對乙肝表面抗原進行定量檢測方法的研究

梁偉清

（南寧協和醫院檢驗科，廣西 南寧 530031）

在世界范圍內，有20億人感染過HBV。其中，有近4億人的病情可發展為慢性乙型肝炎[1,2]。在慢性HBV感染的患者中，約有2億患者的肝臟存在持續的炎癥反應，其體內HBV的復制較為活躍，其病情可發展為肝硬化、肝癌。我國是乙型肝炎高發的國家。HBV攜帶者可達到1.2億人，約占全世界HBV感染者的1/3。HBsAg是HBV的外殼蛋白，本身不具有傳染性。由于HBsAg的出現常伴隨HBV的存在，因此HBsAg是機體發生HBV感染的標志。研究發現，在人體感染HBV后的2～6個月內，在其血液中天冬氨酸氨基轉移酶的含量明顯升高的前2～8周，可在其血清中檢測到HBsAg。對乙肝患者進行HBsAg定量檢測在為其制定治療方案、評估其臨床療效和預后方面均具有較高的應用價值[3,4]。臨床上常用的HBsAg定量檢測法包括ELISA檢測法、TRFIA檢測法及CLIA檢測法。現就上述檢測方法進行綜述。

1 HBsAg檢測方法的概述

進行HBsAg檢測的方法可分為HBsAg定性檢測和HBsAg定量檢測兩種類型。過去，臨床上常對疑似乙肝患者進行HBsAg定性檢測。進行HBsAg定性檢測的項目包括乙肝表面抗原（HBsAg）、乙肝表面抗體（抗HBs）、乙肝表面е抗原（HBeAg）、乙肝表面е抗體（抗HBe）及乙肝表面核心抗體（抗HBc）。根據進行HBsAg定性檢測的結果可以判斷患者是否發生HBV感染，但無法了解其體內HBV的復制情況和傳染性。近年來，臨床上對乙肝患者常進行HBsAg定量檢測。HBsAg定量檢測法主要包括酶聯免疫吸附法（ELISA）、時間分辨免疫熒光分析法（TRFIA）和化學發光免疫分析法（CLIA）。

2 ELISA檢測法

ELISA檢測法是在免疫酶技術的基礎上發展起來的一種新型的免疫測定技術。該檢測法通過將已知的抗原或抗體吸附在固相載體的表面，使酶標記的抗原或抗體在固相載體的表面發生顏色反應。然后根據抗原或抗體發生顏色反應的情況判斷其是否出現相應的免疫反應。出現顏色反應的深淺與標本中抗體或抗原的含量呈正比[5]。ELISA檢測法的操作簡單，其檢測結果可受HBsAg濃度的影響。研究發現，使用ELISA檢測法對乙肝患者進行HBsAg定量檢測的假陰性率為0.7%～1.0%，假陽性率為1.0%～2.0%。因此，用ELISA檢測法對乙肝患者進行HBsAg定量檢測的效果存在一定的局限性。

3 TRFIA檢測法

TRFIA檢測法是一種新型的非同位素免疫分析方法。在對乙肝患者的血清標本進行TRFIA檢測時，用鑭系元素標記HBsAg，根據鑭系元素螯合物的發光特點，用時間分辨技術測量其熒光，同時檢測波長和時間這兩個參數，以分辨獲得信號的特點，從而實現對HBsAg進行定量檢測。TRFIA檢測法具有靈敏度高、操作簡單、重復性好、無放射性等優點。有研究指出，用TRFIA檢測法和CLIA檢測法對HBsAg的陽性標本進行定量檢測的靈敏度、準確性基本相同[6-7]。

4 CLIA檢測法

上個世紀70年代，Arakawe首先使用CLIA檢測法對乙肝患者進行HBsAg定量檢測。該檢測法是將化學發光測定技術和免疫反應相結合的一種分析方法。這使得CLIA檢測法既具有化學發光測定技術的高靈敏度，也具有免疫反應的高特異性。此外，CLIA檢測法具有試劑存放時間長、操作簡單的優點，是目前臨床上最為常用的一種對HBsAg進行定量檢測的方法。近年來，臨床上使用全自動化學發光微粒子免疫分析系統對乙肝患者的血清標本進行HBsAg定量檢測。該系統對定量檢測HBsAg的靈敏度、特異性及批內、批間的精密度均較高[8,9]。

5 討論

ELISA檢測法、TRFIA檢測法及CLIA檢測法是臨床上對乙肝患者進行HBsAg定量檢測的常用方法。ELISA檢測法的耗時長，其檢測結果易受檢測人員操作的熟練度和操作環境的影響，無法同時對大批量標本進行HBsAg定量檢測。因此，ELISA檢測法常被用于實驗室中的HBsAg定量檢測。與之相比，TRFIA檢測法和CLIA檢測法具有靈敏度高、穩定性好、操作簡單的特點，是臨床上對乙肝患者進行HBsAg定量檢測的首選方法。

參考文獻

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