維藥歐芹根治療大鼠肝損傷有效成分的篩選

陳妍 高宏

【摘要】 目的 觀察芹菜根8個流分對四氯化碳（CCl4）誘導急性肝損傷大鼠血清谷丙轉氨酶（ALT）、谷草轉氨酶（AST）水平的影響， 篩選出有效成分。方法 110只小鼠， 隨機分為模型組、8個流分組、陽性對照組、空白對照組， 共11組， 每組10只。空白對照組和模型組預先灌胃生理鹽水0.2 ml/10 g；芹菜根各流分組分別預先灌胃各提取部位50 mg/kg；陽性對照組預先灌胃150 mg/kg聯苯雙酯；以上各組均灌胃1次/d， 連續10 d， 所有動物第10天給藥1 h后， 除空白對照組腹腔注射等量生理鹽水外， 其他各組用四氯化碳（1 ml/kg）腹腔注射。小鼠20 h后眼球取血， 離心， 分離血清， 分別測定ALT、AST。

結果 模型組ALT和AST水平均明顯高于空白對照組， 差異均具有統計學意義（P<0.01）；陽性對照組ALT和AST水平均明顯低于模型組， 差異均具有統計學意義（P<0.05）；5流分組ALT和AST水平均明顯低于模型組， 差異均具有統計學意義（P<0.05）；1流分組、3流分組、4流分組、6流分組、7流分組ALT和AST水平均明顯低于模型組， 差異均具有統計學意義（P<0.01）。對5個流分進行成分測試， 發現其為總黃酮。結論 芹菜根治療大鼠肝損傷有效成分為芹菜根總黃酮。

【關鍵詞】 芹菜根；各流分；急性肝損傷；治療作用

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2018.10.115

新疆維藥芹菜根系傘形科植物歐芹Petroselinum crispum （Mill） Hill的干燥根， 目前在維醫民間及臨床廣泛應用， 但由于實驗基礎不足， 限定了其推廣使用。課題組前期對其作用效果進行了研究[1-4]， 療效確切。但究竟是何種成分起的效果還不清楚。本實驗建立四氯化碳誘導的急性肝損傷大鼠模型， 篩選其治療肝損傷的有效成分， 為進一步研究該藥奠定基礎。

1 材料與方法

1. 1 實驗動物 選用110只昆明小鼠（新疆醫科大學動物中心）， 清潔級， 平均體重（20±2）g， 雌雄兼備， 適應性喂養1周。隨機分為模型組、8個流分組、陽性對照組、空白對照組， 共11組， 每組10只。

1. 2 試藥 維藥芹菜根原材料（新疆維吾爾民族醫院）；聯苯雙酯滴丸（浙江醫藥股份有限公司新昌制藥廠）；四氯化碳（新疆醫科大學分析測試中心， 分析純）。

1. 3 方法

1. 3. 1 芹菜根各流分提取 將10 kg維藥芹菜根用30%、50%、70%、95%乙醇回流提取2次， 1 h/次， 合并各乙醇液后減壓濃縮， 得干浸膏2731 g。將所得干浸膏用水混懸， 依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取， 減壓濃縮后冷凍干燥， 得石油醚干膏384 g、氯仿干膏454.32 g、乙酸乙酯干膏397.92 g、正丁醇干膏532.8 g備用。由于前期實驗顯示乙酸乙酯、正丁醇部位是其有效部位， 因此直接應用乙酸乙酯、正丁醇干膏。

取上述剩余乙酸乙酯部位浸膏約170 g， 正丁醇部位浸膏約420 g。

將所得乙酸乙酯部位浸膏170 g， 與硅膠拌樣， 濕法裝柱， 以石油醚-乙酸乙酯（10：0-0：1）進行梯度洗脫， 按等體積

（250 ml）收集流分， 根據薄層色譜結果合并相同流分， 得3個流分， 分別約為20、14、11 mg。

將所得正丁醇部位浸膏420 g， 用大孔吸附樹脂柱色譜法分離， 用水-乙醇梯度洗脫， 按等體積（250 ml）收集流分， 得到10%、30%、50%、70%、95%組分， 根據薄層色譜結果合并相同流分， 得5個流分， 分別為30、21、17、12、10 mg。

1. 3. 2 實驗動物干預方法 空白對照組和模型組預先灌胃生理鹽水0.2 ml/10 g；芹菜根各流分組分別預先灌胃各提取部位50 mg/kg；陽性對照組預先灌胃150 mg/kg聯苯雙酯；以上各組均灌胃1次/d， 連續10 d， 所有動物第10天給藥1 h后， 除空白對照組腹腔注射等量生理鹽水外， 其他各組用四氯化碳（1 ml/kg）腹腔注射。小鼠20 h后眼球取血， 離心

（3000 r/min）， 分離血清， 分別測定ALT、AST。

1. 4 統計學方法 采用SPSS18.0統計學軟件對研究數據進行分析處理。計量資料以均數±標準差（ x-±s）表示， 采用t檢驗。P<0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

模型組ALT和AST水平均明顯高于空白對照組， 差異均具有統計學意義（P<0.01）；陽性對照組ALT和AST水平均明顯低于模型組， 差異均具有統計學意義（P<0.05）；5流分組ALT和AST水平均明顯低于模型組， 差異均具有統計學意義（P<0.05）；1流分組、3流分組、4流分組、6流分組、7流分組ALT和AST水平均明顯低于模型組， 差異均具有統計學意義（P<0.01）。認為該藥材肝損傷的保護作用是由此5種成分的共同作用。對5個流分進行上述成分預測， 發現1%三氯化鋁試劑及氨熏檢查呈陽性， 說明此5個流分為黃酮類化合物， 據此認為該藥材護肝作用的有效成分為歐芹根總黃酮。見表1。

3 小結

歐芹根是一種具有民族區域特色的天然作物， 由于新疆獨特的日照時間和地理環境， 使得該植物根系發達， 同時也有著獨特的藥用價值[5， 6]。歐芹根在維醫臨床已有多年歷史， 但由于目前科研開發力度相對較弱， 一直沒能被很好的應用推廣。課題組為此對其展開了研究， 希望能找出該藥作用的有效成分及相應機制， 進一步研發該藥， 提高它的應用價值。

前期實驗已經證實該藥確實有治療急性肝損傷的效果， 但起效成分目前仍不清楚， 因此本課題對其起效成分進行了篩選， 從實驗結果來看， 目前認為起效成分應該是黃酮類物質群體。

參考文獻

[1] 陳妍， 烏莉婭·沙依提， 馬亮英. 新疆維藥歐芹根總黃酮的乙醇提取工藝優選及其大孔樹脂篩選. 中國實驗方劑學雜志， 2014， 20（15）：19-21.

[2] 烏莉婭·沙依提， 陳妍. 芹菜根提取物對CCl4所致急性小鼠肝損傷的保護作用. 華西藥學雜志， 2008， 23（4）：411-412.

[3] 陳妍， 劉軍， 林伊梅， 等. 芹菜根提取物對D-氨基半乳糖所致急性肝損傷的保護作用研究. 中國藥房， 2011（35）：3272-3274.

[4] 烏莉婭·沙依提， 陳妍， 耿萍， 等.維藥芹菜根化學成分的研究.中藥材， 2007（12）：1535-1536.

[5] 陳妍， 繆娟， 高宏. 歐芹根對非酒精性脂肪肝大鼠的有效成分及機制研究. 陜西醫學雜志， 2016， 45（9）：1112-1113.

[6] 謝婧雯， 陳妍， 賈蔓菁， 等. 歐芹根總黃酮對非酒精性脂肪性肝病大鼠的治療作用及機制研究. 中國藥業， 2016， 25（20）：29- 32.

[收稿日期：2017-12-13]