HS-SPME-GC-MS法分析杜仲和杜仲葉中揮發(fā)性成分

林 杰，江漢美，盧金清

(1.湖北民族學(xué)院附屬民大醫(yī)院，湖北恩施 445000；2.湖北中醫(yī)藥大學(xué)，湖北武漢 430065)

杜仲為杜仲科植物杜仲(EucommiaulmoidesOliv.)的干燥樹皮，味甘，性溫，歸肝、腎經(jīng)，具有補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨、安胎的功效，用于肝腎不足、腰膝酸痛、筋骨無力、頭暈?zāi)垦！⑷焉锫┭⑻?dòng)不安。杜仲葉為杜仲科植物杜仲(EucommiaulmoidesOliv.)的干燥葉[1]。兩者均收載于2015版《中國藥典》。相較于杜仲皮，杜仲葉的資源豐富、易得，因此多項(xiàng)研究探討以葉代皮的可行性。有研究顯示，杜仲葉中松脂醇二葡萄糖苷、桃葉珊瑚苷、綠原酸、蘆丁、槲皮素和山柰酚的含量均高于杜仲，且杜仲葉中維生素和氨基酸的含量與杜仲基本相當(dāng)[2-4]。另有研究發(fā)現(xiàn)，杜仲中某些黃酮類化合物的種類和含量明顯與杜仲葉不同[4-5]。研究表明，杜仲揮發(fā)性成分可抗蟲、入藥或用于有機(jī)合成[6]，因此對(duì)其揮發(fā)性成分的研究很有必要。頂空固相微萃取技術(shù)(HS-SPME)是一種簡便快捷綠色的前處理技術(shù)，目前關(guān)于采用該技術(shù)對(duì)杜仲和杜仲葉的研究鮮見報(bào)道。筆者采用HS-SPME結(jié)合氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(GC-MS)法分析杜仲和杜仲葉的揮發(fā)性成分，比較這2種藥材中揮發(fā)性成分的異同，以期為杜仲葉能否替代杜仲入藥提供依據(jù)。

1　材料與方法

1.1材料杜仲購于湖北聚瑞中藥飲片有限公司，杜仲葉采自湖南省張家界市慈利縣江埡杜仲林場，經(jīng)湖北中醫(yī)藥大學(xué)生藥教研室張秀橋老師鑒定為杜仲科植物杜仲(EucommiaulmoidesOliv.)的干燥樹皮及干燥葉。

1.2儀器Agilent6890/5973型氣相-質(zhì)譜-計(jì)算機(jī)聯(lián)用儀(美國Hewlett-Packard公司)；手動(dòng)固相微萃取裝置(德國IKA公司)；65 μm PDMS/DVB萃取纖維頭(美國Supelco公司)；頂空瓶(15 mL)；電子天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)。

1.3方法

1.3.1頂空固相微萃取法(HS-SPME)。取藥材0.5 g，研碎，置于15 mL頂空瓶中，插入裝有65 μm PDMS/DVB纖維頭的手動(dòng)進(jìn)樣器，在150 ℃下平衡20 min后，繼續(xù)萃取15 min，取出，立即插入氣相色譜儀進(jìn)樣口中，進(jìn)樣口溫度為230 ℃，解吸附3 min。

1.3.2氣相色譜-質(zhì)譜(GC-MS)分析條件。

1.3.2.1GC條件。HP-5MS石英毛細(xì)管色譜柱(0.25 mm×30 m×0.25 μm)，進(jìn)樣口溫度為250 ℃，載氣為高純氦氣(99.999%)，流速0.8 mL/min，不分流進(jìn)樣。程序升溫：初始溫度50 ℃，以5 ℃/min升溫至160 ℃。

1.3.2.2MS條件。離子源為EI源；離子源溫度為230 ℃；四級(jí)桿溫度為150 ℃；電子能量為70 eV；倍增管電壓1.2 kV；接口溫度280 ℃；質(zhì)量范圍m/z35～550。

2　結(jié)果與分析

采用GC-MS計(jì)算機(jī)聯(lián)用儀分析得到杜仲和杜仲葉揮發(fā)性化學(xué)成分，經(jīng)化學(xué)工作站數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)及用面積歸一化法計(jì)算，并按各峰的質(zhì)譜圖經(jīng)計(jì)算機(jī)質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫NIST05檢索，結(jié)果發(fā)現(xiàn)(表1和圖1)，杜仲與杜仲葉中揮發(fā)性成分存在顯著差異，這種差異不僅表現(xiàn)在組成成分上，而且含量上也有較大差異。從杜仲葉中共分離出40種化學(xué)成分，鑒定出19種化學(xué)成分，占揮發(fā)性成分總量的94.72%；從杜仲中共分離出39種化學(xué)成分，鑒定出13種化學(xué)成分，占揮發(fā)性成分總量的96.83%；其中壬醛、己醛、樟腦為二者所共有。杜仲和杜仲葉2種藥材含量最高的揮發(fā)性成分均為壬醛，含量分別17.47%、13.53%。

表1　杜仲和杜仲葉共有揮發(fā)性成分

圖1　HS-SPME-GC-MS分析杜仲(a)和杜仲葉(b)揮發(fā)性成分TIC圖Fig.1　TIC map of volatile components of Eucommia ulmoides bark (a) and leaf (b) by HS-SPME-GC-MS analysis

3　小結(jié)與討論

采用HS-SPME結(jié)合GC-MS法分析杜仲與杜仲葉的揮發(fā)性成分，比較這2種藥材中揮發(fā)性成分的異同，結(jié)果顯示，杜仲與杜仲葉中揮發(fā)性成分存在顯著差異，從杜仲葉中共分離出40種化學(xué)成分，鑒定出19種化學(xué)成分，占揮發(fā)性成分總量的94.72%；從杜仲中共分離出39種化學(xué)成分，鑒定出13種化學(xué)成分，占揮發(fā)性成分總量的96.83%。其中壬醛、己醛、樟腦為二者所共有；含量最高的揮發(fā)性成分均為壬醛，具有較強(qiáng)的驅(qū)蟲作用[7-8]；共有成分己醛是食品工業(yè)中重要的風(fēng)味物質(zhì)[9]；樟腦具有殺菌、消炎的作用[10]。杜仲葉中含有較多的石竹烯(10.36%)，具有局麻、抗炎、驅(qū)蚊蟲、抗焦慮、抗抑郁等作用[11]，而杜仲中并沒有檢測到該成分。杜仲中癸醛的含量(8.85%)僅次于壬醛，研究表明，癸醛對(duì)細(xì)

菌有較強(qiáng)的抑制作用[12]；杜仲葉中沒有檢測到該成分。鑒于以上顯著差異，因此，在考慮杜仲葉代替杜仲入藥時(shí)應(yīng)慎重。

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