牛羊布病的診斷及防治

通遼市科爾沁左翼后旗農畜產品質量安全檢驗檢測站 028100

1 病原

布魯氏菌為革蘭氏陰性短桿菌，大小為0.6～1.3um×0.5～0.7um，散在分布，無芽孢及鞭毛，在條件不利時有形成夾膜的能力。該菌難以著色，吉姆薩染色呈紫色。該菌屬包括6個種19個生物型。按生化和血清學反應可分為馬爾他布魯菌(羊型)、流產布魯菌(牛型)和豬布魯菌(豬型)，另外還有森林鼠型、綿羊附睪型和犬型。感染人者主要為羊、牛和豬型。其中致病力最強的為羊型，其次為豬型，牛型最弱。傳染源是患病的羊、牛、豬，病原菌主要存在于病畜的組織、糞便、尿液、乳汁、產道分泌物、羊水、胎盤及皮毛內。消化道、呼吸道和生殖道是主要的感染途徑，也可通過損傷的皮膚和黏膜感染，常呈地方性流行。人主要通過皮膚、黏膜、消化道和呼吸道感染，尤其以感染羊種布魯氏菌、牛種布魯氏菌最為嚴重。豬種布魯氏菌感染人較少見，犬種布魯氏菌感染人罕見，綿羊附睪種布魯氏菌和沙林鼠種布魯氏菌基本不感染人。

2 臨床癥狀

（1）牛的潛狀期為2周至6個月。母牛最明顯的臨診癥狀是流產，通常發生于妊娠后的6～8個月。流產前數日表現出分娩預兆，陰道黏膜潮紅腫脹，有粟粒大紅色的結節，陰唇及乳房腫脹，不久即發生流產。流產胎兒多為死胎，有時產下弱犢，往往存活不久。大多數母牛流產后伴發胎衣停滯和子宮內膜炎，從陰道內流出污穢不潔的紅褐色惡臭分泌物，持續2～3周，有的病例長期不愈，不能妊娠。非妊娠牛常常發生關節炎和局部腫脹，多見于膝關節。病公牛發生睪丸炎、附睪腫脹、關節炎及局部腫脹，配種能力降低。牛布魯氏菌病的病程為慢性經過，可延續數年之久。明顯癥狀消失后，如不伴發慢性子宮炎可自愈。

（2）妊娠病母羊的主要臨床癥狀是流產，多發于妊娠后的3～4個月。流產前的癥狀一般不明顯，部分病羊在流產前2～3天呈現胃腸弛緩和精神沉郁癥狀，常喜伏臥，食欲減退，飲欲增加，體溫升高，陰道流出黏液性或黏性血樣分泌物，還可能有乳房炎、關節炎、滑膜炎及支氣管炎癥狀。病公羊經常發生睪丸炎、附睪炎及多發性關節炎。

3 診斷

（1）母牛最顯著的臨診癥狀是流產。流產前數日除表現出陰唇和乳房增大、肷部與肋部下陷及生殖道發炎等分娩預兆外，流產時胎水多清薄，但有時渾濁含有膿樣絮片。公牛有時可見陰莖潮紅腫脹，更常見的是睪丸炎、附睪炎、腱鞘炎和滑液囊炎。妊娠母羊流產常發生在妊娠后的90～110天，食欲減退、精神萎頓、起臥不安，陰道中流出黃色或灰黃色黏液，流產母羊發生子宮內膜炎，排污穢惡露。也有早產、產死胎、乳房炎、關節炎、跛行、公羊睪丸炎和附睪炎等。

（2）病理學診斷。該病的主要病變為生殖器官的炎性壞死，脾、淋巴結、肝、腎等器官形成特征性肉芽腫(布病結節)，有的可見關節炎。胎兒主要呈敗血癥病變，漿膜和黏膜有出血點和出血斑，皮下結締組織發生漿液性和出血性炎癥。

（3）細菌學診斷。流產胎兒的胎衣和胃內容，病畜的肝、脾、乳房、腹股溝及下頜骨等處的淋巴結，子宮和睪丸等組織都是布魯氏菌分離的好材料[1]。將其制成涂片，使用柯茲羅夫斯基染色法染色，通過顯微鏡觀察，可見單個、成對或成堆存在的紅色球桿狀細菌，其他細菌被染成綠色或藍色[2]。也可將采取的病料接種于培養基、敏感的動物或未受精的雞卵進行分離培養。雖然細菌學檢查是確診人畜間布魯菌病最可靠的方法，可鑒定布魯菌的各生物型，但是組織中含布魯菌的量比較少，又很難獲得未污染的樣本[3]。進行血和組織培養時，因敏感性低、耗時和生物安全要求較高等因素，使這種診斷方法不宜推廣，常規檢測應用時受到了限制。

（4）血清學診斷。血清學診斷的基本原理是用已知的布魯菌抗原檢測被檢動物血清中的抗體確定是否被感染，結合臨床癥狀等分析發病情況。臨床中常用的血清方法有虎紅平板凝集試驗和試管凝集試驗等，這些血清學方法各具優點、各有不足，所以臨床中同時使用幾種方法來綜合分析其檢測結果。

①虎紅平板凝集試驗。取一潔凈玻璃板，用玻璃鉛筆劃分為4cm2的方格，在玻璃板上標記各受檢血清號，然后加相應血清30ul，接著在受檢血清旁滴加抗原30ul，用牙簽將各格中的血清和抗原混勻，輕輕轉動玻璃板，5分鐘后在對照組完全成立的條件下判讀結果。

徐春厚等人在1995年報道，使用虎紅平板凝集試驗、試管凝集試驗、二巰基乙醇試管凝集試驗和致敏紅細胞凝集試驗檢測了32份奶牛血樣，比較了這4種診斷方法的優缺點、符合率和檢出率，結果發現虎紅平板凝集試驗檢出的陽性率最高，占90.63%，其他3種診斷方法基本類似；這4種診斷方法的陰陽性符合率僅為50%，二巰基乙醇試管凝集試驗與試管凝集試驗，這兩者與致敏紅細胞凝集試驗的符合率偏低。由此看出，診斷布魯菌病不可單用一種檢測方法來判定，必須結合幾種檢測方法來綜合判定，因為有可能出現非特性結果[4]。1981年呂南平報道，虎紅平板凝集試驗與抗球蛋白試驗要比試管凝集試驗、半胱氨酸試驗敏感性高，而虎紅平板凝集試驗比抗球蛋白試驗的操作程序要簡單得多。虎紅平板凝集試驗簡便易行、成本低廉，適用于布魯菌病大面積檢測和流行病學調查，我們國家將其作為布魯菌病診斷的初篩檢測方法。

②試管凝集試驗。用0.5%石炭酸生理鹽水稀釋牛血清 1∶25、1∶50、l∶100 及 l∶200，檢驗羊血清時，稀釋度為 1∶12.5、l∶25、1∶50 及 1∶100， 稀釋后加入 l∶20 倍稀釋抗原，置37～38℃溫箱中20～22小時，取出在室溫中靜止2小時判定結果。試管凝集試驗是各國診斷布魯菌病的常規血清學診斷方法，至今仍在臨床中廣泛使用。1997年馮元璋描述，試管凝集試驗是比較敏感、特異和穩定的診斷方法，它可以檢測人畜血清中三類免疫球蛋白：IgG、IgM 和 IgA，IgG2、IgM 是其主要檢測的抗體，而且此診斷方法檢測IgM的敏感性明顯高于IgG2，因此試管凝集試驗可作為人畜間布魯菌病的早期診斷[5]。此診斷方法簡便，判定容易，特異性較強，具有很高的診斷價值，是我國診斷布魯菌病法定的診斷方法。但是此診斷方法因受各種因素影響，可能會出現假陽性或假陰性的結果，而且有些感染動物的抗體滴度未必都能達到檢測水平，所以單獨使用此診斷方法容易造成漏診和誤診，因此應采取綜合診斷為妥。

③瓊脂擴散試驗。此項試驗技術已成功用于檢測綿羊附睪種布魯菌病沉淀抗體，被列為檢測綿羊布魯菌病的常規方法，但是不能區別綿羊附睪種還是羊種布魯菌感染。另外，此試驗與補體結合試驗相同，主要檢測的是IgG型抗體，所以兩者的檢測結果比較一致。該試驗方法簡單易行，特異性較高，但敏感性較低，因此對陽性病畜有診斷意義。但是陰性病畜不能排除無布魯菌病，使之在臨床應用上受到了限制。

檢疫和診斷布魯菌病主要采用血清學和細菌學方法。細菌培養耗時，而易污染周圍環境，存在實驗室人員感染的風險。培養布魯菌要求在生物安全三級實驗室進行，細菌培養方法當前很少采用。血清學檢測方法種類繁多，是布魯菌病流行病學監測的標準方法。

4 防治措施

（1）防止外來牛羊布病感染者。控制該病傳入最好的辦法是自繁自養。必須引進種畜或補充畜群時，要嚴格執行檢疫，將引進種畜隔離飼養2個月，然后進行布病檢測，全群2次免疫生物學檢查為陰性者才可以與原有牲畜混群飼養。

（2）做好感病牛羊的凈化工作。定期檢疫，每年至少檢疫1次，一經發現帶菌者立即淘汰處理。對已經感染的牛羊做好無害化處理，同時將圈養感染布病牛羊的圈舍、產生的垃圾、用具、運輸工具以及周圍的建筑物進行嚴格消毒。同時工作人員也要做好自身的防護，消毒時要著防護服、口罩等。

（3）做好牛羊布病的預防與檢疫。由于牛羊布病的感染率的逐年遞增，這嚴重威脅到牛羊養殖業的發展和當地人們的健康狀況。因此必須提前預防，做好牛羊的免疫接種工作。目前國內布病主要疫苗有A19、M5、S2，由于抗體活性較強，A19、M5 不能用于懷孕動物。另外還要對牛羊進行定期的檢疫工作，防止后期由于其他原因造成的布病感染。

（4）做好人員預防并加大宣傳力度。人類布病的預防，特別要注意職業性感染，凡在動物養殖場、屠宰場、動物產品加工廠的工作者以及獸醫、實驗室工作人員，必須嚴守防護制度，尤其在子畜大批生產季節，更要特別注意，做好相應的防護措施；患病動物乳肉食品必須滅菌后食用；必要時可用疫苗（如104M苗）皮上劃痕接種，接種前應進行變態反應試驗，陰性反應者才能接種。同時各級地方政府要加強布病對牛羊養殖、人類健康危害以及防治措施的宣傳力度，提高人們對布病危害與防治的認識。另外還要提高防疫工作人員的防治水平，增強工作人員自身的防范能力，避免工作人員感染布病。切斷動物源布魯氏菌病，便可減少人間布魯氏菌病的發生率。因此，防治和根除動物布魯氏菌病是控制人間布魯氏菌病的關鍵。

參考文獻：

［1］吳冬玲.布魯氏菌VirB8PCR診斷方法的建立與應用及Ery基因的克隆與序列分析[D].新疆農業大學,碩士論文,2008.

［2］尚德秋,于恩庶,趙恒云,等.布魯氏菌病實驗診斷的非特異性反應及其鑒別[M].北京：海洋出版社,1995.

［3］李福興,尚德秋.實用臨床布魯菌病[M].哈爾濱:黑龍江科學技術出版社,2010.

［4］黃建,李恪梅.布病防治工作中檢測制劑和技術的新動向[J].中國地方病雜志，1999,14(2):80-82.

［5］齊景文.布魯氏菌病常用診斷方法應用現狀及評價[J].中國畜牧獸醫,2006,33(8):70-73.