參景固本方對D -半乳糖致亞急性衰老模型小鼠的抗氧化作用

周麗雅，李 欣，柴晶美，楊阿龍

（長春中醫藥大學，長春 130117）

衰老是隨年齡增加而導致機體各組織臟器出現退行性改變的一系列過程[1]。由于人口老齡化的日漸增長，關于抗衰老研究已成為醫學領域研究的熱門課題，因此，尋找有效的抗衰老措施使人類保持健康，延緩衰老具有重要意義。參景固本方以人參、紅景天、山楂等中藥組成，人參大補元氣，補脾益肺，生津，安神益智；紅景天健脾益氣，清肺止咳，活血化瘀；山楂散瘀行氣，消食化積[2]。縱觀全方，補中寓清，可用于增強機體免疫力，抗氧化，更適用于亞健康人群扶正固本，達到延緩衰老的目的。本研究采用D -半乳糖誘導致亞急性衰老模型小鼠，觀察其學習記憶能力、胸腺指數、脾臟指數及腦組織中相關指標，進一步分析參景固本方抗氧化，延緩衰老的作用機制，為其臨床應用提供實驗依據。

1 材料與方法

1.1 材料 SPF級昆明種小鼠70只，雌雄各半，體質量18～22 g（許可證號SCXK[遼]2015－0001）。參景固本湯組成：人參、紅景天、山楂（由安徽易元堂中藥飲片有限公司提供）。按照常規煎煮藥材方法制成1 g生藥材/mL的藥液，4 ℃冷藏備用。D -半乳糖（源葉生物）；金匱腎氣丸（北京同仁堂），維生素E（天之海藥業），MOD、SOD、GSH-Px 試劑盒( 南京建成生物制品研究所)

1.2 方法

1.2.1 分組、造模與給藥 將70只小鼠隨機分為7組，分別為正常對照組，模型組，參景固本方低（4 g/kg）、中（8 g/kg）、高劑量組（16 g/kg），金匱腎氣丸組（1.5 g/kg）及維生素E組（40 mg/kg），每組10只，雌雄各半，自由飲食飲水。適應性喂養2 d后進行實驗，實驗前記錄小鼠初始體質量。正常對照組和模型組灌胃等量生理鹽水，參景固本方組灌胃給藥，1 次/d；同時除正常對照組外全部小鼠按125 mg/kg劑量頸背部皮下注射D -半乳糖[3]，正常對照組以等體積生理鹽水注射，灌胃與注射同時進行，連續42 d。

1.2.2 水迷宮實驗 利用WMT-200小鼠水迷路實驗箱測定小鼠在水迷宮中進入盲區的錯誤次數和到達站臺所需時間。實驗前將小鼠放置在臺上適應 15 s，然后將小鼠隨機從不同區域放入水迷宮內，小鼠游上臺 3 s后記錄所用時間，最長時間不超過 2 min（若2 min 內未能上臺，幫助小鼠游上臺適應片刻，再將小鼠放回籠）。如此將小鼠置入游泳池，實驗用時3 d，每天每只小鼠訓練3次，共訓練9 次。計算每組小鼠成功尋臺時間和錯誤次數的平均值，以評價其空間學習記憶能力[4-5]。

1.2.3 小鼠各臟器指標的測定 末次給藥后稱量各小鼠體質量。小鼠麻醉后，完整剝離胸腺與脾臟，用生理鹽水沖洗2次后濾紙吸干水分，進行稱重。計算增重率、胸腺指數及脾臟指數。

1.2.4 腦組織中MDA、SOD和T-AOC值的測定 頸椎脫臼處死后迅速取腦組織，用冰冷的生理鹽水沖洗后，取部分腦組織低溫環境下勻漿取上清液備用。按照試劑盒說明書的操作步驟，測定MDA、SOD及T-AOC值。

1.3 統計學方法 數據采用統計學軟件SPSS 19.0進行分析，結果以均數±標準差（）表示，組間比較進行t檢驗，多組均數間比較采用方差分析，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 行為學觀察 連續給藥5周后正常對照組小鼠精神狀態良好，食欲較好，毛色亮白，皮膚有彈性，行動敏捷；與正常對照組比較，模型組則進食量減少，毛色比較干枯，毛發稀疏易脫落，喜靜惡動，反應遲鈍；參景固本方組小鼠在飲食行動，毛發方面均比模型組較好。

2.2 對小鼠學習記憶能力的影響 見表1。

表1 水迷宮實驗結果（ ，n = 10）

表1 水迷宮實驗結果（ ，n = 10）

注：與正常對照組比較，## P＜0.01；與模型組比較，△△P＜0.01；與維生素E組比較，▲P＜0.05

組 別 尋臺時間/s 錯誤次數正常對照組 25.59±18.76 2.60±2.04模型組 54.94±22.31## 2.94±0.99低劑量組 30.68±18.57△△ 2.41±1.06中劑量組 26.05±13.41△△ 2.13±1.14高劑量組 23.07±16.21△△ 1.50±0.85△△▲金匱組 29.76±15.01△△ 1.50±1.08△△▲維生素E組 30.25±18.64△△ 2.50±1.09

2.3 小鼠各臟器指標比較 見表2。

2.4 對腦組織中MDA、SOD及T-AOC值的影響 見表3。

表2 各組小鼠增重率、胸腺指數及脾臟指數比較（，n = 10）

表2 各組小鼠增重率、胸腺指數及脾臟指數比較（，n = 10）

注：與正常對照組比較，# P＜0.05；與模型組比較，△ P＜0.05，△△ P＜0.01；與金匱組比較，▲ P＜0.05，▲▲ P＜0.01；與維生素E組比較，☆☆ P＜0.01

組 別 增重率 胸腺指數 脾臟指數正常對照組 0.77±0.16 1.50±0.65 4.33±1.14模型組 0.64±0.11# 1.12±0.22# 3.34±0.27#低劑量組 0.63±0.18△▲▲ 1.15±0.25▲ 4.18±0.64▲中劑量組 0.66±0.13△▲▲ 1.40±0.49 4.56±1.41△高劑量組 0.51±0.10△△▲▲☆☆ 1.78±0.19△△ 4.60±0.47△△金匱組 0.74±0.08 1.69±0.55△△ 5.13±1.17△△維生素E組 0.86±0.14△△ 1.32±0.22 4.45±0.52△

表3 各組小鼠腦中MDA含量、SOD、T-AOC活性比較（，n = 10）

表3 各組小鼠腦中MDA含量、SOD、T-AOC活性比較（，n = 10）

注：與正常對照組比較，# P＜0.05，## P＜0.01；與模型組比較，△ P＜0.05，△△ P＜0.01

組 別 MDA SOD T-AOC

3 小結

本實驗研究結果發現，在連續42 d的藥物注射后D -半乳糖致亞急性衰老模型的小鼠會出現記憶障礙，到達站臺所需時間明顯延長，出錯次數增多，增重率、胸腺指數及脾臟指數明顯低于正常對照組，同時腦組織中MDA含量顯著增加，SOD、T-AOC活性明顯減低。實驗結果表明，經參景固本方治療后，結果顯示尋臺時間明顯縮短，錯誤次數減少，提示對記憶減退有一定改善作用。胸腺指數和脾臟指數的增加表明參景固本方對衰老小鼠的胸腺，脾臟的萎縮有一定的延緩作用[6-12]。用參景固本方干預后可提高腦組織中SOD活性及T-AOC含量，進而減少MDA含量，結果提示，參景固本方可通過提高抗氧化酶的活力來減少脂質過氧化物的生成，從而提升機體抗氧化、抗衰老的作用[13-16]。

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