突變，本實驗檢測的17種基因型覆蓋了我國β突變類型的95%以上[15]，本實驗所用方法（PCR-RDB）無法檢出缺失型β-地中海貧血和其他少見的β突變類型。因此，在產前檢查中對于地貧初篩陽性，HbA2升高提示存在β地貧，而常規PCR-RDB方法未檢測到突變者要進行測序分析，避免罕見突變β地貧患者的漏診，從而避免罕見突變引起重型β地貧患兒的出生[16]。

在831例受檢人群中，發現α及β復合地中海貧血30例，占基因陽性者4.8%，在表型篩查中，α及β個體的HbA2值在3.5至6.8之間，因此，臨床上易誤診為單一的β地貧攜帶者，產前診斷中若僅進行β-地貧基因診斷，忽視α-地貧基因診斷，會導致重癥α地貧患兒的出生[17]。因此，在HbA2升高的可疑地貧人群中，有必要α和β基因一起檢測，以免漏檢α和β地貧基因攜帶情況。

由于東莞地區人群多來自廣東，廣西，湖南，海南等地貧高發地區，開展地貧的宣傳教育和大規模人群篩查，對指導優生優育有著重要意義。本研究結果有助于更深入地了解東莞地區地中海貧血基因突變的類型、頻率和分布，也為在當地開展地貧防治知識的宣傳、遺傳咨詢、產前診斷、防止重癥地貧患兒的出生等工作提供有力的支持。

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