細胞角蛋白7、8和10/13在不同級別宮頸病變中的表達及意義

潘嬙微，陳大可，潘嘉佳，張月輝，沙麗曉，楊潔，沈曉露，陳育梅，潘丹

子宮頸癌是最常見的婦科惡性腫瘤[1]，子宮頸上皮內瘤變（CIN）與子宮頸癌密切相關，大部分（60%）子宮頸低級別鱗狀上皮內瘤變（LSIL）可自行消退，但子宮頸高級別鱗狀上皮內瘤變（HSIL）具有癌變潛能，約20%可進展為浸潤癌，被視為癌前病變[2]。細胞角蛋白（CK）是一種細胞中間絲蛋白，在細胞分化的不同階段及不同類型的上皮細胞表達不同，目前已經發現的在人類上皮細胞中表達的就有54種亞型，但研究較多的1～20型[3]。CK的不同類型取決于其酸堿性，同時取決于其分子量和分布的上皮的類型不同。很多研究表明，在宮頸腫瘤的發生發展過程中CK的表達模式會發生改變[4-6]。本研究擬探討CK7、CK8及CK10/13在不同級別宮頸病變中的表達及意義，報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料 收集2015年1月至2017年6月浙江省溫州市人民醫院收治的行宮頸電環行切除術、宮頸錐切術或全子宮切除術患者100例，其中術后病理證實為LSIL 50例（LSIL組），術后病理證實為HSIL 50例（HSIL組）；同期收治的行全子宮切除術或廣泛子宮切除術+盆腔淋巴結清掃術患者50例，術后病理證實為宮頸鱗癌（SCC組）。3組患者均未合并其他內外科疾病，術前未進行放化療；排除宮頸病變術后復發的患者。宮頸病變的診斷依據中國子宮頸癌篩查與異常管理相關問題專家共識[2]。

1.2方法 （1）標本收集與處理。將3組患者分別收集宮頸組織標本各50份。（2）免疫組化檢測方法。將標本進行CK7、CK8及CK10/13檢測：主要試劑為鼠抗人CK7、CK8和CK10/13單克隆抗體，嚴格采用免疫組化Envision兩步法進行（抗體、Envision兩步法試劑盒均為北京中杉公司生產）。所有組織標本經10%中性甲醛固定，常規脫水以后經石蠟包埋，連續切片5～6張，每張切片約厚2 m，取其中1張做HE染色，用于核實病理學診斷，剩余切片用于免疫組化染色。具體如下：常規脫蠟至水，切片浸于pH 6.0檸檬酸緩沖液中，微波抗原修復10 min，冷卻至室溫，充分水洗，PBS浸洗，加入CK7、CK8及CK10/13一抗4℃過夜；PBS浸洗；滴加 CK7、CK8及CK10/13二抗，37℃，15 min；DAB顯色30s，蘇木素復染。采用該公司提供的陽性切片為陽性對照，用PBS代替一抗作為陰性對照。（3）結果判定：所做免疫組化切片由本院病理科專家閱片審核。CK7、CK8及CK10/13均定位于細胞質，分別將無陽性顆粒、灶狀散在性、彌漫陽性及彌漫強陽性分別定義為―、+、2+、3+，將+～3+統一歸入到陽性一列。

1.3統計方法 數據采用SPSS14.0統計軟件處理，計數資料采用2檢驗＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

CK7、CK8及CK10/13在LSIL組、HSIL組及SCC組中的表達率差異均有統計學意義（均＜ 0.01），見表 1。LSIL組 CK7、CK8及 CK10/13表達率與HSIL組及SCC組差異均有統計學意義（2≥5.87，均＜ 0.05），HSIL組 CK7及CK8表達率與SCC組差異均有統計學意義（2=5.67、5.91，均＜ 0.05），HSIL組與SCC組CK10/13表達率差異無統計學意義（2=0.70＞ 0.05）。

3　討論

CK是細胞骨架蛋白的主要成分，與上皮細胞的形態和功能息息相關[7]，而細胞的形態和功能發生變化時往往伴隨著CK表達的改變。有研究發現，CK具有極高的保守性和組織分化特異性，與上皮細胞的增殖分化密切相關[8]，細胞的增殖和分化狀態也會影響CK的表達，細胞發生惡變后CK的表達既可以發生變化也可以保持不變。癌組織和其來源的正常組織中的CK的表達方式有兩種[9]：在正常組織中不表達的CK在癌組織中表達；在正常組織中表達的CK在癌組織中不表達或表達下調。

本研究結果顯示，CK7、CK8和CK10/13在不同級別的宮頸疾病中的表達率均不同，隨著宮頸疾病的進展，CK7和 CK8在組織中的表達率逐漸增加，CK10/13表達率逐漸下降，即表達缺失率顯著增加。CK7是低分子量的CK，在炎癥和腫瘤中均扮演者重要的角色[10]。目前對于 CK7的研究主要集中在腺癌和轉移性腺癌，Chu等[4]研究了435例上皮來源的腫瘤，發現CK7在大部分腺癌中表達，然而大部分的鱗癌 CK7表達陰性，比如僅21%食管癌中表達CK7，頭頸部位的鱗癌中僅28%表達，肺鱗癌中均未見表達，但發育不良的宮頸上皮和鱗狀細胞癌往往表達CK7，發現87%宮頸鱗癌中CK7表達陽性，遠遠高于其他組織來源的鱗癌（平均20%～30%）。Smedts等[5]研究發現正常的宮頸陰道部的鱗狀細胞CK7表達缺失，異常的宮頸上皮和宮頸癌傾向于CK7表達陽性。本研究發現，CK7在LSIL組、HSIL組及SCC組中的表達率分別是20%、58%和80%，可見隨著宮頸病變級別的升高，其表達率逐漸升高。這研究結果與Smedts等[5]研究結果相似，其研究認為CK7隨著病變由CINⅠ到浸潤癌的改變，其表達會逐漸增高，并由此認為宮頸病變表達CK7則有可能進展，不表達則有可能消退或持續存在但并不進展。

表1　CK7、CK8和CK10/13在不同宮頸病變中的表達情況 例（%）

CK8是高分子量的B型CK，能在儲備細胞，宮頸腺上皮細胞及不成熟化生鱗狀細胞中表達，在成熟的化生鱗狀細胞中沒有表達[11]。本研究發現，CK8在70%的宮頸浸潤性癌組織中的表達，略高于Carrilho等[6]研究的57.1%，這種CK8在宮頸組織中表達的差異可能主要是因為檢測方法的不同，抗體不同、抗原獲得途徑不同及來源材料保存質量的差異。Carrilho等[6]研究發現CK8在正常宮頸組織中表達缺失，在CINⅢ中的陽性表達率44.4%；本研究中CK8在HSIL中的表達率為46%。Smedts等[12]研究表明CK8在子宮頸惡性轉化過程中表達，認為其如果在LSIL和HSIL病變中表達即有進行性進展的潛力。Ikeda等[13]研究發現CK8在CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ和 SCC中的表達率逐漸增加，分別是12.8%、22.6%、62.8%及71.4%，這與本研究結果相似，均發現隨著宮頸病變的進展，CK8在上皮組織中的陽性表達率增加。由此可認為 CK8在宮頸組織中表達，病變即有可能進一步進展，其是宮頸惡性轉化的一個特異性標志物。

CK10/13是鱗狀上皮分層和分化的標記，是構成上皮細胞的一種成分，是黏膜非角化復層鱗狀上皮終末分化的標志，它的表達常伴隨上皮細胞的發生、分化和形態變化，具有明顯的組織特異性[8]。因此研究CK10/13的表達在上皮疾病及鱗狀細胞癌的發生和診斷上具有一定意義。Carrilho等[6]和Smedts等[14]研究認為CK10/l3表達缺失同宮頸病變級別相關，表達缺失的發生率 CINⅢ高于CINⅠ，CK10/13表達缺失可作為CINⅢ的標志物。Maddox等[15]研究發現，CK10在宮頸浸潤癌中的表達率1%～24%，其認為CK10對于宮頸良惡性疾病的鑒別診斷有很高的特異度和敏感性，這結果與本研究的相似。本研究發現CK10/13在不同宮頸疾病中的表達率有明顯差別，隨著宮頸病變的進展，CK10/13表達率逐漸下降，特別是LSIL與 HSIL或 SCC差異均有統計學意義（均＜0.05），然而CK10/13在HSIL和SCC的表達率差異無統計學意義（＞ 0.05）。Nair等[16]和 Smedts等[14]研究發現，隨著宮頸病變級別的升高，CK13表達降低。本研究結果與上述研究結果一致認為CK10/13的表達缺失可以作為宮頸疾病惡性進展的標志物。

綜上所述，CK7、CK8的表達和CK10/13的表達缺失可作為宮頸疾病進一步進展的標志物。

參考文獻：

[1] 李亞里.HPV感染與宮頸癌前病變的臨床研究進展[J].武警醫學,2012,23(2):93-96.

[2] 魏麗惠,沈丹華,趙方暉,等.中國子宮頸癌篩查與異常管理相關問題專家共識[J].中國婦產科臨床雜,2017,18(2):190-192.

[3] Moll R,Lowe A,Laufer J,et al.Cytokeratin20inhumancarcinomas[J].Am JPathol,1992,140(2):427-447.

[4]Chu P,Wu E,Weiss LM.Cytokeratin 7 and cytokeratin20expressioninepithelial neoplasms：asurvey of 435 cases[J].Mod Pathology,2000,13:962-972.

[5]Smedts F,Ramaekers FC,Vooijs P.The dynamics of keratin expression in malignanttransformationof cervical epithelium:a review[J].ObstetGynecol,1993,82(3):465-474.

[6] Carriho C,Alberto M,Buane L,et al.Keratins8,10,13,and 17areuseful markers in thediagnosisof human cervix carcino-mas[J].Hum Pathol,2004,35(5):546-551.

[7] Lu DP,Yu KT,Takeshi Y,etal.Cytokeratin expression Patterns patterns in jaw cyst linings with metaplastic epithelium[J].Oral Pathol Med,2002,31(2):87-94.

[8] 聶敏海,龍漢安,梁尚爭,等.細胞角蛋白10.13.14和19在OLP中的表達研究[J].臨床口腔醫學雜志,2007,23(12):710-712.

[9] Siddik M,Serdar U,Metin N,et al.Reproducibilityof airwaydimensionsandtongue and hyoid positionsonlateral cephalograms[J].AmJOrthodDetofacialOrthop,2005,128:513-516.

[10]謝佳佳,郭曉華.細胞角蛋白7的表達在腫瘤及炎癥中的意義[J].國際免疫學雜志,2016,39(1):57-60.

[11]Martens JE,Arends J,Van der Linden PJ,et al.Cytokeratin 17 and p63 are markers of the HPV target cell the cervical stem cell[J].Anticancer Res,2004,24:771-775.

[12]Smedts F,Ramaekers F,Robben H,et al.Changing patterns of keratin expression duringprogressionof cervicalintraepithelial neoplasia[J].Am JPathol,1990,136(3):657-668.

[13]Ikeda K,Tare G,Suzuki T,eta1.Coordinate expressionof cytokeratin8and cytokeratin 17immunohistochemical stainingincervical intraepithelialneoplasia andcervicalsquamous cell carcinoma：an immunohistochemical analysis and review of the literature[J].Gynecologic Oncology,2008,108:598-602.

[14]Smedts F,Ramaekers F,Link M,eta1.Detection of keratin subtypes in routinely processed cervical tissue：implicationsfor tumor classificationand thestudy of cervix cancer category[J].Virchows Archiv,1994,425(2):145-155.

[15]Maddox P,Sasieni P,Szarewski A,et al.Differential expression of keratins10,17,and 19 in normal cervical epithelium,cervical intraepithelial neoplasia,and cervical carcinoma[J].Clin Pathol,1999,52(1):41-46.

[16]Nair SA,Nair MB,Jayaprakash PG,et al.Cytokeratinsand the evaluation of tumor differentiation in squamous lesions of the uterine cervix[J].Gen Diagn Pathol,1997,143(1):15-22.